ADAM12L在胃癌中的表达及临床意义

王艳平，赵 静，纪元博

胃癌在临床比较常见，病死率较高，特别是在发展中国家，是全球癌症相关死亡的第三大原因。胃癌的预后通常较差，特别是晚期患者[1]。目前，晚期胃癌的常规治疗包括手术切除和围手术期化疗[2]。用于胃癌诊断和治疗的生物标志物，包括碳水化合物抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、CA19-9和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)，都存在敏感性和特异性问题。因此，迫切需要进一步研究揭示遗传改变，鉴定新的生物标志物以及探索与胃癌相关的途径[3]。解整合素—金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAMs)是30多种蛋白质的大家族，属于锌依赖性蛋白酶，具有黏附、融合和信号传导活性的多结构域蛋白[4]。已有文献显示，ADAM12L在乳腺癌等中高表达[5]，但其在胃癌中表达情况鲜有报道。本研究采用qRT-PCR检测了ADAM12L在胃癌组织以及癌旁组织中的表达情况，并分析其与胃癌临床病理特征之间的关系，为临床治疗提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2013年5月至2015年5月在我院外科行普通外科切除的96例胃癌患者，均经病理确诊。术前均接受化疗和放疗，其中男57例，女39例，年龄24～81岁，中位年龄57岁，见表1。胃癌组织和癌旁组织切除后，放入液氮罐-80 ℃冻存。

1.2 qRT-PCR测定ADAM12LmRNA表达情况Trizol提取癌组织、癌旁组织总RNA，测定纯度。按照逆转录试剂盒说明书逆转录生成cDNA。采用light cycleR 96实时荧光定量PCR仪(Roche Diagnostics，德国)进行基因扩增，引物序列由Santa Cruz公司提供。ADAM12L上游：5’-GAACCATCACCCTGCAACCT-3’，下游：5’-AAGCCTAGCTAGAGGACCGT-3’，产物107 bp。β-actin上游：5’-CAAGCCGTAGGACCCAGTTT-3’，下游：5’-CACAATGACGTGTTGCTGGG-3’，产物232 bp。采用相对定量2-△△Ct法比较目的基因水平。

1.3 Western blot方法检测蛋白的表达常规方法提蛋白质，调整各样本蛋白总量，参照说明书进行SDS-PAGE凝胶电泳，参照说明分别孵育一抗和二抗，Bio-Rad凝胶成像系统成像拍照，以β-actin为内参分析待测蛋白相对表达值。

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织ADAM12LmRNA表达癌组织的ADAM12LmRNA表达水平为(3.12±0.87)，癌旁组织ADAM12LmRNA表达水平为(1.02±0.57)，癌组织的ADAM12LmRNA表达水平明显高于癌旁组织ADAM12LmRNA的表达水平(P<0.05)。

2.2 癌组织和癌旁组织ADAM12L蛋白表达癌组织的ADAM12L蛋白表达水平为(2.08±0.35)，癌旁组织ADAM12L蛋白表达水平为(0.82±0.25)，癌组织的ADAM12L蛋白表达水平明显高于癌旁组织ADAM12L蛋白表达水平(P<0.05)，见图1。

1：癌旁组织；2：癌组织。图1 Western blot方法检测蛋白的表达

2.3 ADAM12L表达与胃癌临床病理特征表1显示，ADAM12L基因表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P>0.05)，而与组织学分级、临床分期、淋巴结转移、浸润程度存在一定的相关性(P<0.05)。

表1 ADAM12L表达与临床病理特征的关系 例

2.4 生存率比较以96例胃癌组织中ADAM12L mRNA表达量的中位数3.12为界，≥3.12为高表达组，<3.12为低表达组。ADAM12L基因高表达患者的36个月存活率为79.17%(9/24)，低表达患者的36个月存活率为56.95%(41/72)。两组整体生存曲线分布比较，差异有统计学意义(P<0.05)。其中低表达的患者生存状况要明显好于高表达患者。见图2。

图2 生存曲线

2.5 多因素Cox回归分析Cox逐步多因素分析显示，组织分学分级、临床分期、淋巴结转移、浸润程度和ADAM12L水平是重要的预测不良事件的指标。

表2 多因素Cox回归分析

注：该Cox回归模型还包括了年龄、性别、肿瘤大小等。

3 讨论

人ADAM12基因位于染色体10q26上，编码两种不同形式的蛋白质：跨膜形式，ADAM12L和剪接分泌形式ADAM12S，两者都是活跃的金属蛋白酶[6]，其中ADAM12L与肝癌、卵巢癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌等的发生、进展相关[7]，但尚没有有关胃癌的报道。本研究结果表明，ADAM12LmRNA、蛋白在胃癌组织中高表达，提示ADAM12L的高表达可能促进了胃癌的发生和进展。ADAM12L基因表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小不相关(P>0.05)，而与组织学分级、临床分期、淋巴结转移、浸润程度存在一定的相关性(P<0.05)。有研究显示，基底细胞样乳腺癌组织的ADAM12L蛋白与mRNA水平明显高于癌旁组织，且与淋巴结转移和临床分期存在一定的相关性[7]。本研究结果与其一致，说明ADAM12L表达水平可以作为临床诊断、预测以及疗效监测的新标志物。

恶性肿瘤的发生和进展包含了多因素、多阶段的过程，并由多种因素彼此作用[8-9]。研究显示，ADAM12高表达与肿瘤进展程度有关，并与其他指标存在关联性。Narita D等采用定量逆转录聚合酶链反应免疫组织化学证实，ADAM12L在肿瘤细胞和肿瘤周围成纤维细胞中显示出中度至强度的免疫表达，其中导管癌具有更高的ADAM12L表达[10]。Wang J等通过免疫组织化学和Western印迹检查蛋白质水平，发现ADAM12L和ADAM12S参与肿瘤侵袭。此外，ADAM12L被发现与垂体腺瘤中Ki-67增殖指数呈正相关[11]。这都提示了ADAM12 的表达上调是肿瘤的发生和进展的重要因素[12]。由于ADAM12对细胞黏附作用存在一定的影响，而细胞黏附促进了肿瘤的发生和进展，由此说明ADAM12 表达上调可能通过细胞黏附作用促使胃癌转移[13]。本研究3 a随访显示，ADAM12L基因高表达患者的36个月存活率明显低于低表达的患者，提示ADAM12L与患者的生存期相关。Aghababaei M等研究发现，ADAM12L和ADAM12S在人体内高度表达，促进细胞迁移和侵袭，提示ADAM12L可能在调节增殖、侵袭行为方面发挥核心作用[14]。本研究通过Cox逐步多因素分析显示，组织分学分级、临床分期、淋巴结转移、浸润程度和ADAM12L水平是重要的预测不良事件的指标，这也间接说明ADAM12L可以反映胃癌患者预后，并可以作为胃癌治疗的新靶点。

总之，ADAM12L无论是在基因水平还是蛋白质水平方面，其在胃癌组织表达均上调，而且其上调与胃癌的发生、进展以及临床预后密切相关，提示ADAM12L可以作为判断胃癌进展、预后的新指标。