Survivin与COX-2在腮腺良恶性多形性腺瘤中的表达及意义

乔 柱 赵 虎

多形性腺瘤（pleomorphic adenoma，PA）又被称做混合瘤（mixed tumor），最常见于腮腺组织，为唾液腺疾病中最为常见的一种良性肿瘤，但该肿瘤可发生恶变，且随着病程增长恶变几率逐渐增大。根据WHO（2017）涎腺肿瘤分类标准，腮腺组织中的恶性多形性腺瘤主要为癌在多形性腺瘤中（carcinoma ex pleomorphic adenoma，ca ex PA），约占所有涎腺肿瘤的12%[1]。统计结果显示90%以上的恶性多形性腺瘤是因多形性腺瘤恶变所导致，并且其预后比常见的其它涎腺肿瘤较差[2]。

近年来的实验研究发现细胞增殖与凋亡的平衡失调成为肿瘤发病的重要机理，Survivin 蛋白和COX-2 蛋白都具有细胞凋亡抑制、血管生成参与、细胞增殖促进等生物学功能。已有研究表明Survivin和COX-2 在腺源性肿瘤表达机制及阳性结果存在相关性，在结直肠癌[3]、口腔鳞癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]等均有报道。本研究通过对Survivin 及COX-2 免疫组化中阳性表达程度的检测，分析其与腮腺良、恶性肿瘤的关系。

资料和方法

1.临床资料与组织标本：实验组织收集来源于保定市第一中心医院2014年7月～2017年10月病理科存档的腮腺组织的良、恶性多形性腺瘤的蜡块标本共46 例，其中良性组织24 例，恶性组织22例；另取正常腮腺组织标本20 例。所有病例临床资料充足，病理学诊断明确，取材前无其他头颈部肿瘤史且无放化疗史，石蜡包埋组织完整。

2.试剂：鼠抗人Survivin 单克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司）；鼠抗人COX-2 单克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司）；浓缩型DAB 显色试剂盒（天津灏洋生物制品科技有限公司）。

3.方法：采用免疫组化SP 二步法检测各个分组每个标本中Survivin 和COX-2 的表达情况。用PBS代替一抗做阴性对照。

4.结果判定与统计：将细胞中出现棕黄色或棕褐色颗粒标记作为阳性细胞。由经验丰富的两位病理科医师在电镜高倍视野下观察，采用双盲法阅片，将每个视野下以100 个细胞计数，以阳性细胞率和阳性细胞染色深浅强度（-，+，++，+++）进行细胞阳性表达的评定。

统计学处理：Survivin 和COX-2 阳性表达情况均采用SPSS 22.0 软件进行统计处理，计数资料应用百分率（%）表示，采用Fisher 精确概率分析，以P＜0.05 作为差异有统计学意义。

结 果

1.Survivin 蛋白表达特征及结：Survivin 在腺管样的导管上皮细胞及粘液样组织中常见表达，细胞浆与/或细胞核中可见棕褐色颗粒状的阳性表达。正常腮腺组织中阳性表达可见于少许分泌管上皮细胞外侧的肌上皮细胞核、基底细胞层、小叶间导管中。Survivin 在正常腮腺组织组、腮腺多形性腺瘤组和恶性多形性腺瘤病组中的阳性表达率分别为：5%、58.8%和95.5%，各组之间有显著差异，见表1。

表1 Survivin 阳性表达情况

表2 COX-2 阳性表达情况

2.COX-2 蛋白表达特征及结果：COX-2 蛋白免疫组化的阳性表达定位在腺瘤细胞的细胞质中，偶尔可见于细胞膜和细胞核中，实验各组中COX-2 蛋白均有表达，镜下可观察到表达情况有所不同，恶性多形性腺瘤组阳性表达较强。COX-2 阳性表达在正常腮腺导管上皮细胞膜中也可寻及。正常腮腺组织、良性多形性腺瘤、恶性多形性腺瘤中的COX-2 阳性表达率分别为55%、79.2%和90.9%。三组之间经fisher 百分比对比检验具有显著差异性，见表2。

讨 论

腮腺多形性腺瘤主要为唾液腺上皮源性肿瘤，乃涎腺肿瘤在临床中最为常见的一种，占涎腺良性肿瘤的87%以上[7]。腮腺多形性腺瘤临床治疗中以手术切除方法为主，然而有临床术后统计占3%左右的病例出现复发情况，反复复发的患者癌变概率又显著增加[8]。目前专家们针对多形性腺瘤恶变的原因以及良恶性之间的关系已经进行了许多实验和研究，以期待能早期诊断或干预腮腺良恶性多形性腺瘤的发生及发展。

Survivin 蛋白又被称作生存素，是凋亡抑制蛋白家族中的一位成员，于1997年被Ambrosini 等[9]首先发现，是目前为止证实的具有最强功能凋亡抑制的因子。Survivin 蛋白的功能机制比较复杂，存在抑制细胞的凋亡以及参与调控肿瘤细胞周期的双重作用，同时已证实其在正常分化组织中几乎没有表达，而在恶性早期胚胎组织及肿瘤组织中则多存在高表达的典型特点[9]，使得该因子同肿瘤细胞发生发展、增殖分化以及恶性变的关系成为目前实验中研究的热点。梁永强等[10]研究发现Survivin 阳性表达的多形性腺瘤病例，多数为细胞增生活跃且存在包膜边缘浸润者，预示着多形性腺瘤中存在Survivin 表达病例具备恶性生物学倾向。本实验研究发现Survivin蛋白阳性表达主要见于癌组织细胞的胞浆和/或胞核，在恶性多形性腺瘤组存在有高度表达（阳性率95.5%），多形性腺瘤组中表达较高（阳性率58.8%），提示Survivin 蛋白的表达与多形性腺瘤的增殖活性有关。以上组间对比结果经分析有统计学意义（P＜0.05）表明了Survivin 在良、恶性多形性腺瘤的表达具有显著性差异，这与王旭等[11]研究Survivin 在良、恶性涎腺多形性腺瘤中阳性表达分别56%及100%基本相符合。COX-2 又被称为前列腺素内过氧化物合成酶，乃催化生成前列腺素重要活性物质的关键限速酶。COX-2 蛋白存在细胞凋亡抑制，细胞增殖促进，新生血管发生，阻碍细胞周期，肿瘤转移促进等的生物学功能。向国林[12]等研究COX-2 在多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的表达情况中发现，在初发多形性腺瘤组、复发多形性腺瘤组和恶性多形性腺瘤组中的阳性表达率呈逐渐增高趋势，并且明显高于正常腮腺组。提示COX-2 与多形性腺瘤肿瘤细胞的增殖分化相关，参与了多形性腺瘤的发生、复发及恶变过程。本实验中COX-2 蛋白在腮腺正常组织、多形性腺瘤、恶性多形性腺瘤各组中表达分别为55.0%、79.2%、90.9%各组之间有显著性差异（P＜0.05），具有统计学意义，代表COX-2 在涎腺多形性腺瘤中的良恶性表达呈正相关性。王旭等[11]研究COX-2 蛋白在良、恶性涎腺多形性腺瘤中阳性表达分布情况相符合，提示COX-2 与肿瘤的细胞增殖分化的密切相关性，表明参与了多形性腺瘤的发生及恶变过程。

本研究结果提示Survivin、COX-2 的表达与腮腺多形性腺瘤的癌变病程进展相一致，均有可能成为今后涎腺肿瘤分化发展的一项生物学指标。腮腺多形性腺瘤是一种临界性肿瘤，该腮肿瘤中两蛋白的高表达也表明了其潜在恶性倾向的可能，提示在肿瘤癌变的过程中存在有重要的作用。掌握Survivin、COX-2 的表达与定位特点，有可能为腮腺良、恶性多形性腺瘤的鉴别诊断起到一定作用，并为其临床治疗及预后评估提供一定的理论支持。