丁酸钠和芽孢杆菌制剂联用对彭县黄鸡屠宰性能、脂肪酸及肠道菌群的影响

李 娟， 雷春龙， 张 龙， 邱时秀， 朱佳文，吴永胜*， 许祯莹， 陈亚迎， 徐麒麟， 刘瀚扬

（1.成都市农林科学院畜牧研究所，四川成都 611130；2.西华师范大学生态研究院，四川南充 637009）

枯草芽孢杆菌属于严格需氧菌，并非肠道微生物，其可以杀灭或抑制有害微生物，调节肠道微生态平衡，改善肠道完整性和营养物质吸收效率（Jeong等，2014）。 Maruta （1996）试验表明，日粮中添加枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis C-3102），肉鸡活体的屠宰率显著提高，胴体胸肌增加，腹部脂肪减少，空肠弯曲杆菌的数量降低，感染鸡群的发病率减少。

酸化剂、益生素作为高效、无污染、无残留的保健型饲料添加剂，正逐步被应用于饲料行业。酸化剂具有降低消化道的pH、提高消化酶的活性、改善肠道菌群的作用（王冉等，2002）。关于酸化剂和益生素联用的文献报道较少，本试验研究饲料中添加丁酸钠和枯草芽孢杆菌单用和联用对彭县黄鸡肠道微生物菌群、肉质脂肪酸、屠宰性能的影响，以期为彭县黄鸡的养殖及深入研究提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 试验选用的288只健康且体重相近的100日龄彭县黄鸡（公鸡），由彭州天华禽业有限公司提供。

1.2 药品 试验所需的益生素为枯草芽孢杆菌制剂，由本实验室筛选，活菌数≥108cfu/g，其是用米糠作为载体，接种菌液，固体发酵而成。本试验所需的酸化剂为丁酸钠，购于日照东润德农牧发展有限公司，纯度为98.5%。

1.3 主要试剂 盐酸（HCl），氨水（NH3·H2O），焦性没食子酸（C6H6O3），乙醚（C4H10O），石油醚：沸程 30～ 60℃，95%乙醇（C2H6O），甲醇（CH3OH）：色谱纯，氢氧化钠 （NaOH），正庚烷 [CH3（CH2）5CH3]：色谱纯，无水硫酸钠（Na2SO4），氯化钠（Na-Cl），异辛烷[（CH3）2CHCH2C（CH3）3]：色谱纯，硫酸氢钠（ NaHSO4），氢氧化钾（KOH），均由成都市科龙化工试剂厂提供。

1.4 试验设计及饲养方式 采用单因素试验设计，随机分成4组，每组4个重复，每个重复18只鸡。Y0为对照组，饲喂基础饲粮，Y1、Y2、Y3组分别在基础日粮中添加0.05%丁酸钠、0.03%枯草芽孢杆菌、0.05%丁酸钠+0.03%枯草芽孢杆菌。试验鸡采用错叠3层小群体笼养方式进行。各试验组免疫程序按照常规免疫程序进行。自由采食和自由饮水。试验基础饲粮参照我国黄羽肉鸡饲养标准2004（NY/T33-2004）配制，试验日粮组成及营养水平见表1。试验预试期5 d，正试期47 d。

表1 试验日粮组成及营养水平

1.5 测定指标及方法

1.5.1 屠宰性能 试验结束，从每组中随机抽取体重相近的仔鸡8只 （每个重复2只），按Zhao（2012）方法进行屠宰。

1.5.2 腿肌脂肪酸检测 屠宰后取一块腿肌样品，参照GB 5009·168-2016《食品中脂肪酸的测定》方法对鸡腿肌中的脂肪酸进行测定。

1.5.3 肠道菌群检测

1.5.3.1 菌群稀释 屠宰时精确称取鸡盲肠内容物，以无菌生理盐水稀释为终浓度为10 mg/mL菌悬液，为100倍稀释母液。用0.2 mL无菌吸管精确吸取0.1 mL细菌悬液放入含有0.9 mL生理盐水的洁净灭菌试管中，然后将管内悬液混合均匀，即为10-1倍稀释菌液。另取一支吸管自10-1试管吸0.1 mL放入含有0.9 mL生理盐水的试管中，其余依次类推，最终得到 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀释的菌液。

1.5.3.2 细菌分离 培养基种类及培养方法见表2。每个稀释度菌液取0.01 mL稀释液分别接种4种培养基进行大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌、双歧杆菌的分离培养，每种稀释度检测3次。同时以生理盐水加入无菌平皿作空白对照。

1.5.3.3 计数 培养一段时间后取出培养皿，算出同一稀释度的菌落平均数，并按每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×10进行计算得到每毫升总活菌数。

表2 肠道微生物菌培养基、培养方式和条件

1.6 数据的统计分析 采用JMP10统计软件对数据进行分析，采用最小二乘分析法对四个组进行单因素方差分析，其中P＞0.05表示差异不显著，P＜0.05表示差异显著，结果表示为“平均值±标准误”。

2 结果

2.1 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对彭县黄鸡屠宰性能的影响 由表3可知，与对照组相比，日粮中添加0.05%丁酸钠组活重、腹脂重（P＜0.05）分别提高3.50%、369.30%，腺胃率（P＜0.05）降低了18.75%。日粮中添加0.03%枯草芽孢杆菌组活重、肌胃重、肌胃率（P＜0.05）分别提高4.3%、17.08%、16.33%。联用组中屠体重、全净膛重、全净膛率和半净膛率较对照组（P＜0.05）分别降低2.52%、6.95%、8.29%、6.90%，肌胃重（P＜0.05）提高15.52%。

表3 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对彭县黄鸡屠宰性能的影响

2.2 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对彭县黄鸡腿肌脂肪酸的影响 由表4可知，日粮中添加0.05%丁酸钠组较添加0.03%枯草芽孢杆菌组饱和脂肪酸十七烷酸的比例（P＜0.05）降低26.92%；添加了丁酸钠之后，总单不饱和脂肪酸含量增加，但差异不显著（P＞0.05）；添加0.03%的枯草芽孢杆菌之后，饱和脂肪酸中的硬脂酸C18：0含量（P＜0.05）降低18.39%；总饱和脂肪酸降低，总单不饱和脂肪酸、总多不饱和脂肪酸、总不饱和脂肪酸均升高，但差异不显著（P ＞ 0.05）。 二者联用后，γ-亚油酸 C18：3n6的水平（P ＜ 0.05）提高了 31.25%。

表4 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对彭县黄鸡腿肌脂肪酸的影响

2.3 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对彭县黄鸡肠道微生物菌群和pH的影响 由表5可知，与对照组相比，日粮中添加0.05%丁酸钠+0.03%枯草芽孢杆菌联用组双歧杆菌数量 （P＜0.05）提高了652.19%；添加0.05%丁酸钠组致病菌沙门氏菌的数量 （P＜0.05）降低了83.58%。日粮中添加0.03%枯草芽孢杆菌和二者联用均能提高彭县黄鸡肠道乳酸菌数量（P＞0.05），降低沙门氏菌的数量（P＞0.05）。添加不同量的丁酸钠、枯草芽孢杆菌和二者联用均未出现致病菌大肠杆菌。添加0.05%的丁酸钠和二者联用均可以降低肠道的pH（P ＞ 0.05）。

3 讨论

黄冠庆（2013）等研究认为，酸化剂和益生素联用，当添加量为0.3%时可显著降低胸肌滴水损失，添加量为0.5%时可显著提高腿肌率及显著降低胸肌滴水损失和胸肌率。潘康成（2005）等研究认为，枯草芽孢杆菌制剂能显著提高肉鸡的腿肌重和腿肌率。Mahmoud（2017）等在饲料中添加枯草芽孢杆菌发现，肉鸡胴体品质显著提高。Bai（2017）等研究表明，日粮中添加枯草芽孢杆菌对滴水损失、蒸煮损失、剪切力、L×24 h、a×24 h、b×45 min和 b×24 h值均有影响（P ＜ 0.05），添加枯草芽孢杆菌组较对照组体重增加（P＜0.05）。本试验研究结果表明，日粮中添加0.05%的丁酸钠能显著提高地方品种彭县黄鸡的活重、腹脂重，添加0.03%的枯草芽孢杆菌能显著提高彭县黄鸡的活重、肌胃重、肌胃率。而日粮中添加0.05%丁酸钠+0.03%枯草芽孢杆菌效果并不理想，可能是影响了肠道对营养物质的吸收，进而影响了屠宰性能。

表5 丁酸钠和枯草芽孢杆菌对鸡肠道微生物菌群和p H的影响

补充枯草芽孢杆菌使盲肠中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量显著增加，而大肠杆菌和葡萄球菌的数量显著减少（Yang 等，2016）。 王莹（2015）研究认为，芽孢杆菌制剂对蛋鸡育雏期肠道内大肠杆菌的影响不明显，但显著增加了乳酸杆菌的数目，也增加了盲肠内的微生物多样性。本次研究结果与前人的研究结果相似，丁酸钠和枯草芽孢杆菌联用能显著提高彭县黄鸡肠道的双歧杆菌数量。有研究证明短链脂肪酸如丁酸盐能抑制肉鸡沙门氏菌的生长（Leeson等，2005）。本试验结果表明，丁酸钠+枯草芽孢杆菌和单独添加丁酸钠均能降低致病菌沙门氏菌的数量，单独添加丁酸钠效果更明显，能显著降低沙门氏菌数量。

脂肪酸是构成脂肪的重要化学物质，是组织细胞的组成部分，其决定脂肪的理化性质，能够促进机体新陈代谢，其中不饱和脂肪酸含量更是影响肉品风味的重要因素（李慧芳等，2004）。彭县黄鸡鸡肉不饱和脂肪酸（UFA）相对含量为56.09%～60.39%。油酸、亚油酸、棕榈酸、硬脂酸是彭县黄鸡体内脂肪酸的主要组成部分，朱仁俊（2012）等的研究结果表明，饱和脂肪酸摄入过高是导致血液胆固醇升高的主要原因之一。此外，多不饱和脂肪酸中的动物必需脂肪酸亚油酸、花生四烯酸和亚麻酸可降低血液中胆固醇的含量，具有预防心血管疾病的作用，并且可参与精子的形成，同时也是线粒体和细胞膜的重要组成物质 （张秀梅等，2014）。本研究中，丁酸钠和枯草芽孢杆菌联用并没有提高总不饱和脂肪酸的比例，但是丁酸钠和枯草芽孢杆菌联用能显著提高鸡肉γ-亚油酸C18：3n6 的水平。

4 小结

本试验结果表明，单独添加0.05%丁酸钠、0.03%枯草芽孢杆菌均能提高彭县黄鸡屠宰性能、改善肠道微生物菌群和肉质脂肪酸水平，而二者联用并不理想。