肺泡灌洗液结核杆菌RNA和DNA检测在痰菌阴性肺结核诊断中的临床应用

陈 皋，邬碧波，吴孟征，罗万蓉，秦春俊，刘舒舒，刘建英，刘 丽

肺结核是结核杆菌感染引发的一种呼吸系统疾病，发病患者症状以低热、纳差、消瘦、咳嗽、咯痰、咯血等为主[1-2]。肺结核病程长，部分患者可呈进行性发展，早期诊断及治疗对改善疾病症状，提升患者生活质量具有重要意义[3]。痰结核杆菌培养是诊断该病的“金标准”，但该检测需要较长时间，并且对于痰检未发现结核杆菌的痰菌阴性肺结核而言，其诊断效能严重不足。近些年的研究发现，以RNA、DNA为检测标靶的分子生物检测技术可快速、高效诊断肺结核[4]。为分析这2种检测方法在痰菌阴性肺结核中的阳性率，本文选取我院接受检查和治疗的300例痰菌阴性肺结核患者进行了如下研究。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2017年3月—2019年3月在我院接受检查和治疗的痰菌阴性肺结核患者为研究对象。纳入标准[5]：①年龄≥18周岁；②诊断为痰菌阴性的肺结核患者；③无其他系统严重疾病者。排除标准[6]：①临床资料不全者；②合并其他呼吸系统疾病者。根据纳入排除标准共纳入患者300例，男155例，女145例，年龄23～58岁，平均（39.35±4.24）岁。本项研究经医院伦理委员会评审通过，且患者均知情同意。

1.2 方法 抽取患者肺泡灌洗液后，对样本进行结核杆菌RNA和DNA检测。结核杆菌RNA检测试剂盒由上海仁度生物科技有限公司提供，检测参照说明书操作，注意样本取出后30 min内送检，避免污染。结核杆菌DNA检测试剂盒选用苏州天隆生物科技公司检测试剂盒，同时选用Roche LightCycle 480进行检测。

1.3 评价指标 计算结核杆菌RNA和DNA阳性检出率，公式为：检测阳性例数/300×100%。

1.4 统计学处理 数据录入后，采用SPSS 11.5软件进行分析。计数资料用频数和百分率，并计算相应的阳性检出率。

2 结 果

结核杆菌RNA阳性检出率为63.33%，DNA阳性检出率为33.33%，前者高于后者，见表1。

3 讨 论

RNA恒温扩增实时检测技术是一种直观、快速的结核杆菌检测技术，不但可有效检出结核杆菌，还可对结核杆菌存活状态进行鉴定[7]。结核杆菌死亡后其RNA将会降解，而DNA则不会降解，因此，如RNA恒温扩增实时检测显示RNA阳性则意味着结核杆菌是活菌[8-9]。此外，RNA恒温扩增实时检测还可对结核病是否进展以及相关药物疗效进行评估[10]。结核杆菌DNA检测是通过对DNA片段进行放大扩增，并借助荧光标记探针对结核杆菌DNA扩增序列进行定量检测的一种检测方法，可有效诊断结核病[11]。但结核杆菌DNA无法鉴别菌体存活状态，也无法对结核病进展情况进行鉴别，并且结核杆菌DNA检测时容易出现交叉污染[12-13]。本研究中，结核杆菌RNA检测痰菌阴性肺结核的阳性检出率为63.33%，DNA阳性检出率为33.33%，前者高于后者，表明结核杆菌RNA检测对痰菌阴性肺结核诊断的灵敏度高于结核杆菌DNA检测。

表1 2种检测方法对痰菌阴性肺结核阳性检出率Table 1 Positive rate of 2 detection methods in sputum negative pulmonary tuberculosis

有研究发现，结核杆菌RNA检测在肺结核中的检测灵敏度以及阳性、阴性预测值均高于DNA检测，并且ROC曲线下面积最大[14]。还有研究通过痰样本结核杆菌RNA检测发现，该种检测方案所需时间短，灵敏度、阳性率均较高，与结核杆菌培养结果具有较高相似性[15]，这也佐证了本研究结论。

本研究通过对比检测，发现结核杆菌RNA检测对痰菌阴性肺结核具较高灵敏度，优于DNA检测。须要注意的是，RNA检测结果还可能受患者症状，灌洗液取样冲洗位置，样本送检时间以及样本污染与否等因素影响，这需要检测人员严格操作，或待患者症状改善后检测，以提高RNA检测效能。因为样本量小，本研究尚存在一些不足之处，有待纳入更多样本进行验证。