1 日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究

高晓磊，韩明宝，刘思桐，赵丽霞，朱秀同，刘浩，郁宏伟，谢康

（1.瑞普（保定）生物药业有限公司 河北保定 071000；2.天津瑞普生物技术股份有限公司 天津 300308）

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性上呼吸道传染病，于1925 年首发于美国洛岛，对养禽业造成严重危害。疫苗接种是目前预防和控制鸡传染性喉气管炎的最有效的措施，目前国内外普遍采用弱毒疫苗防治本病，弱毒疫苗免疫效果较好，但其免疫原性与毒力呈正相关性，即弱毒疫苗株还残存着毒力，病毒在自免的同时会导致由免疫鸡向易感鸡的传播。因此弱毒疫苗仅限于流行地区使用并应严格控制免疫剂量，清净鸡群一旦发生本病将引起ILT 暴发，导致重大经济损失，这是ILT 防治中存在的主要问题[1]。基因工程疫苗因其安全性好、毒副作用小等优点成为ILT 疫苗研究的热点[2]。

gB 基因是ILTV 的主要保护性抗原，gB 蛋白是病毒感染所必需的主要免疫糖蛋白。Tong 等[3]构建了表达传染性喉气管炎病毒gB 基因重组鸡痘病毒的疫苗，其可以保护SPF 鸡和商品鸡抵抗传染性喉气管炎强毒的攻击。本研究的目的是考察鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和刺种两种不同免疫途径免疫1 日龄雏鸡后的安全性和效力，为扩大重组疫苗临床应用提供一定的依据。

1 材料和方法

1.1 疫苗

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗，180102 批，效价为1.1×104PFU/羽份。

1.2 攻毒用标准强毒

FPV 102 株，购自中国兽药监察所，攻毒用毒液效价为106.30EID50/0.2mL，攻毒时作1,000 倍稀释，羽毛囊接种；ILTV WG 株，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，攻毒用毒液效价为105.9EID50/0.2mL，攻毒时作2,000 倍稀释，喉囊内接种，0.4mL/羽。

1.3 免疫试验用鸡

1 日龄SPF 白色来杭鸡80 只，由瑞普公司质量管理部提供，试验期间饲养于瑞普公司试验动物房负压隔离器中，其中20 只用于安全性试验，60 只用于效力试验。

1.4 安全性试验

20 只SPF 鸡随机分为2 组，每组10 只。第一组进行颈部皮下注射，每只鸡接种0.1mL（10 个免疫剂量）。第二组，皮下刺种0.1mL（10 个免疫剂量），隔离饲养，接种后观察鸡群的精神状态以及局部的反应情况。

1.5 效力试验

将60只SPF鸡随机分为6组，4组免疫，2组对照，每组10只。免疫1、3 组颈部皮下注射0.1mL（1 羽份）180102 批疫苗，免疫2、4 组皮下刺种0.01mL（1 羽份）180102 批疫苗，第5～6 组为对照。

免疫后28d，试验1、2 组和对照1 组分别用1,000 倍稀释的ILTV WG 株（喉囊内接种）攻击，0.4mL/只。试验3、4 组和对照2 组分别用1,000 倍稀释的FPV 102 株（羽毛囊接种）攻击，每只0.4mL/只。观察20d，每天两次观察鸡群，记录发病和死亡情况。所有鸡只在免疫前、攻毒前和攻毒后均逐只进行称重。

2 结果

2.1 安全性试验

两组鸡在试验期内无任何全身反应，精神食欲不受影响，发育正常，刺种组鸡接种4d 后接种部位均发生痘肿，5d 肿胀厚度达最大，此后逐渐消退。重组疫苗皮下注射或皮下刺种1 日龄试验鸡，均未出现严重临床反应，重组疫苗对1 日龄雏鸡是安全的。

表1 重组疫苗免疫1 日龄雏鸡的攻毒保护

2.2 效力试验

对重组疫苗免疫1 日龄雏鸡的攻毒保护试验表明（表1），皮下注射方式免疫后28d，免疫鸡群可获得对ILTV WG 株和FPV 102 株强毒攻击的保护，保护率为80%和70%。皮下刺种方式免疫后28d，免疫鸡群可获得对ILTV WG 株和FPV 102 株强毒攻击的保护，保护率为90%和70%。

3 讨论

疫苗接种是目前预防和控制鸡传染性喉气管炎的最有效措施，弱毒活疫苗、灭活疫苗、基因工程疫苗对本病均有不同程度的保护作用，国内外普遍采用弱毒疫苗防治传染性喉气管炎。弱毒疫苗推荐免疫日龄一般在4 周龄以上，即便如此，使用后也会造成一定的病理损伤，如不同程度的结膜炎等，病毒在鸡体内传代和传播的过程中会出现毒力返强[4]，这些都决定了弱毒疫苗主要应用于ILT 的流行地区。我国养殖水平差异较大，养殖环境复杂，这使得ILT 控制变得错综复杂，规模化鸡场中发病日龄不断提前，唯一的解决办法是使用更为安全可靠的疫苗。

前面的研究已经证明，表达传染性喉气管炎病毒gB 基因的重组鸡痘病毒对1 周龄雏鸡是安全的[1]，且免疫效果非常理想。但1 日龄雏鸡的安全性和效力却未有报道。本研究中安全性试验表明鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以10 羽份剂量皮下注射或皮下刺种1 日龄试验鸡不会引起明显的临床反应，即重组疫苗对1 日龄雏鸡是安全的。效力试验结果表明，以皮下注射或是以皮下刺种方式免疫1 日龄雏鸡，都能经受住FPV 或ILTV 强毒的攻击，免疫组发病率和病死率均显著降低，相对于鸡痘传染性喉气管炎的预防效果要更出色一些。

在疫苗使用的过程中，首先要考虑疫苗的安全性和免疫效力，本研究为传染性喉气管炎雏鸡免疫防治提供了借鉴，为鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗临床推广应用提供了重要数据，具有重大的科学意义。