羊痘病毒分子特征及检测方法研究进展

陆建峰

引言

羊痘是绵羊痘和山羊痘的统称，是由绵羊痘病毒、山羊痘病毒引起的一种传染性疾病，羊痘属于急性、热性以及接触性疾病，发病率很高，传染率和死亡率都比较高。患有羊痘病症的羊只，主要症状为发热、身上无毛或少毛部位的皮肤出现丘疹或者疱疹，是所有动物痘病中最严重的一种，严重影响养羊业的发展。羊痘是一种比较常见的疾病，在很多国家都有发生，我国很多地区都曾经呈现暴发流行趋势，我国将羊痘列为I类动物疾病。为了提高对羊痘的预防水平，必须要加强对羊痘病毒分子特征的研究，并且对羊痘的检测方法进行分析，从而研究出羊痘防治药物，为羊养羊业的发展提供支持与帮助。

1羊痘病毒分子特征

1.1羊痘病毒的特征

羊痘病毒属于痘病毒科，羊痘病毒属包含绵羊痘病毒、山羊痘病毒、疙瘩皮肤病病毒三种，是唯一一种在细胞浆内复制的有囊膜的双股DNA病毒。分别引起山羊痘、绵羊痘、牛的结节性疹块病。通过实验观察发现羊痘病毒颗粒呈卵圆形或砖形，大小大约为（100～260）nm×（190～390）nm。羊痘病毒粒子在复制的过程中会产生细胞内粒子和细胞外粒子两种，其中细胞外病毒粒子具有传染性。成熟的病毒粒子会以出芽的方式穿过宿主细胞的细胞膜进行感染。感染羊痘病毒的羊只具有一定的潜伏期，大约在10-14天之后开始出现症状，病羊的鼻、结膜和口腔分泌物中的病毒DNA以及感染性病毒的含量达到最大值，经过3-6周之后会降低。羊痘病毒复制的主要场所是皮肤。

通过血清学研究发现，不同的羊痘病毒之间会出现交叉反应，但是引起牛的结节性疹块病的羊痘病毒不会对山羊和绵羊产生感染，从当前的实验情况来看，利用羊痘病毒感染豚鼠、家兔、小鼠等动物进行实验，均没有成功。羊痘病毒可以在牛、绵羊、山羊源的组织培养细胞上生长，而且对原代或次代羔羊睾丸细胞以及羔羊肾细胞的敏感程度最高。近年来，国内外关于羊痘病毒的研究和报道都非常多，关于羊痘病毒的研究也越来越深入。

1.2羊痘病毒的基因组及其功能基因

羊痘病毒的基因组约有150kbp，其中包括中间编码区和两端相同的反向末端重复序列，在基因组的中间区域，有与其他痘病毒同源的保守序列，可以为病毒复制提供所需的蛋白。在羊痘病毒基因的左侧与右侧10和27kbp的基因结构中包含了十分重要的具有编码功能的基因序列。绵羊痘病毒、山羊痘病毒的基因组共有147个开放阅读框，而且绵羊痘病毒、山羊痘病毒的基因组十分相似，大约有96%的核苷酸完全相同，但是也有一些细微的差异，例如在基因末端的ITRs，绵羊痘病毒为2213bp～2349bp，但是山羊痘病毒为2198bp。所有羊痘病毒都有P32蛋白，这种蛋白是一种特异性强、具有免疫原性的结构蛋白，也是当前羊痘病毒研究领域中最热门的课题之一。当前在羊痘病毒研究领域中，基于P32基因的诊断方法和核酸疫苗的研究已经取得了一定的进展。

1.3羊痘病毒的免疫逃避机理

羊痘病毒在感染的过程中，主要是通过编码一系列破坏和避免宿主免疫反应的免疫调节基因并且将这些基因转入宿主体内从而达到感染目的。有研究人员将羊痘病毒灭活苗或减毒苗接种在成年的小白鼠身上进行实验，发现接种12个小时之后在注射疫苗的位置的巨噬细胞的功能降低，由此可见在这个部位与利于病毒的入侵。当感染羊痘病毒之后大约需要五天时间可以使T细胞激活并分泌细胞因子，因此羊痘病毒能够逃避宿主免疫反应。羊痘病毒逃避宿主免疫反应的能力并不取决于病毒的感染力，当羊痘病毒入侵宿主之后，宿主脾脏的的巨噬细胞和淋巴细胞的活性增强，从而使得宿主产生免疫反应，从而对病毒进行一定程度的抑制。

2羊痘病毒的检测方法和防治

羊痘病毒与羊接触传染性脓疱性皮炎病毒具有相同的抗原，因此当羊只发病的时候，如果采用常规的血清学进行检测，则可能会出现由于抗体交叉而无法确定具体的病毒类型的现象。因此，在羊痘病毒检测过程中不能采用常规的血清学，常用的方法是电镜观察，但是很多地区的检测设备不齐全，对于羊痘病毒的检测以及诊断有一定影响，进而可能耽误疾病的治疗。因此，必须要建立一种特异姓高、敏感性高、检测速度快的羊痘病毒诊断方法，分子生物学诊断方法是羊痘病毒检测过程中的一种高效检测方法，也是当前使用最多的检测方法，采用分子生物学检测方，可以简单陕速地从組织培养上清、活组织样品中检测出羊痘病毒的DNA片段，并且还可以通过对分子产物的酶切分析对羊痘病毒进行鉴定。有研究人员根据绵羊痘病毒、山羊痘病毒的P32基因序列差异建立了区别绵羊痘病毒、山羊痘病毒的方法，另外也有学者建立了用于快速检测潜伏期、临床发病的和死后的羊体中羊痘病毒DNA的分子生物检测方法。

当前关于羊痘病毒的预防研究，主要是依靠弱毒活疫苗接种完成的，对羊痘病毒疫苗株和野毒株之间的氨基酸同源性进行对比发现，两者的同源性至少有99.9%，差别很小，因此羊痘病毒疫苗株和野毒株之间很易发生同源重组，恢复毒性，对此，在对羊痘病毒进行预防的时候必须要弱化其毒性。由于羊痘病毒的宿主范围比较单一，只对山羊绵羊产生作用，当前我国正在研发新一代羊痘病毒活载体疫苗，将外来基因插在羊痘病毒的非编码区，利用羊痘病毒的基因组生产活载体疫苗，实现对羊痘病毒的预防和控制。

3结语

综上所述，羊痘病毒是一种感染性、病死率极高的传染性疾病，在养羊过程中要积极加强对羊痘病毒的预防和控制。通过对羊痘病毒的分子特征进行研究，有助于研发羊痘病毒的免疫药物。在当前的研究基础上，还应该要加强对羊痘病毒检测方法以及防治方法的深入研究，以提高羊痘病毒防治水平。

（作者单位：735000甘肃省酒泉市肃州区畜牧兽医局）endprint