不同条件保存24小时尿液对生化检测的影响

蔡宇雨，邹良强，刘 娜

（首都医科大学附属北京世纪坛医院医学检验科北京大学第九临床医学院医学检验科尿液细胞分子诊断北京市重点实验室，北京100038）

尿液生化检测作为一项无创的检查，对于尿路结石、肾脏疾病早期的诊断及治疗有着至关重要的作用。尿液生化检测方便、快速、灵敏、准确，是肾病变早期发现、初步定位评估和病情监测的良好选择，且多项尿液生化联合检查，对肾病变部位及程度的评估更为全面［1］。但实践中受到留取条件的限制，许多患者对正确留取24 h尿液的方法依从性较差，如没有专用的冷藏保存箱、尿液生化联合检查时要根据不同项目的保存条件多次留尿送检，以及患者难以严格按照规定添加防腐剂等。如果不能按照正确方式留取尿液，则会对检测结果的准确性产生影响，干扰临床医生对病情的正确判断，所以既要确保送检尿液符合要求又要减少患者留尿时的不便则成了一个亟需解决的问题。目前临床上主要根据《全国临床检验操作规程第四版》以及《尿液标本的收集剂处理指南》推荐的留取方式对24 h尿液进行保存，首选方法为冷藏保存，无冷藏条件则可以添加防腐剂（硼酸、浓盐酸）保存［2-3］。既往研究表明，24 h尿液在常温条件下保存对总蛋白、肌酐等项目结果无显著影响，但研究项目和保存方式较为局限［4-6］。本研究旨在研究尿液分别在常温、添加浓盐酸以及硼酸保存条件下与冷藏保存相比，检测结果是否存在差异，探寻一种不影响尿液生化检测结果且留取安全简便的保存方式。

材料和方法

1 仪器和试剂

使用贝克曼库尔特AU5800系列全自动生化分析仪及配套试剂检测。

2 方法

在同一时间收集来自志愿者的随机尿20份，每份尿液10mL，混匀后取0.5mL进行细菌培养，将剩余尿液分成四份，每份2mL。四份尿液分别进行下列处理：①放置在2～8℃冷藏不添加防腐剂；②常温不添加防腐剂；③常温添加浓盐酸20μL；④常温添加分析纯级别硼酸0.02g。处理后的样本保存24 h后进行细菌培养以及生化项目的检测，包含：总蛋白（total protein，TP）、钾（potassium，K+）、钠（sodium，Na+）、氯（chloride，Cl-）、钙（calcium，Ca）、磷（inorganic phosphorus，IP）、尿素（Urea）、尿酸（uric acid，UA）及肌酐（creatinine，Cr）。

3 统计学处理

采用SPSS 22.0统计软件进行分析。所有变量均按Shapiro-W ilk进行正态验证，正态变量以均值±标准差表示，非正态变量用中位数（四分位数间距）［M（X75%-X25%）］表示，正态资料两组间差异比较采用单因素方差分析，非正态资料组间比较采用W ilcoxon检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

将冷藏保存作为标准，常温保存、浓盐酸保存以及硼酸保存分别与之进行比较。常温保存与冷藏保存相比各项生化检测结果差异均无统计学意义（P＞0.05）；使用浓盐酸保存与冷藏保存相比，Cr、UA、K+、Cl-、Urea及TP结果差异存在统计学意义（P＜0.05），Na+、Ca和IP差异无统计学意义（P＞0.05）；使用硼酸保存与冷藏保相比，Cr、UA、K+及Urea结果差异存在统计学意义（P＜0.05），TP、Na+、Cl-、Ca及IP差异无统计学意义（P＞0.05）。不同方式保存尿液后检测结果见表1、表2和表3。

表1 常温与冷藏保存各生化项目检测结果比较

表2 添加浓盐酸与冷藏保存各生化项目检测结果比较

讨 论

24 h尿液生化的检测在临床上应用较广泛，对于尿路结石、钙磷代谢、甲状旁腺功能以及肾脏疾病的早期诊断、治疗效果、预后判断等起着非常重要的作用。24 h尿液正确留取与及时送检是保证检验结果准确的前提，不能及时送检时应根据不同项目要求合理保存。尿液的保存方法一般有冷藏法和化学防腐剂法［7］。然而不论使用哪种方法保存，对尿液留取方式或防腐剂的添加量均有严格限制，患者很难掌握规范的操作方式，导致留取样本的依从性较差。当多个尿液生化项目联合检测时，不同项目需按照各自推荐的方式保存，并需要多次留尿，给患者造成诸多不便。另外，使用防腐剂时还要注意其毒性、腐蚀性等安全隐患。因此目前迫切需要找出一种既不影响检测结果又安全简便的尿液保存方法。

24 h尿蛋白的检测结果可反映每天排泄的尿蛋白量，有助于诊断肾脏病变，评估治疗及预后效果。既往对24 h尿蛋白的保存方式研究较多，可以冷藏保存，也可以常温或添加二甲苯等防腐剂保存，不同保存方式对结果无明显影响［5-6］。本研究中，常温和硼酸与冷藏保存相比，TP结果无明显差异，但使用浓盐酸保存防腐会影响TP的检测结果，这与指南推荐的方式相符［3］。因此，检测TP时可以在常温和硼酸保存方式下留取尿液，而不建议使用浓盐酸进行防腐。

尿Cr排出量昼夜相对恒定，受干扰的因素较少，是校正尿量不同及个体差异的重要方法，在临床上应用非常广泛［8］。本研究中常温与冷藏保存相比，Cr结果无明显差异，但使用浓盐酸或硼酸防腐会影响Cr检测结果，与指南推荐的方式不符［3］。可能原因为本实验室Cr检测方法为肌氨酸氧化酶法，该项目在检测过程中浓盐酸或硼酸消耗了反应中产生的过氧化氢，减少了进一步生成蓝色色素的反应，使检测结果偏低。因此，检测Cr时可以在常温条件下保存尿液，而不推荐使用浓盐酸和硼酸进行防腐。

尿K+、Na+、Ca、IP及UA在结石形成中起重要作用，可用于尿路结石病人的实验室检查［9］。本研究结果提示常温保存尿液对以上生化检测结果无明显差异。使用浓盐酸和硼酸保存尿液对K+和UA的检测结果有影响，可能原因为酸性物质对电极造成干扰导致K+结果发生变化，使用浓盐酸和硼酸保存尿液后，UA结果较冷藏保存结果偏低，考虑原因为UA在酸性条件下不稳定而导致结果偏低［10］。指南上不推荐使用硼酸保存的尿液检测Ca和IP，但研究结果显示硼酸保存的尿液对Ca和IP检测无明显影响，与指南中有差异［3］，但《全国临床检验操作规程第四版》中并未明确指出Ca和IP不能使用硼酸保存［2］，可能因为添加硼酸保存的尿液在检测Ca和IP时并不是最佳保存方式，尿液检测Ca和IP时也可使用硼酸保存。所以，检测K+、Na+、Ca、IP及UA时可用在常温条件下保存尿液，而检测K+和UA的尿液不推荐使用浓盐酸或硼酸进行保存。

本研究中还对不同方式保存的尿液进行了细菌培养，结果显示常温和添加浓盐酸与冷藏保存在细菌数量上差异有统计学意义。常温保存较冷藏保存细菌数量上明显升高，但对于各项尿液生化结果并未产生影响，这可能是细菌增长的数量不足以影响生化项目检测。使用浓盐酸进行尿液防腐有明显的抑菌作用，细菌生长被抑制，但由于浓盐酸酸性较强，会对Cr、UA、Na+、K+、Cl-、Urea及TP检测产生影响。以上结果提示，细菌增长不是影响尿液生化检测结果的决定性因素。

总之，本研究提示24 h尿液在常温条件下保存对生化项目检测无明显影响，而添加浓盐酸、硼酸进行防腐会对某些项目造成不同程度的影响。因此在实际临床工作中，如患者没有冷藏保存条件，可将24h尿液常温保存。