宫腔粘连患者COX-2、VEGF及MVD表达水平研究

陈 超 刘志勤 夏伟兰 陆 洋 孙 静 陈芳芳 彭珊珊

1.深圳市宝安区妇幼保健院妇科，广东深圳 518100；2.深圳市龙华区人民医院妇科，广东深圳 518100；3.深圳市宝安区妇幼保健院病理科，广东深圳 518100

研究显示，宫腔粘连主要是指宫颈管、子宫峡部、子宫腔由于感染、放射线、宫腔手术操作等因素从而导致人体子宫腔闭塞或者狭窄，以闭经、复发性流产、经量减少、不孕作为主要表现，而导致宫腔粘连高危因素主要包括死胎清宫术、人工流产术、子宫黏膜下肌瘤电切术以及子宫内膜去除术等，而近年来有研究显示宫腔黏连与COX-2、VEGF、MVD 表达水平密切相关[1]。因此我院对宫腔粘连患者COX-2、VEGF 及MVD 表达水平进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选 择2015 年1 月～2017 年1 月宫腔粘连患者，观察组80 例，再选取同期女性健康体检者80 例作为对照组。观察组80 例，年龄20 ～45 岁，平均（32.0±1.2）岁，病程1 ～12 个月，平均（6.01±0.15）个月。对照组80 例，年龄21 ～45 岁，平均（32.2±1.3）岁。观察组宫腔粘连患者与对照组女性健康体检者比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。

纳入标准：（1）以不明原因不孕、月经减少作为主诉；（2）患者进行宫腔镜检查结果确诊为宫腔粘连。排除标准：（1）在3 个月内采用促性腺激素；（2）伴有继发恶性病变或者子宫内膜原发病变[2]。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂 二抗-HRP 多聚体、兔抗人VEGF 单克隆抗体浓缩液、鼠抗人CD34 单克隆抗体浓缩剂、SP 试剂盒、浓缩型DAB 显色试剂盒、EDTA 抗原修复液。

1.2.2 COX-2、VEGF 及MVD 染色方式 按照SP 染色试剂盒说明书操作，所有抗体均为即用型抗体，染色时采用EDTA 抗原修复液实施微波修复抗原，按照试剂盒说明书进行操作，对人体COX-2、VEGF及MVD 水平进行测定，并详细记录。

MVD 计数：在光镜下，CD34 染色阳性细胞呈现棕黄色，在低倍视野下对整个组织切片进行扫视，取患者微血管数量密集、内皮细胞染色清晰视野，取高倍视野6 个，对微血管数量进行计算，计算平均值为MVD。任何呈现棕黄色阳性内皮细胞，只要和邻近血管、肿瘤细胞分界清楚、则可作为微血管数1 个。

1.3 观察指标

对比观察组宫腔粘连患者、对照组女性健康体检者的COX-2 阳性率、VEGF、MVD 表达水平、MVD 阳性率、VEGF 阳性率。分析VEGF 在宫颈粘连程度中的表达。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组COX-2阳性率、VEGF、MVD表达水平比较

观察组宫腔粘连患者COX-2 阳性率、VEGF、MVD 表达水平与对照组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

表1 两组COX-2阳性率、VEGF、MVD表达水平比较

2.2 两组MVD阳性率、VEGF阳性率比较

观察组宫腔粘连患者MVD 阳性率、VEGF 阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组MVD阳性率、VEGF阳性率比较[n（%）]

2.3 VEGF在宫颈粘连程度中的表达比较

VEGF 在宫颈粘连不同程度中的阳性率比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表3。

表3 VEGF在宫颈粘连程度中的表达[n（%）]

3 讨论

宫腔粘连发生和感染、宫腔手术操作以及放射线密切相关，以胎盘剥离不全、闭经、复发率流产、不孕、经量减少作为主要临床表现，而导致宫腔粘连高危因素主要包括子宫内膜去除术、感染性流产后清宫术、死胎清宫术、人工流产术等。目前研究显示，人体宫腔粘连部位子宫内膜血管生长情况、子宫内膜微血管密度、血管内皮生长因子表达之间具有相关性。而宫腔粘连患者粘连部位VEGF 表达显著高于正常部位，对粘连部位产生一定影响[3]。

在临床试验中发现，雌激素治疗前和手术切开前粘连部位相比正常组织部位的VEGF 表达较强，本次研究应用免疫组化方式的抗原修复时间、一抗浓度、DAB 显色时间等，上述因素均可对染色强度造成影响。将表达阳性细胞的百分率纳入双盲读片和计分中，能够使染色强度的分级误差明显减少[4]。

研究结果可能与粘连部位的炎症反应具有密切关联，虽然在宫腔粘连的形成过程中与发生机制在临床尚无明确机制，但炎症反应仍为形成粘连的重要因素，能够增强其局部血管的渗透性，使其炎性细胞组织尽快渗出，促进纤维蛋白机制的形成。而在纤维蛋白的降解过程中，缺血、炎症、感染和损伤均可对其产生抑制效果，能够利于纤维蛋白粘连带的形成[5]。在炎症过程中，首先是将多型核中性粒细胞渗出，其能够表达较多的VEGF，在雌激素主导的增生期，上述炎症细胞能够附着于功能层的血管边缘，会随着时间的延长而发生消失，能够为子宫内膜中的血管新生提供较为直接的VEGF 来源。对于存在炎症反应的粘连细胞，其具有十分多的中性粒细胞，而正是这些中性粒细胞，其能够增强粘连部位的子宫内膜VEGF 的表达[6]。另外，子宫内膜对VEGF 的刺激也十分敏感，女性的子宫内膜血管内皮细胞在浓度为2%的血清内即可培养成毛细胞血管结构，其原因是是由于人体子宫内膜血管内皮细胞上具有较强表达的尿激酶样的纤维蛋白溶酶原表达和VEGF-2。将VEGF 加入后，女性子宫内膜的基质金属蛋白酶以及尿激酶纤维蛋白溶酶原明显增加，可使用尿激酶的封闭行抗体和MMP 的抑制剂，能够有效减少毛细血管的形成[7-10]。VEGF 具有较多的生物学功能，比如增加血管通透性、促进有丝分裂、促进血管内皮细胞的增生和迁移、细胞外基质的改变等。具体内容：（1）与通过刺激和激活磷脂酶C，能够使其第二信使直接促进血管内皮细胞的有丝分裂。（2）对钙离子内流具有介导作用，能够使血管内皮细胞胞浆内钙离子浓度明显增加，进而对磷酸激酶的形成产生刺激。人体新生血管能够被多种因子所调控，其中最为常见的因子为VEGF-血管内皮生长因子，其在临床被认为是特异性最高、作用最强的调控因子，也是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原[11-12]。

当逆流经血子宫内膜粘附在人体腹膜层时，需要新生血管建立才能维持人体内膜的发展和生存，因此血管生成十分重要。COX-2 也可以称作为环氧合酶-2，为炎症过程重要诱导酶，能参与人体子宫内膜异位症血管形成，具有密切相关性，而血管内皮生长因子为人体血管生成中所需要的参与因子，具有显著促血管形成能力，COX-2 高表达被认为与人体宫腔粘连病理过程相关，可通过不同途径发挥作用[13-14]。COX-2 为膜结构蛋白，为前列腺素合成的重要限速酶，能将花生四烯酸转代谢成PG产物，COX-2 在人体正常组织中均呈现稳定表达，但是COX-2 在细胞受到刺激时能迅速合成，被认为是瞬时早基因或者快速反应基因。COX-2 表达能由多种因素进行诱导，例如细胞因子、生长因子以及炎性介质等，能参与炎症过程和发生。在女性多种疾病中，COX-2 表达呈增高趋势，在本次研究中对人体 COX-2 表达进行检测，研究显示，在异常组织中COX-2 阳性表达显著高于正常组织阳性表达，可能和人体自身免疫反应密切相关。COX-2、VEGF 在宫腔粘连患者中均呈现高表达状态，同时COX-2 阳性率、MVD 表达水平也与宫腔黏连具有相关性。MVD 为衡量血管生成定量指标，能对宫腔粘连疾病预后进行判断，其与宫腔粘连预后呈现负相关关系，研究结果显示，宫颈粘连患者MVD 阳性率高于健康人群，从而提示其能促进宫颈粘连形成，促进宫颈粘连发展，和疾病预后具有密切相关性，能对宫颈粘连进行判定[15-16]。

综上所述，宫腔粘连患者COX-2、VEGF 及MVD 表达水平具有密切的相关性，COX-2、VEGF均呈现高表达状态，值得在临床中推广及运用。