紫外-可见分光光度法测定刺玫果中总黄酮的含量

李仁杰，丁建秋，姜玮伦，姚慧敏*

(1.通化师范学院吉林省重点实验室长白山药用植物研究实验室，通化134002；2.吉林省白山市第七中学，白山134700）

刺玫果为蔷薇科蔷薇属植物山刺玫（Rosadavurica Pall.）的成熟果实，又名野蔷薇果，广泛分布于东北及内蒙、山西等省。该果实性温，味酸，营养丰富，民间大量采食或用于泡茶、泡酒等[1]。刺玫果所含大量活性成分均具有极高的药用价值，在抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、对心血管系统的作用等方面的研究都取得了进展[2～7]。目前，刺玫果正在作为一种天然保健药物被日益重视和广泛开发，市场上已出现由刺玫果原料为主研制的保健食品，如果汁、果酒、果醋等[8]。

目前文献中对于刺玫果及其保健品总黄酮的含量测定方法主要为高效液相色谱法[9～10]和紫外-可见分光光度法。与高效液相色谱法相比较，紫外-可见分光光度法具有适用性较广、操作简单、测试时间短、精密度和准确度较好等特点，在中药总黄酮的含量测定上有着不可替代地位。因此，本文以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法对刺玫果中总黄酮的含量进行测定，以便对刺玫果及系列产品进行质量控制。

1 仪器与试药

紫外分光光度仪 （上海仪电分析仪器有限公司，INESA-L6）；电热套（北京中兴伟业有限仪器公司）

芦丁（中国药品生物制品检定所）；刺玫果（批号：161106、161107、161108）采自吉林省通化市长白山区，经通化师范学院生命科学学院朱俊义教授鉴定为刺玫果）；试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取在120°C干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置10mL容量瓶中，加70%乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

准确称取刺玫果粉末10g，加适量水浸泡1.5h，按料液比为1：10进行煎煮、提取温度为80℃进行煎煮，煎煮3次，每次煎煮1.5h，滤过，合并3次煎液，浓缩至100mL，取浓缩液5mL至10mL容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 溶液的显色

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各1mL，分别置25mL量瓶中，各加70%乙醇至6mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇勻，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10mL，再加70%乙醇至刻度，摇勻，放置15min，以相应试剂为空白，进行检测。

2.3 测定波长的选择

精密量取对照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法进行显色，以相应试剂为空白，在400～800nm波长范围内进行扫描。对照品溶液在510nm有较大吸收，故确定芦丁测定波长为510nm。

2.4 标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液 l、2、3、4、5、6mL，分别置25mL量瓶中，按照2.2中方法进行显色，以相应试剂为空白，于波长510nm下进行检测。以对照品浓度C为纵坐标（X），吸光度A为横坐标（Y），进行线性回归。芦丁在8～48μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性回归方程为y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。

2.5 精密度实验

精密量取对照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法进行显色，连续测定5次，测得吸光度值，RSD为0.54%，结果表明仪器精密度良好，可满足实验测定要求。

2.6 稳定性实验

精密量取对照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照 2.2 中方法进行显色，室温放置，分别于 0、2、4、6、8、12h，测定吸光度值，RSD为0.73%，结果表明，溶液显色后放置12h内稳定性良好。

2.7 重复性实验

取同一批刺玫果药材（161106批），依次按2.1和2.2项下方法操作，测得吸光度值，按标准曲线计算样品含量，RSD为0.56%，结果表明本方法样品重复性良好。

2.8 回收率实验

精密称取已知含量的刺玫果10g，共6份，依次按照2.1项下方法制备供试品溶液。取6份供试品溶液各1mL，精密加入浓度为200μg·mL-1芦丁对照品3mL，依次按2.2项下方法操作，测得吸光度值，将吸光度值带入线性回归方程，计算回收率，结果见表1。

表1 刺玫果回收率测定结果

刺玫果平均加样回收率分别为100.387%，RSD为0.85%，加样回收率符合含量测定要求。

2.9 含量测定

分别取三批刺玫果各10g，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，依次按2.2项下方法操作，测得吸光度值，按外标法计算含量，刺玫果含量测定结果见表2。

表2 刺玫果含量测定结果

3 讨论

黄酮类化合物是药用植物的主要有效成分，具有重要的药用价值。近年来国内的大量研究表明刺玫果具有抗衰老，防治心血管疾病等作用，增强免疫作用，保肝作用和预防癌症等作用[11～13]。

本文以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法对刺玫果中总黄酮的含量进行测定，实验结果表明，芦丁在8～48μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性回归方程为y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。经计算刺玫果中总黄酮平均含量为11.820mg·g-1。通过方法学考察说明仪器精密度好，方法重现性好，样品经显色后的12h内吸光度较稳定，该方法简便、准确，可以用于刺玫果的质量控制。