HPLC法同时快速测定酱油中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜

廖敏，侯娇艳，刘亚琴，张竹阳，万凤英

(德阳市产品质量监督检验所，四川 德阳 618000)

酱油是以大豆、面粉等粮食作物为主要原料的传统调味品[1]。为了保持酱油的鲜度，延长其保存期，常在酱油中添加苯甲酸钠、山梨酸钾等食品防腐剂[2], 但用量过多会对人体有一定的毒害作用。而安赛蜜是酱油中常用于改善口感的一种甜味剂。苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜是目前我国食品中常用的几种人工合成防腐剂和甜味剂。对于食品添加剂的用量，我国均有严格的规定。GB 2760—2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定酱油中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜的使用限量均为1.0 g/kg，而糖精钠则不允许在酱油中添加使用。目前对酱油中防腐剂和甜味剂的检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、离子色谱法[3]。其中，液相色谱法对样品前处理有多种方法，比如加亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀剂、分散液液微萃取、固相萃取等。而本方法采用纯水提取样品，简化样品前处理，加快了分析速度，操作简易，灵敏度高，回收率好，建立了简便、有效的测定方法。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂

苯甲酸质量浓度为1.00 mg/mL，山梨酸质量浓度为1.00 mg/mL，糖精钠质量浓度为1.00 mg/mL，安赛蜜质量浓度为1.00 mg/mL：购于中国计量科学研究院；甲醇(色谱纯)；乙酸铵(分析纯)；实验室用水为超纯水系统制备。

1.1.2 乙酸铵溶液

称取1.54 g乙酸铵，加水溶解并定容至1000 mL。

1.1.3 仪器

高效液相色谱仪(配有岛津LC-20AT泵、SIL-20A自动进样器、CTO-10Asvp柱温箱、二极管阵列检测器PDA)、超声清洗仪。

1.2 标准系列溶液工作的配制

1.2.1 混合标准溶液的配制

用移液枪准确量取苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜标准储备液5 mL到50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。此溶液浓度为0.1 mg/mL。

1.2.2 标准曲线

临用前用水将0.1 mg/mL混合标准溶液逐级稀释，配成质量浓度为0.01，0.025，0.05，0.1 mg/mL的标准系列工作溶液。

1.3 色谱条件

色谱柱：ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为0.02 mol/L乙酸铵-甲醇(体积比为95∶5)；流速为1.0 mL/min；柱温为35 ℃；检测波长为230 nm；进样量为10 μL。

1.4 样品处理

称取大约2 g样品(精确到0.0001 g)，置于50 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀，经0.22 μm滤膜过滤，滤液待上机测定。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

由二极管阵列检测器获得的光谱图可知，苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜的最大吸收波长在190～250 nm之间，综合考虑4种化合物在紫外区的检测灵敏度，本实验选择230 nm作为检测波长。

2.2 流动相和流速的选择

依据国标GB 5009.28—2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》采用的流动相为0.02 mol/L乙酸铵溶液-甲醇(体积比为95∶5)；流速为1.0 mL/min。经试验发现此方法对苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜的分离效果很好，能实现基线分离，灵敏度高，方法简单，故采取此法。苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜混合标准溶液色谱图见图1。

图1 混合标准溶液(0.1 mg/mL)液相色谱Fig.1 Liquid chromatography of the mixed standard solution (0.1 mg/mL)

2.3 线性范围和检出限

按所选择的色谱条件下对一系列不同质量浓度的混合标准溶液进行色谱测定，以各组分的质量浓度和峰面积绘制标准曲线，其线性关系、相关系数、检出限见表1。

表1 线性关系和检出限Table 1 Linear relations and detection limits

由表1可知，各组分的线性方程、相关系数良好。

2.4 方法的回收率和精密度

按1.4的方法制备加标样品，在线性范围内加入一定量的标准品做加标回收实验。每个样品平行测定6次，计算4种添加剂的回收率和精密度，结果见表2。平均回收率在90%～104%，相对标准偏差均小于3%，测定结果令人满意。

表2 回收率和精密度(n=6)Table 2 Recovery rate and precision (n=6)

续 表

3 结论

食品添加剂作为一种非营养物质，少量添加即可改善食品外观、风味和组织结构[4]，但超量或违规使用添加剂的现象时有发生。为了保证食品安全，国内外学者一直在进行着不懈的探索[5]。目前，我国酱油每年生产量超过600万吨，约占世界总产量的60%[6]。为确保其安全，需要建立高效、快捷的食品添加剂检测方法。而本方法通过高效液相色谱同时测定酱油中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜，回收率在90%～104%，相对标准偏差均小于3%，简化了样品前处理，具有操作快速、简便、准确等优点，适合酱油中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜的检测。