多瘤病毒SV40、BKV及JCV在健康成人中的感染率

龙柳艳 韦晓谋

（广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院 健康管理部体检科 广西 柳州 545005）

多瘤病毒是一类可以感染人类的、无囊膜的正二十面体小DNA病毒[1]，主要包括猴多瘤病毒（SV40）、人多瘤病毒（BKV）和JC病毒（JCV）等3种病毒[2]。多瘤病毒呈全球性分布，在人群中广泛传播[3]。我院研究室调查研究显示BKV在广西瑶、侗、苗、壮等少数民族外周血白细胞中存在较高感染率[4]。为了进一步了解多廇病毒SV40、BKV及JCV在健康人群血液标本中的感染率情况，我们收集了1000例健康成人的血液标本，用巢式PCR方法扩增多瘤病毒的保守区编码序列，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

随机选取到我院参加健康体检的健康成人1000例，男女各半，年龄不限，收集上述研究对象静脉血3ml存于EDTA抗凝管。

1.2 仪器设备材料

设备：DNA核酸分析仪、DNA电泳仪、Pe5700-PCR仪、日立低温高速离心机、日立低湿超速离心机旋涡混旋器、及凝胶成像系统等分子生物学仪器，BKV-DNA、SV40-DNA、及JCV-DNA定性试剂。

1.3 操作方法

1.3.1 具体操作过程 随机选取到我院参加健康体检的健康人员1000例，男女各半，年龄不限。收集受试者空腹肝素抗凝静脉血3ml，尿液10ml。分离PBLs，将细胞浓度调整为105/ml浓度，200μl/管分装，提取基因组DNA。

PCR反应检测SV40基因：上游引物5`-GCGTGACAGCCGGCGCAG CACCA-3`，下游引物5`-GTCCATTAGCTGCAAAGATTCCTC-3`（由上海申能博彩合成），反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，72℃7min，扩增目的片段为487bp。取扩增产物于2%琼脂糖凝胶进行电泳，（阳性质控标本购自解放军总院），50bp DNA Ladder购自申能博彩。

PCR反应检测BKV基因：PCR扩增BKV－DNA序列，2.5%琼脂糖凝胶电泳分离PCR结果，第一次PCR扩增：得到176bp DNA产物，第二次PCR扩增：得到149bp的DNA片段，与预期结果一致。

PCR反应检测JCV基因：上游引物5`-CCCCATACCAACTTAGC TTTC-3`，下游引物5`-CCAATTTGTAAGGCAGATAG-3`（由上海申能博彩合成），反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，72℃7min，扩增目的片段为251bp。取扩增产物于2%琼脂糖凝胶进行电泳。

1.3.2 观察指标及方法 观察指标：在琼脂糖凝胶电泳中，在相应区域内出现特异性片段为阳性，无特异性片段为阴性。

观察方法：全部PCR扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分析，检测是否有特异性片段产物产生。

1.3.3 结果判断标准 采用PCR扩增样本中的多瘤病毒DNA，在琼脂糖凝胶电泳中，在相应区域内出现特异性片段为阳性，无特异性片段为阴性（参见《全国临床检验操作规程》第3版）。通过检测健康成人血标本中多瘤病毒SV40、BKV及JCV的DNA，检测其阳性率；并统计分析不同性别、不同年龄组健康成人血标本多瘤病毒SV40、BKV及JCV的检出率及其差别有无显著性区别。

1.4 统计学方法

应用PENS3.1软件系统分析，计数资料的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

健康成人血标本中多瘤病毒SV40-DNA、BKV-DNA、JCV-DNA的阳性率较高，分别是：23.5%、57.2%、32.1%。不同性别组、不同年龄组差异无显著性意义（P＞0.05），见表1、表2。

表1 不同性别多瘤病毒的感染率[n（%）]

表2 不同年龄多瘤病毒的感染率[n（%）]

3.讨论

多瘤病毒是正常细胞异常增殖、分化的一类DNA病毒，因其能诱导动物产生肿瘤而得名，当人体检免疫功能低下，HIV感染者或移植等患者中，多瘤病毒可再度激活，引起相关疾病。如HIV患者合并JCV相关的进行性多灶性白质脑病（PML）；肾移植后病人并发BKV相关性肾病（BKVN）等等，目前研究认为多瘤病毒感染和人类多种疾病相关：出血性膀胱炎、间质性肾小球肾炎、输尿管狭窄、血管病变、肺炎、脑炎、视网膜炎甚至多器官功能衰竭。

多瘤病毒的传播途径尚未完全阐明，目前国内在不同地域和不同人群中多瘤病毒感染的发生率的研究报道也较少。正常人群原发性多瘤病毒感染常发生于幼年时，常常无明显的临床症状，病毒不能完全被机体的免疫系统排除，而潜伏在肾组织和PBLs中。但多瘤病毒抗体对多瘤病毒再次激活并无明显抵抗作用，当HIV感染者和病人免疫功能下降时，尤其是T细胞功能低下的患者中感染的多瘤病毒可反复激活，其子代病毒开始大量复制，导致肾功能减退乃至肾功能丧失、进行性脑白质病（PML）等各种严重病发症。

为研究多瘤病毒SV40、BKV、JCV在健康人群中的感染率，课题研究组在我院体检中心随机选择1000例健康受检人员EDTA抗凝静脉血3ml在我院检验科PCR实验室由专业技术人员进行PCR检测比较。结果提示：多瘤病毒SV40、BKV及JCV在柳州地区健康人群中存在较高的感染率，证实了PBLs是多瘤病毒在体内的潜伏细胞及传播载体，应加强对多瘤病毒条件致病性的认识，积极防治、减少多瘤病毒相关性疾病的发生率。