AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测乙肝表面抗原的性能评价

邵淑丽 丛海燕 曲业敏 耿建利 孙胜波 王明义*

中国是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染高发区， 该病毒感染的临床血清学标志物是乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)。HBsAg浓度与感染水平和疾病严重程度大致相关，据调查，HBsAg在人群中的携带率已高达15%，在全球范围内普遍流行，且HBV感染的流行率约为3.5%[1-2]。HBV感染常引起慢性肝炎的发生，最终可能发展为肝硬化和肝癌[3]。因此，实验室准确和及时诊断HBV感染对其治疗和预后有重要的临床意义。

目前，HBsAg的检测多采用化学发光分析法，而国内化学发光免疫检测起步较晚，医院多使用国外仪器及配套试剂，检测成本高，患者经济负担重。基于此，本研究对AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测HBsAg的性能进行评价。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集2019年1-3月威海市立医院125例患者的125份血清检测标本，对AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪定量检测项目HBsAg的精密度、线性范围、符合率以及携带污染率进行性能评价，以雅培i2000型全自动化学分析仪检测HBsAg的结果为对照，评价AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测HBsAg的性能。

1.2 仪器与试剂

AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪(威海威高生物有限公司)及HBsAg配套试剂及标准品(批号20190122)、质控品(批号20181105)均购自北京康彻斯坦生物公司。i2000型全自动化学分析仪(美国雅培)及HBsAg配套试剂(批号93097L100)、标准品(批号88550FN00)、质控品(批号81216A)均购自上海昆涞生物科技有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 精密度

室内质量控制均为在控情况下进行HBsAg批内精密度及批间精密度评价。①批内精密度评估：分别收集低值、高值2个水平的血清，即水平1(C1)、水平2(C2)，将各水平血清充分混匀后每个水平重复测定20次，计算标准差(standard deviation，SD)、变异系数(coefficient of variation，CV)值；②批间精密度评估：对稳定分装后的C1、C2样本每日进行2个批次，每次重复5次，连续测试2 d；③判定标准：不精密度CV值小于或等于厂商给定的10%为符合要求。

1.3.2 线性检测范围

AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪的线性范围为0～400 IU/ml。选择一份HBsAg低浓度的患者血清标本和一份HBsAg高浓度的患者血清标本，低浓度血清标本接近检测范围下限，高浓度血清标本接近检测范围上限，患者低值血清(L)标本与患者高值血清(H)标本按比例关系配置成系列浓度血清(5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H)。对线性样本在检测系统上检测，每个样本重复测定3次，计算平均值。将实测值与预期值进行比较，以预期浓度值为横轴，实际测得浓度值均值为纵轴做线性回归图，计算回归方程：Y=ax+b与相关系数r。相关系数r2≥0.95为符合要求。

1.3.3 准确度

AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪与i200型分析仪0检测仪器间的比对，以i2000型分析仪检测结果为对照，在AutolumiS3000型检测系统上对样本进行检测，每个样本测试1次，评价两者结果的一致性。

1.3.4 携带污染率

收集HBsAg新鲜高值患者血清(H)标本、低值患者血清(L)标本各1份，依次测高值3次(H1，H2，H3)、低值3次(L1，L2，L3)，携带污染率计算为公式1：

携带污染率＜1%为可接受。

1.4 统计学方法

数据使用Microsoft Excel进行处理，计算均值、SD、CV、回归方程及相关系数等。

2 结果

2.1 精密度验证

该项目低、高值样本的批内精密度分别为6.16%和3.70%，批间精密度分别为6.86%和5.62%，符合临床要求(见表1)。

表1 HBsAg批内和批间精密度结果

2.2 线性检测范围实验

图1 AutolumiS3000型分析仪检测HBsAg的线性范围回归曲线

2.3 准确度

检测125例患者的125份血清标本，以i2000型分析仪检测结果为对照，AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测的定性结果与i2000型分析仪的阳性值符合率为97%，阴性值符合率为100%，总符合率为98.4%，符合AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪的性能要求(见表3)。

表2 AutolumiS3000型分析仪HBsAg的线性范围检测结果

表3 两种分析仪HBsAg检测结果对比

2.4 携带污染率测定

将高值血清和低值血清按照H1、L1、H2、L2、H3及L3测定， 并计算携带污染率，结果为0.006%(见表4)。

表4 携带污染率测定结果

3 讨论

乙型肝炎是慢性肝炎的主要病因，全球约有4亿感染者面临发展为肝硬化和肝癌的风险[4]。当HBsAg存在时个体可能具有传染性，因此对HBsAg的敏感、准确检测是HBV感染诊断和预防疾病传播的关键。

随着医疗技术的进步，目前检测HBsAg的方法有多种，如酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、金标法及化学发光法，后者检测的灵敏度、特异度均较高，已成为医院内的主流检测方法[5]。为确保国产AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测结果的准确可靠，本研究对其检测HBsAg的性能进行验证，并按厂商规定标准评价其性能是否能够满足临床实验室要求。

精密度是方法学评价的基础，也是检测系统的基本分析性能之一，因此对精密度的验证必不可少[7-8]。本研究实验结果表明，AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪对HBsAg的检测精密度较好，其高值、低值样本批内精密度(3.70%、6.16%)和批间精密度(5.62%、6.86%)，均低于仪器厂商规定标准10%，且在允许范围之内，表明该仪器的检测重复性较好，结果稳定可靠。在线性检测范围验证中，AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测HBsAg的线性相关系数为0.9975，＞0.95，线性评价相关性良好。在准确度实验中，其与i2000型分析仪同时检测125份标本时，两者检测结果总符合率为98.4%。但有研究发现，不同型号及厂商的免疫检测仪器测定HBsAg结果符合率为94%，但本实验符合率高，表明该仪器检测结果准确性高，仪器性能较好，也有可能与操作人员、实验环境和试剂存放时间等因素有关[6]。

在自动化检测仪器检测中，加样针重复使用，虽经过多次清洗，但也可能存在交叉污染的可能性。本研究通过携带污染率实验可评价检测结果受到上一样本的影响，且携带污染率为一个常数，不受前后两样本浓度差值大小的影响，能有效反映检测系统携带污染的可能[9-10]。本研究实验中的携带污染率为0.006%，表明该仪器的污染率低，前后两样本间的干扰小，可满足实验室检测要求。

4 结语

AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪的成功研制可大幅降低实验室检测成本，并提高我国自主研发技术水平，对国内仪器自动化研究有重要意义。本研究通过对AutolumiS3000型微粒子化学发光分析仪检测HBsAg的主要性能指标进行验证及评价，证实该仪器的精密度、正确度高，线性范围宽，测定结果稳定性好，故HBsAg的检测可满足临床诊断和科研需要，有较好临床应用前景。