新生儿细菌性肺炎外周血自然杀伤细胞和淋巴细胞亚群与病程进展的关联研究

王珍妮， 陈 丽， 龚唯鸣

细菌性肺炎是由各种致病菌引起的肺部炎症性疾病，是临床上的常见病和多发病[1-2]。新生儿在出生后不久，身体各项机能均未完善，易受到肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等致病菌的侵袭，进而表现为细菌性肺炎[3-4]。患儿发病后表现为典型的咳嗽、气促、喘息等呼吸系统症状，并伴有恶心、呕吐、腹胀、腹泻等症状，对新生儿健康造成严重威胁，若不及时治疗控制将影响患儿的正常发育[5]。现有研究显示，新生儿细菌性肺炎的发生发展过程与免疫系统有紧密关联，其中自然杀伤细胞、淋巴细胞亚群等在细菌感染性肺炎发病过程中发挥重要的免疫调节作用[6-7]。为了进一步阐释新生儿细菌性肺炎外周血自然杀伤细胞和淋巴细胞亚群与病程进展的关联，本研究以深圳市盐田区人民医院近期收治的细菌性肺炎新生儿为研究对象，对其外周血自然杀伤细胞、淋巴细胞进行检测分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选择2017年1月-2019年1月本院收治的细菌性肺炎新生儿80例为研究对象纳入观察组，纳入标准：①均为新生儿，日龄≤28 d；②患儿经胸部X射线检查、细菌学检查诊断确诊为细菌感染性肺炎；③患儿有咳嗽、肺部湿啰音等典型的肺炎症状；④患儿家属签署知情同意书，研究方案经医院伦理委员会批准。排除标准：①患儿确诊为其他类型的肺炎；②患儿入组前服用相关治疗药物影响检测指标的判断；③患儿并发其他免疫系统疾病。另选同期在本院进行健康体检的新生儿50例为对照组。

1.2 检测方法

观察组、对照组入院时分别采集空腹静脉血约3 mL，加入到含有EDTA的抗凝管中，在采血后的2 h内完成测定。在试管中分别加入单克隆抗体CD16+、CD56+、CD59+、CD3+、CD4+、CD8+，室温避光孵育20 min后，加入红细胞溶解素2 mL溶解红细胞约8 min，在TG-20G型高速离心机（常州金坛良友仪器有限公司）中离心，转速5 000 r/ min离心10 min，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤2次后加入0.5 mL含1%多聚甲醛PBS固定后采用FACSCAlibur型流式细胞仪（美国BD公司）进行检测。异硫氰酸（FITC） 荧光抗体CD16+、CD56+、CD59+、CD4+、CD8+、CD3+，全部购于美国Pharmingen公司产品，均为小鼠抗人IgG 型抗 体。

1.3 观察指标

对观察组、对照组纳入者的自然杀伤细胞包括CD16+、CD56+、CD59+以及淋巴细胞亚群包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+进行统计对比。并将观察组患者按病程进展情况分为：急性期患者47例，急性期为肺炎3 d以内，气促、有缺氧体症，发热，肺部细湿啰音及X线胸片病灶等；恢复期患者33例，恢复期通常肺炎病程5 d之后气促、缺氧消退，发热者热退，肺部啰音转粗或消失，X线胸片病灶在吸收等，比较急性期与恢复期患儿间自然杀伤细胞、淋巴细胞亚群等细胞水平差异。采用Pearson相关性检验对两组纳入者的自然杀伤细胞与淋巴细胞亚群间的相关性进行分析探 讨。

1.4 数据分析方法

以SAS 19.0进行数据处理，计量资料以（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验，计数资料以 [n( % ) ]表示，组间比较采用χ2检验，相关性检验采用Pearson检验，当P＜0.05时差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组间基线资料比较

观察组中男4 3例、女3 7例；患儿日龄9～28 d，平均 （16.82±7.82）d；患儿病原菌分布：肺炎链球菌24例、金黄色葡萄球菌21例、肺炎克雷伯菌15例、流感嗜血杆菌11例、铜绿假单胞菌9例。对照组中男27例，女23例；日龄6～28 d，平均 （15.28±7.99）d。两组性别、日龄等一般临床资料比较差异无统计学意义。

2.2 各组间自然杀伤细胞水平比较

经检测显示，观察组患儿的自然杀伤细胞包括CD16+、CD56+、CD59+等细胞水平均低于对照组；观察组急性期患儿的CD16+、CD56+、CD59+细胞水平均低于恢复期患儿，三组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组间自然杀伤细胞水平比较Table 1 Levels of natural killer cell in peripheral blood in terms of disease status

2.3 各组间淋巴细胞亚群水平比较

观察组患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于对照组，CD8+水平高于对照组；观察组急性期患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢复期患儿，CD8+水平高于恢复期患儿，三组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 各组间淋巴细胞亚群水平比较Table 2 Levels of lymphocyte subsets in peripheral blood in terms of disease status

2.4 相关性分析

经Pearson相关性分析，CD16+、CD56+、CD59+与CD3+、CD4+呈正相关，与CD8+呈负相关，见表3。

表3 自然杀伤细胞与淋巴细胞亚群相关性分析Table 3 Correlation analysis between natural killer cells and lymphocyte subsets

3 讨论

新生儿由于刚出生不久，机体的各个脏器功能均处于未完善阶段，此时机体的免疫系统未完全建立，易受到外界致病因素的侵袭出现各种感染性疾病，其中新生儿细菌性肺炎是常见的一种[8]。进一步的研究揭示，新生儿细菌性肺炎的发生发展过程与免疫系统有紧密关联，其中以自然杀伤细胞、淋巴细胞亚群等在细菌感染性肺炎发病过程中发挥重要的免疫调节作用[9-10]。自然杀伤细胞是机体重要的免疫细胞组成成分，非特异性免疫系统的主要成员之一，在参与机体的抗肿瘤、抗病毒、抵御外来细菌侵袭、免疫调节等方面发挥重要的作用。自然杀伤细胞可通过自然杀伤、抗体依赖的细胞毒作用，并且通过分泌相应的细胞因子对各种外界侵入的病毒、细菌等致病微生物进行杀灭，抑制其在体内的增殖[11-12]。自然杀伤细胞根据其表面标志物不同可分为多个亚群，其中常见的有CD16+、CD56+、CD59+等，当各个亚群的细胞呈现较高水平时，患者免疫系统对于外界致病物质的清扫能力加强，而处于较低水平时，免疫系统识别功能和清除能力也大受影响[13-14]。T淋巴细胞也是机体免疫系统重要的组成部分，能够参与机体的细胞免疫过程，主要是抗胞内外致病物质的感染、瘤细胞和异体细胞的侵袭等；其在体内主要活跃的亚型结构有CD3+、CD4+、CD8+等亚型[15-16]。

本研究对各组入选者的各项免疫细胞水平进行检测结果显示，观察组患儿的自然杀伤细胞包括CD16+、CD56+、CD59+等细胞水平均低于对照组，观察组急性期患儿的CD16+、CD56+、CD59+细胞水平均低于恢复期患儿，三组间比较差异有统计学意义。表明细菌感染性肺炎的发生，患者体内的自然杀伤细胞相比于正常人群处于较低水平，而患者在急性期与恢复期时的细胞水平也存在差异，提示自然杀伤细胞与细菌性肺炎的疾病进展过程有一定关联。随着患儿自然杀伤细胞水平的升高，细菌性肺炎病变有好转。在淋巴细胞亚群的观察中，观察组患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于对照组，CD8+水平高于对照组，观察组急性期患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢复期患儿，CD8+水平高于恢复期患儿，三组间比较差异有统计学意义，同样表明随着淋巴细胞水平的升高，细菌性肺炎病变有好转。在自然杀伤细胞与淋巴细胞亚群相关性比较中，CD16+、CD56+、CD59+与CD3+、CD4+呈正相关性，与CD8+呈负相关性，提示自然杀伤细胞与淋巴细胞亚群间存在着密切的关联，均参与并反映了新生儿细菌性肺炎的病程进展情况。

综上所述，细菌性肺炎新生儿体内的免疫系统紊乱，外周血自然杀伤细胞和淋巴细胞亚群的变化与疾病的进展恢复有密切关联。因此，通过对细菌性肺炎患儿进行免疫功能的监测，对于疾病的进展、疗效评估有参考作用。