阑尾组织的免疫表达及其应用价值*

李明显 周 娜 何青莲 郑广娟 杜晓华 谢兴意 冯 兵

广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)，广东省广州市 510120

免疫组化技术[1]在病理诊断中的作用十分重要，免疫染色结果的稳定性和可靠性依赖于免疫组化对照的设置[2]。组织芯片是将数十个甚至上千个组织标本规则有序地排布于一张载玻片上，进行同一指标检测的原位组织学研究技术，具有容量大、高效率、低消耗、定位准确等诸多优点，适用于免疫组化的质量控制及室间评价。但是，由于组织芯片制作技术的完善离不开专业的仪器设备和种类丰富的组织标本，再者，商品化的组织芯片价格较高[3]，这些因素都阻碍了基层医院免疫组化质量控制方面的发展。为了寻找抗原标记物表达较广泛的组织以满足日常工作中免疫组化质量控制的要求，笔者对临床常见且富含多种组织成分的阑尾组织进行了相关的免疫组化染色。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取广东省中医院2018年5—10月进行阑尾切除并诊断为慢性阑尾炎、急性单纯性阑尾炎、急性化脓性阑尾炎和急性坏疽性阑尾炎患者各15例，所有患者术前均无肿瘤及免疫疾病相关病史，诊断报告由两位主治以上医师签发。

1.2 仪器设备 ES全自动封闭式组织处理仪购自美国Thermo Fisher公司，BENCHMARK@XT全自动免疫组化仪购自美国Roche公司，即用型抗体购自泉晖、迈新、中杉金桥、基因等生物公司。

1.3 方法 阑尾组织10%中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋，依次连续切片，每张玻片上均设立相应阳性质控对照组织，68℃烤片1h，免疫组化采用SP法，实验操作步骤均严格按照全自动免疫组化仪的设定程序，染色结果由2位主治医师判读。

2 结果

慢性阑尾炎、急性单纯性阑尾炎、急性化脓性阑尾炎和急性坏疽性阑尾炎组织中抗体染色阳性种类平均分别为104种、82种、65种、46种。慢性阑尾炎组织中的抗体染色阳性种类均稳定表达，其表达的种类范围涵盖了其余3种急性阑尾炎组织中抗体染色阳性的所有种类，图1。实验中慢性阑尾炎组织抗体染色阳性的具体情况汇总如下：

ATRX、Calretinin、CK、CK7、CK8、CK18、CK19、CK20、CK-LMW、CEA、E-Cadherin、EMA、CDX-2、Villin、β-catenin表达于腺上皮细胞；BCL-2、BLC-6、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD15、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27、CD30、CD35、CD38、CD43、CD45、CD45RO、CD57、CD61、CD68、CD75、CD79a、CD99、CD117、CD138、CD163、CD207、CDK4、C-MYC、CyclinD1、CXCL13、FLI-1、Galectin-3、IgG、IgG4、INI-1、Ki67、kappa、Lammda、MAC387、MLH1、MSH2、MSH6、MUM-1、P120、PAX5、PAX8、PD-1、PMS2、SOX-11、TIA-1表达于黏膜下层淋巴组织细胞；CD31、CD34、D2-40、ERG、FactorⅧ、VEGF表达于血管及淋巴管的内皮细胞；AAT、AACT、CD68、CollagenⅣ、Lyosozyme、Mac387、Vimentin表达于黏膜下层的组织细胞；Caldesmon、Calponin、Desmin、HHF35、MSA、SMA、SMMHC表达于肌层平滑肌细胞；CD56、CgA、NF、NSE、Syn、S-100表达于肌层神经纤维细胞；CK(H)、CK5、CK5/6、MC表达于阑尾浆膜。

图1 慢性阑尾炎不同组织结构的免疫表达

A.S-100神经细胞胞浆阳性 20×；B.MSA肌型细胞胞浆阳性 20×；C.CD7增生反应性T细胞细胞膜阳性 20×；D.CEA腺上皮胞浆阳性 20×。

3 讨论

免疫组织化学技术已成为病理诊断中必不可少的辅助工具，近年出现的组织芯片技术通过科学合理的设计使得大规模的免疫组化质量控制工作变得简便易行，但组织芯片技术在开展过程中仍然存在一些问题。首先，组织取材的大小及取样深度[4]能否真实反映异质性肿瘤的全部信息是芯片设计中经常遇到的问题；组织固定、处理时间、包埋条件及自身硬度的差别也会影响组织芯片的制作质量；组织芯片的组织来源尤其是少见或罕见的组织标本收集十分困难，因此组织芯片技术的推广应用具有一定的难度。

阑尾炎是一种临床常见病，根据病程常分为慢性阑尾炎和急性阑尾炎，急性阑尾炎包括急性单纯性阑尾炎、急性化脓性阑尾炎、急性坏疽阑尾炎三种主要类型，手术摘除的阑尾组织是病理科常见的病理标本。阑尾由上皮组织、黏膜下层、肌层组织和淋巴组织四部分组成，含有上皮、淋巴组织、平滑肌、间质、神经等不同胚层发育而来的各种组织[5]，能够表达多种抗原，可作为质控对照组织用于大部分常用抗体的检测。本实验通过比较不同类型的阑尾炎组织，发现抗体染色阳性的稳定表达及表达种类与患者的性别和年龄无关，而与阑尾组织的坏死程度相关。慢性阑尾炎组织因无坏死成分，抗体染色阳性的种类具有一致性，均为104种；而急性阑尾炎组织由于发生了不同程度的坏死，以间皮、腺上皮细胞及黏膜下淋巴组织影响最严重，抗体染色阳性的种类均少于慢性阑尾炎组织，即使同一类型的急性阑尾炎组织抗体染色阳性的种类因坏死程度的不同而存在一定差异，因此慢性阑尾炎组织可以作为一种简易而又高效稳定表达的质控对照组织。在确认将慢性阑尾炎组织作为合格的质控对照组织前需进行HE染色观察判断，以保证所选的组织包含上皮组织、黏膜下层、肌层组织和淋巴组织，而且包含至少1个淋巴滤泡。实验中发现，当阑尾组织管径≥1cm时，沿组织切面的直径切开可以得到两个合格的质控对照组织[6]。因此可以将阑尾组织与其他类型的组织进行组合，以进一步扩大新型组合的组织芯片的免疫表达种类，为免疫组化质量控制工作带来更多方便。在实际工作应用中尚需要注意以下几点：(1)需在病理报告工作完成后再对阑尾组织进行质控对照实验，同时尽量避开含粪石的组织或清洗干净，以便于切片制作。(2)阑尾组织每次制备200张组织切片后都应将最后一张切片进行HE染色，以确定制备的质控对照切片合格和剩余组织结构的完整性及变化趋势，为下次质控对照工作做好随时调整的准备。(3)质控对照切片制备数量以满足1周的工作量需求为宜，且需放置在4℃冰箱保存[6]。(4)定期更换新鲜固定液，24～48h后再进行脱水处理，以防止固定不足影响抗体染色的稳定表达。

总之，慢性阑尾炎组织可表达种类广泛的抗原，与组织芯片相比，具有组织来源丰富、制作简单、成本低的优点，因此利用阑尾组织制作免疫组化的质控对照是一种简单实用而又高效的方法，不但适用于基层医院，其他医院也可以参考借鉴，值得推广。