卵巢肿瘤患者尿液中间皮素联合人附睾蛋白4检测及临床意义

王 琰,王 静,张志明,程百茹

1.西安交通大学附属西安市中心医院妇科(西安 710004)；2.陕西省肿瘤医院妇瘤科(西安 710061)；3.西安交通大学附属西安市中心医院检验科(西安710004)

卵巢癌是一种早期诊断率低而病死率高的妇科恶性肿瘤，其发病率趋于年轻化。它的高病死率可能是由于其早期无特异性症状，大多数病人在诊断时已是晚期。如果能为卵巢癌的早期筛查提供一组新的非侵入性的检测手段，成为目前研究的热点。Hellstrom等[1]用ELISA法检测卵巢癌患者尿液中人附睾蛋白4(Humanepididymis secretory protein4，HE4)有较高浓度的表达，为卵巢癌的诊断提供了一种无创的检测手段。我们前期实验[2]也证明，卵巢癌患者尿液中HE4检测具有较高的灵敏度及特异性，能有效预测早期卵巢癌的诊断。间皮素(Mesothelin，MSLN)是一种细胞表面糖蛋白，具有免疫原性的分化抗原，具有分子量小、稳定性好的特点。研究[3-4]表明，其极易通过肾小球滤过，且不易受血清蛋白及降解酶的影响，在卵巢癌中也有高表达。本研究采用ELISA法测定卵巢肿瘤患者尿液中MSLN和HE4含量，并探讨有无相关性，从而为临床寻找一种便捷、无创、有效的卵巢癌早期诊断的检测方法。

资料与方法

1 一般资料 选取2015年12月至2018年12月陕西省肿瘤医院妇瘤科及西安交通大学医学院附属西安市中心医院妇科住院手术患者73例，根据术后病理证实，上皮性卵巢癌41例,年龄(34.6±8.2)岁，其中Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期29例，浆液性癌27例，粘液性癌14例；卵巢良性肿瘤32例，年龄(33.7±6.1)岁，其中浆液性囊腺瘤19例，粘液性囊腺瘤13例；同期随机选取在本院健康体检的女性30例为正常对照组，年龄(35.4±7.5)岁。所有病例均为初次手术，术前未合并其它内科疾病且均为原发肿瘤，均未接受过化疗或放疗，均未用过激素类药物。所有标本采集前均获得患者及体检者的知情同意。

2 检测方法 术前留取晨起中段尿10 ml(取标本前均未行放、化疗及其它治疗)装入无菌试管中，静置离心后置于-40 ℃冰箱保存。正常对照组于体检时留尿。所有标本采用同一批号试剂盒以减少批间误差，并避免反复冻融。人HE4试剂盒购自上海BlueGene生物公司，MSLN试剂盒购自美国ADL公司。应用ELISA法测定。

3 结果判定 测定尿液中MSLN和HE4浓度检测严格按照试剂盒说明书操作，以正常健康妇女(均数±1.96s)作为上下警戒值,计算尿液中间皮素临界值为2.7 ng/ml，HE4临界值为6.51pmol/L，超过上限值为阳性。

结 果

1 三组患者尿液中MSLN和HE4检测结果比较 见表1。

表1 三组尿液中MSLN、HE4检测结果比较

注：与卵巢良性肿瘤及正常对照组比较，*P<0.05；与正常对照组比较，△P>0.05

上皮性卵巢癌组尿液中MSLN浓度高于卵巢良性肿瘤及正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；上皮性卵巢癌组尿液中HE4浓度高于卵巢良性肿瘤及正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；卵巢良性肿瘤组与正常对照组尿液中MSLN、HE4检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2 不同临床分期、病理类型上皮性卵巢癌组尿液中MSLN和HE4检测阳性率比较 见表2。上皮性卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期患者尿液中MSLN阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期组，Ⅲ～Ⅳ期组尿液中HE4阳性率高于Ⅰ～Ⅱ组，差异有统计学意义(P<0.05)；粘液性卵巢癌组尿液中MSLN检测阳性率高于浆液性卵巢癌组，差异有统计学意义(P<0.05)；粘液性和浆液性卵巢癌组尿液中HE4检测的阳性率，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 不同临床分期、病理类型上皮性卵巢癌患者尿液中MSLN和HE4阳性率比较[例(%)]

注：与上皮性卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期组比较，*P<0.05；与粘液性卵巢癌组比较，△P<0.05

3 两种肿瘤标志物诊断上皮性卵巢癌的灵敏度和特异性比较 见表3。41例上皮性卵巢癌患者尿液中MSLN检测阳性者24例，灵敏度58.5%，特异性72.6%；尿液中HE4检测阳性者27例，灵敏度65.9%，特异性77.4%；尿液中MSLN+ HE4联合检测任何一项阳性视为联合检测阳性，两项结果均阴性视为联合检测阴性；尿液中MSLN+ HE4联合检测阳性者39例，灵敏度95.1%，特异性96.8%，两者联合检测的灵敏度及特异性均显著高于单一指标检测，且联合检测的特异性稍高于灵敏度。

表3 两种肿瘤标志物诊断上皮性卵巢癌灵敏度和特异性比较

注：灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阳性例数)，特异性=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)

讨 论

1 尿液MSLN与上皮性卵巢癌 MSLN是相对分子量为42～45 kDa的一种细胞表面糖蛋白，是一种新发现的肿瘤细胞表面抗原。Sasaki等[5]研究上皮性卵巢癌不同临床分期、病理类型患者血清中MSLN表达，结果显示浆液性卵巢癌患者血清中MSLN表达显著高于粘液性卵巢癌，且分期越晚表达越高，说明血清MSLN表达与卵巢癌的不同病理类型、临床分期有关。Hannaka等[6]测定了253例卵巢肿瘤患者血清及尿液中MSLN水平，结果显示，尿液MSLN诊断早期卵巢癌的敏感性大于血清MSLN。本实验对上皮性卵巢癌、卵巢良性肿瘤及正常体检者三组患者尿液中MSLN含量进行比较，同时对不同临床分期及病理类型的卵巢癌患者尿液中MSLN含量进行了对比分析，结果显示，MSLN诊断上皮性卵巢癌的灵敏度为58.5%，特异性为72.6%；在不同临床分期及病理类型，MSLN在上皮性卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期患者尿液中检测阳性率为33.3%，Ⅲ～Ⅳ期可达69.9%，且粘液性卵巢癌组尿液中MSLN检测阳性率高于浆液性卵巢癌组，差异有显著性(P<0.05)。这进一步说明，卵巢癌患者尿液中MSLN值可反映病情严重程度及肿瘤临床分期，期别越晚MSLN升高越明显，MSLN测定可以作为卵巢癌病情预测的指标之一。

2 尿液HE4与上皮性卵巢癌 人附睾蛋白4(HE4)是一个分子量为 25 kDa 的分泌型蛋白。大量研究[7-9]表明，HE4促进了肿瘤细胞的粘附、增殖和侵袭。随后有研究[10-12]报道，在卵巢癌患者尿液中也可检测到作为肿瘤标志物的HE4，并且得出尿液HE4对卵巢癌的敏感度与血清HE4相当，特异度却显著高于血清HE4。本研究检测了103例女性尿液中HE4含量，其中包含73例卵巢肿瘤患者(按术后病理确诊卵巢癌41例、良性肿瘤32例)及正常体检组30例，结果显示，HE4在上皮性卵巢癌尿液中诊断灵敏度为65.9%，特异性为77.4%；在不同临床分期中，随着卵巢癌临床分期增加其含量显著升高，上皮性卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期尿液中的阳性表达率为41.7%，Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率为75.9%，差异有显著性(P<0.05)，这与文献报道相符，提示其可作为鉴别卵巢良恶性肿瘤的有效指标。但本实验结果也显示，HE4水平与上皮性卵巢癌的病理类型无关，这与报道[5]不一致。

3 上皮性卵巢癌组尿液中MSLN和HE4联合检测诊断卵巢癌的价值 本研究显示，上皮性卵巢癌尿液中联合检测MSLN+HE4水平的灵敏度为95.1%，特异性为96.8%，与单一指标检测相比均有一定的优势，并且可以弥补单一指标检测的缺陷，提高诊断效能。

但由于本研究纳入的样本量较少，此结论仍需要大量的研究支持，从而为卵巢癌的早期诊断提供一种更便捷、更高效、无创、且有价值的方法。