基于Miseq法研究纳豆芽孢杆菌制剂对小鼠肠道菌群的影响

吴高峰 黄占旺 王素贞 黄永平

（江西省天然产物与功能食品重点实验室 江西农业大学食品科学与工程学院 南昌330045）

随着抗生素的发明和使用， 人类对抗生素的滥用也越来越严重[1]。抗生素是一种由细菌、真菌、放线菌等产生的次级代谢产物，能抵抗病原体等，它主要治疗微小病原体引起的感染。 中国是抗生素生产和使用大国， 全国医院抗菌药物年使用率超过74%， 抗生素引起的细菌耐药性年死亡数超过8 万，妇产科滥用最严重[2]。 抗生素的滥用会导致机体不能识别益生菌和致病菌， 将正常菌群杀灭，致有害菌繁殖并引起菌群失调[3]。 寻找一种安全并且对机体有益的抗生素替代物非常必要。

纳豆芽孢杆菌制剂是纳豆菌通过液态发酵后添加保护剂冻干粉碎制成， 是一种良好的免疫促进剂，它能提高抗体水平和吞噬细胞的活性，提高细胞免疫和体液免疫[4-5]，并且能够产生抗原物质，刺激建立免疫系统， 并提高非特异性免疫功能[6]。陈兵等[7]认为纳豆芽孢杆菌提升了肠道许多厌氧菌的数量，部分需氧菌数量下降。 黄俊才等[8]提出纳豆芽孢杆菌能够显著增加仔猪结肠内容物中乳酸菌、双歧杆菌的数量，在通过与甘露聚糖混合使用时显著降低大肠杆菌数量。吴德华等[9]研究发现不同浓度的纳豆芽孢杆菌能够显著增加乳酸菌数量而降低大肠杆菌量， 无纳豆芽孢杆菌时大肠杆菌数量显著上升。Inooka 等[10]通过一系列的试验研究发现纳豆芽孢杆菌能够增强绵羊红细胞的抗体产生并显著增加鸡脾脏T、B 淋巴细胞的数量，增强鸡的细胞免疫反应。 刘宇等[11]采用含有2×109CFU/g 纳豆芽孢杆菌的混合的活菌制剂， 能显著增加断奶仔猪的血清溶菌酶含量。 李云锋等[12]研究发现纳豆菌制剂能够刺激细胞因子IL-6，Toll样受体-9，IL-1 等的分泌。 纳豆芽孢杆菌制剂是一种健康无毒的抗生素的替代物。 耿春银等[13]研究发现纳豆菌制剂能够代替抗生素添加到断奶仔猪饲料。试验证明，添加纳豆芽孢杆菌有助于增加胃肠道的益生菌生长，而对需氧菌或肠杆菌、肠球菌等产生拮抗作用[14]，减少致病菌的定值[15]。 本试验采用抗生素建立菌群失衡模型， 利用Miseq 法来研究纳豆芽孢杆菌制剂对小鼠肠道菌群的调控作用并进行生物信息分析。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

纳豆芽孢杆菌制剂（BNPr），活菌数为4×1010cfu/g，实验室自制。 KM 小鼠，雌性SPF 级，湖南斯莱克景达实验动物有限公司。 盐酸林可霉素 （批号：20130902）、氨苄青霉素（批号：104D038），购自Solarbio 公司；头孢唑啉钠，购自梯希爱TCI（上海）化成工业发展有限公司；FastDNA Soil Kit，购自MP Biomedicals，CA，USA。

1.2 主要仪器设备

TDL-5-A 低速离心机， 上海安亭科学仪器厂；凝胶电泳成像系统，Kodak，USA；PCR 反应仪，BioRad，USA； 高通量测序仪，Illumina China；生物分析仪，Agilent technologies，USA；NanoDropND-1000，Nano Drop Technologies，Willmington，DE，USA。

1.3 方法

1.3.1 纳豆芽孢杆菌制剂的制备 在100mL 的液体培养基中接入四环纳豆芽孢杆菌纯种， 培养16～18h 后制成纳豆菌液体培养产物并测定活菌数。将其转入灭好菌的铁盘中，加入15%灭菌脱脂奶粉， 真空冷冻干燥制成纳豆芽孢杆菌制剂，称重，根据刘慧等[16]采用标准活菌计数法测定活菌数。

1.3.2 样品采集[17]KM 雌性小鼠128 只，18～22 g，在SPF 小鼠生长环境下饲养。 小鼠适应性饲养一段时间后，随机分为8 个组，每组16 只，分为两批，组间体重差异不大于0.5 g。 把BNPr 配制成2.5，25，250 mg/mL 的溶液。 选取一组为空白对照组A，灌胃生理盐水；其余组灌胃抗生素混合溶液（盐酸林可霉素、头孢唑林钠、氨苄青霉素，浓度均为100 mg/mL）建模3 d 后，随机选取4 组作为调节组，B 组灌胃生理盐水，C-E 灌胃3 个剂量的BNPr；L 组作为模型组，灌胃抗生素溶液。 试验期为30 d，灌胃量均为0.5 mL/只。 每天16：00 无菌收集小鼠粪便， 置于标记好的EP 管中，-80 ℃下保存。 取0，3，18，33，48 d 五个时间点（五个时间点之间的时间段分别称为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期）的小鼠粪便样品进行后续DNA 提取。

1.3.3 DNA 提取 每个样品分别称取约500mg 后利用FastDNA Soil Kit （MP Biomedicals， CA，USA）提取各样品的总DNA，使用NanoDropRND-1000（NanoDrop Technologies， Willmington， DE，USA）对提取的总DNA 样品进行浓度和纯度检测。

1.3.4 PCR 扩增及纯化 参照文献[18]方法进行操作。

1.3.5 建库及Miseq 测序 参照文献[19]方法进行操作。

1.3.6 数据分析 参照Pala-Ozkok 等[20]的方法，进行序列筛选，数据降噪分析，获得样品中微生物群落结构信息。

1.3.7 生物信息分析 进行序列分析， 得出物种分类；分析得出物种的α 多样性；分析多样本间的多样性 （聚类分析，PCA 分析，Unifrac.weighted）；另外对单样本的门水平及属水平上的分类情况进行分析；对纳豆芽孢杆菌、益生菌、致病菌菌数的变化进行分析，并进行剂量分析。

2 结果与分析

2.1 PCR 结果分析

经过PCR，样品浓度均大于20 mg/mL，A260/A280 均在1.80～2.00 之间，说明DNA 提取的质量高，可用于后续试验。

2.2 序列信息和多样性指数

由图1 可见，OTU 系数AE、AL、BL 差异极显著，AC、AD、BE、CL 差异显著；Chao 系数AC、AE、AL 差异极显著，AB、AD 差异显著；Shannon 系数除了BD、DL、CE 差异不显著，其余各组间均极显著差异；ACE 系数AC、AE、AL 差异极显著，AB、AD 差异显著；Simpson 系数AC、AE、BC、BE、CD、CL、DE、EL 差异极显著， 其余各组差异不显著；Good coverage 系数AB、AC、AD、AE、AL 差异极显著，BC、BE、BL 差异显著。

图1 BNPr 对肠道菌群的序列信息和多样性指数影响Fig.1 Effect of BNPr to the sequence information and diversity indexes of the intestinal microflora

2.3 门水平上的分类情况

由图2 可知， Ⅰ期主要由拟杆菌门、 放线菌门、变形菌门、脱铁杆菌门、酸杆菌门、芽孢杆菌门以及一些未分类的门类组成， 其中主要以脱铁杆菌门和拟杆菌门组成，两者大约占到总数的80%～90%，拟杆菌门是肠道粪便中的主要微生物，脱铁杆菌门是一类通过专性或兼性厌氧代谢获得能量的细菌，可利用多种电子受体。变形菌门在细菌中属于最大的一门。 Ⅱ期主要由厚壁菌门、 拟杆菌门、酸杆菌门、变形菌门，存在一些Ⅰ时期未出现的门类，如TM7（研究表明它能引起炎性黏膜病，在消化道慢性炎症中起着一定的作用），还发现了少量的无壁细菌类（柔壁菌门），它无细胞壁，无肽聚糖成分，对四环素敏感。在模型组由于长期灌胃抗生素，变形菌门占到总门类的95%左右，而变形菌门中有大量的病原菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、幽门螺旋菌等。说明长期服用抗生素会对人体肠道造成严重的伤害， 导致肠道菌群不均衡，引发许多疾病。 Ⅲ期是灌胃药物的后期，此期主要有厚壁菌门、拟杆菌门、酸杆菌门以及放线菌门、变形菌门等构成，且厚壁菌门的比例较Ⅱ期增加，厚壁菌门细胞壁含肽聚糖最高，约50%～80%，都是化能自养型，可产生芽孢，它可以抵抗脱水和极端环境，它包括芽孢杆菌属，肠球菌属。 并且厚壁菌门与拟杆菌门的比例的大小与人体的肥胖有关[21]。该期的厚壁菌门和拟杆菌门的比例合适。另外，模型组的厚壁菌门继续增加，而变形菌门不断减少， 说明纳豆芽孢杆菌的灌胃能够有效地调节肠道菌群的平衡。Ⅳ期是停灌后的菌群，它主要由厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门组成，而未检测出酸杆菌门。 酸杆菌门是新近被分离出来的一门细菌，它们是嗜酸菌，在肠道中能够存活。AB 两组的厚壁菌门的含量基本达到建模前的水平，而BNPr组的肠道菌群也恢复很快，说明BNPr 在一定的时间内， 停服一定剂量的抗生素后能够恢复肠道菌群的数量水平及其比例。 模型组的拟杆菌门都显著增加， 厚壁菌门和拟杆菌门的比例也进一步减小。 另外，对比小鼠整个试验期的体重变化，我们发现这与厚壁菌门和拟杆菌门的比例变化呈正相关关系。

图2 BNPr 对小鼠肠道菌群门水平分类情况影响Fig.2 Effects of the BNPr to the classification information at phylum level of the intestinal microflora in mice

2.4 属水平上的分类情况

图3 BNPr 对小鼠肠道菌群属水平的分类情况影响Fig.3 Results of the BNPr to the classification information at genus level of the intestinal microflora in mice

由图3 可见， Ⅰ期共检测出157 个科411 个属，主要由乳酸杆菌属、拟杆菌属、副拟杆菌属、别样杆菌属、生物分类地位未定的TM7 属、理研杆菌属、小螺菌属、臭气杆菌属、双歧杆菌属以及肠杆状菌属等组成，分别占到总菌属的65.52%，10.86%，4.98%，3.14%，2.69%，1.97%，1.09%，1.02%，0.88%，0.68%。Ⅱ期共检测出142 个科326个属，主要由乳酸杆菌属、拟杆菌属、肠杆菌属、副拟杆菌属及18 号梭菌属构成，它们分别占到总菌属的32.89%，32.76%，18.20%，10.36%，0.81%。 乳酸杆菌属、双歧杆菌属较Ⅰ期极显著降低，而拟杆菌属、 副拟杆菌属、 肠杆菌属的占比都极显著增加，同时副萨特氏菌、克雷伯氏菌属、埃希氏菌属/志贺氏菌，粪杆菌属等的比例都显著升高，而乳球菌、别样杆菌属等显著降低，说明抗生素的摄入使得肠道菌群结构发生变化，益生菌如乳酸杆菌属、双歧杆菌属的数量减少而致病菌如埃希氏菌属、志贺菌属、粪杆菌属等菌属的比例升高。Ⅲ期为灌胃药品后期，该期主要检测出142 科323 属，主要由乳酸杆菌、拟杆菌属、肠杆菌属、副拟杆菌属、14号a 梭菌属、18 号梭菌属、 布劳特氏菌属等构成，它们分别占总菌属的45.24%，23.47%，11.95%，7.26%，5.00%，0.85%，0.72%。 该期与灌胃后期相比，乳酸杆菌属的比例极显著升高，而拟杆菌属、肠杆菌属、 副拟杆菌属的比例显著降低， 乳球菌属、别样杆菌属、肠杆状菌属、双歧杆菌属等占比有所提高，而副萨特氏菌属、克雷伯氏菌属等比例有所下降， 并且在这个时期出现了灌胃后期未检测到的中村氏菌属、束缚杆菌属、动胶菌属、罗宾逊氏菌属、摩根氏菌属等，说明随着BNPr 的灌胃天数的增加能够更加有效地调节肠道菌群向正常菌群的方向进行。模型组主要由肠杆菌属及14 号a 梭菌属组成，而其它各组中这两种菌属检测出的比例远远小于模型组。Ⅳ期为停止灌胃后的时期，该期共检测出123 科281 属，主要由乳酸杆菌属、拟杆菌属、副拟杆菌属、肠杆菌属、粪杆菌属、生物分类地位未定的丹毒丝菌属、别样杆菌属、螺旋杆菌属及18 号梭菌属， 它们分别占总菌属的47.32%，23.62%，10.77%，6.15%，1.36%，1.35%，1.15%，0.91%。 该期乳酸杆菌属的比例继续增加，拟杆菌属、18 号梭菌属基本保持不变， 别样杆菌属、副拟杆菌属、螺旋杆菌属、肠杆状菌属、粪杆菌属均显著增加，肠杆菌属极显著降低，生物分类地位未定的丹毒丝菌属极显著增加。统计分析可知，停灌期与建模前差异不显著， 表明通过抗生素建模，灌胃纳豆菌制剂30d 后，再停止灌胃让其自由恢复，能够达到建模前的肠道菌群水平，证明纳豆芽孢杆菌存在明显的肠道菌群调节作用。

2.5 聚类分析

2.5.1 基于OTU 的聚类分析（97% similarity）由图4 可见， 在Ⅰ期， 模型组与其它各组之间的OTU 为1 时，它们的相似度小于0.32，当OTU 为2 时，相似水平小于0.52，OTU 为3 时，相似水平小于0.54，OTU 大于10 时， 样本之间的相似性达到80%以上，且模型组的相似水平最高为0.79。在Ⅱ期，模型组与其它各组的相似性仅为0.07，较建模前极显著下降。 各个组之间的相似性都有所提高，OTU 为1 时，相似性仅为0.07，OTU 为2 时相似性为0.62，OTU 大于9， 各组的相似性超过80%，模型组的相似性达到0.96，高于建模前的水平。 灌胃后期当OTU 为1 时，模型组与其他组间相似性为0.08，较灌胃前期有所增加，各组之间的相似性继续提高， 而模型组之间的相似性有所下降，当OTU 为2 时，模型组与其余组之间的相似性小于0.66，当OTU 大于8 时，样本间的相似性超过80%。在停灌期小鼠肠道功能逐渐恢复，能够自发的调节肠道菌群的动态， 模型组与其余各组间的相似性继续增加， 与建模前差异不显著，当OTU 大于11 时，各组之间的相似性大于80%。

图4 BNPr 对小鼠肠道菌群基于OUT 水平的聚类分析结果Fig.4 Results of the BNPr to the clustering analysis at OUT level of the intestinal microflora in mice

2.5.2 基于门水平的聚类分析 由图5 可知，建模前各个组间相似性最低为0.72，最高为CD 组，达到0.985，说明各组之间门水平差异不大。 灌胃前期模型组与其余各组的差异明显增大， 模型组的相似性为0.99， 而模型组与其余各组之间的相似性只有0.12， 较建模前极显著降低，E 组与ABCD 组的差异较大。 灌胃后期组间的差异性极显著减小， 相似性达到0.43， 较灌胃前期的0.12极显著升高，当OTU 大于2 时，相似性大于80%，OTU 大于4 时，相似性大于90%，说明纳豆菌制剂能够有效改善肠道菌群， 调节菌群向肠道正常状态的水平发展。 A 与CE 的相似度在0.79，而灌胃前期A 与E 的相似度为0.87，AC 的相似性为0.875，AD 的相似性为0.91。 停灌期模型组与其余各组的相似性继续增加， 达到0.5， 模型组与DE组的相似性显著提高至0.7。

图5 BNPr 对小鼠肠道菌群基于门水平的聚类分析结果Fig.5 Results of the BNPr to the clustering analysis at phylum level of the intestinal microflora in mice

2.5.3 基于属水平的聚类分析 从图6 可以看出， 建模前各组之间的属水平相似性在0.65 以上，AD 组间的差异最小， 相似度最高为0.94，BCDE 组与A、L 组属水平无显著差异。 灌胃前期由于抗生素建模，使得肠道微生物大量死亡，种属发生变化， 模型组与其他各组间的差异极显著增大， 其相似性仅为0.06， 而与空白对照组相比，BCDE 4 组对应的种属相似性都增加，且C＞D＞E，说明纳豆菌制剂恢复肠道菌属， 且随着纳豆菌制剂的剂量增加而降低，AC、AD 组的种属相似性与AB 组相似性基本持平，说明低中剂量的纳豆菌制剂更有利于肠道菌群的恢复。 灌胃后期除了模型组外，各组间的种属相似性继续提高，与空白对照组相比，AB、AC 的相似度有所下降，而AD、AE 的相似度基本不变，且AD 的相似度最高为0.82，说明后期中剂量纳豆菌制剂对于肠道菌群的调节作用更明显。在停灌期，模型组与其它各组的相似度极显著提高达到0.33，而与空白对照组相比，AC、AD、AE 的种属相似度较灌胃后期显著降低，AB的相似度达到0.92，AC 的相似度与建模前相同，AD、AE 相似度最低仅为0.33，其主要原因是停灌药品后肠道菌群自由恢复，与空白对照组相比，中高剂量纳豆菌制剂调节组的乳酸杆菌属极显著降低而拟杆菌属极显著升高， 而低剂量组与空白对照组在属水平上基本保持一致。

图6 BNPr 对小鼠肠道菌群基于属水平的聚类分析结果Fig.6 Results of the BNPr to the clusting analysis at genus level of the intestinal microflora in mice

2.6 Unifrac. Weighted 分析

Unifrac.weighted 是综合考虑了不同分类单元的物种进化速率和所占比重的一种计算不同样本之间微生物群落结构相似度的指标，Score 代表样品之间的差异程度，数值区间为0～1，值越大，代表两样品之间差异性越大， 相似度越低。 Sig 为significance 缩写，代表Score 的置信度，一般认为Sig<0.001 表示Score 值是可信的。

结果表明， 在不同的时间点上组间无显著差异。在不同的组之间，由于对试验组进行了不同剂量的纳豆菌制剂的灌胃， 使得肠道中微生物发生改变，从而导致了样本间的差异及与试验前不同。AL、BL、CL、DL、EL 与其它各组，AE 与AA、AB、BB、BC、CC、CD、EE、LL，BE、AD 与CC、EE、LL，AC、BD与CC、LL，LL 与AA、AB、BB、BC、CC、CD、CE、DD、DE、EE，差异极显著；AE 与AC、BD、CE、DD、DE，EE 与AC、BD，DD 与CC、EE，CC 与CE、DE差异显著。

2.7 纳豆菌、益生菌、致病菌的变化情况

图7 结果表明： 建模前益生菌的比例为45.7%，致病菌的比例为0.89%，益生菌和致病菌的比值（简称益致比）为51.35；建模后灌胃BNPr，益生菌的比例显著降低至29.23%，致病菌的比例极显著增加至16.67%， 益致比极显著降低至1.75； 灌胃后期益生菌的比例有所增加， 达到37.75%，而致病菌的比例下降至10.6%，益致比增加至3.56；停止灌胃后，肠道菌群自由恢复，由于没有抗生素的介导，BNPr 对肠道菌群的调控作用继续增加，益生菌的比例继续增加，达到39.3%，而致病菌的比例极显著降低至7%，益致比极显著增加至5.61。在建模前，益生菌和益致比的水平最高，而建模后益生菌极显著减少，灌胃后期恢复至正常水平的82.6%，停灌后15 d 恢复至86%；而致

病菌的变化正好相反，建模前最低，而建模后致病菌增加， 到灌胃初期时致病菌的值是建模前的18.73 倍，建模后期由于纳豆菌的调节作用，致病菌极显著减少，直至恢复正常水平。 综上结果，纳豆菌能够有效调节肠道菌群失衡水平， 增加益生菌而减少致病菌在肠道的吸附定植。

表1 Unifrac. Weighted 分析结果表Table 1 Results of the unifrac. weighted analysis

表2 纳豆菌、益生菌及致病菌变化情况表Table 2 Results of the variation of the Bacillis natto， probiotics and pathogenic bacteria

图7 纳豆菌、益生菌、致病菌和三者间的比例的变化情况图Fig.7 Results of the variation of the Bacillis natto， probiotics and pathogenic bacterial and their portion variation

2.8 剂量分析

通过以上结果可见， 抗生素溶液能够杀灭肠道中大部分的细菌，导致肠道菌群失调，而BNPr的灌胃能够有效地改善这一状况， 且不同剂量的BNPr 的作用效果不尽相同。 在建模后，灌胃初期各项指标与空白对照组和模型组相比中低剂量BNPr 作用效果更明显，在灌胃后期中剂量的恢复作用更加明显，而在停灌期3 个剂量BNPr 的调节水平趋于一致。 中剂量的多样性指数高于另外两个剂量组，因此中剂量BNPr 对于抗生素介导小鼠的肠道菌群调节作用最佳。

3 讨论

益生菌是一种对宿主有益的活性微生物[22]，定植于人体肠道[23]、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用[24]。肠道中含有百万计的细菌， 但是不是所有的细菌都是有益的， 在本论文研究纳豆芽孢杆菌、 益生菌、致病菌和总菌群的数量变化情况。纳豆菌是革兰氏阳性菌，它能产生大量芽孢，耐热性强，耐酸性强，因此能够顺利到达肠道并且发挥作用[25]。 纳豆菌能够抵抗抗生素的影响， 通过增殖吸附定植[6]，增强对肠道菌群的调节。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸杆菌、乳酸菌，双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等[26]。 本试验检测到的益生菌主要有乳酸菌、双歧杆菌、放线菌、嗜酸乳杆菌等。致病菌是能够引起疾病的微生物，主要为肠杆菌科的一类致病菌，主要包括大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌及志贺氏菌等。致病菌在肠道中能够大量繁殖，释放毒素，侵袭肠道黏膜上皮细胞，引起细胞死亡造成溃烂[27]。 本试验中致病菌在建模前数量很大，但是经过建模期，致病菌的数量减少，而在灌胃期致病菌的数量显著减少， 说明纳豆菌能够抑制致病菌的生长繁殖，减少致病菌的定植。

4 结论

DNA 提取质量高， 可用于后续试验；OTU 系数随着剂量的增加而降低，Chao’s 系数、Shannon系数、ACE 系数较空白对照组显著降低，中剂量调节组最高。 Simpson 系数在低剂量最高，达到0.2633， 且低高剂量的值都极显著高于空白对照组，Good coverage 系数空白对照组都极显著低于其他各组，且3 个剂量组差异不显著，中剂量组最高达到0.9868； 从门水平上的分类情况可见建模前主要以拟杆菌门、放线菌门、变形菌门为主，灌胃初期厚壁菌门大量增加，拟杆菌门降低，而灌胃后期，厚壁菌门继续增加，停灌后直至试验结束，AB 两组厚壁菌门的含量基本达到建模前水平，厚壁菌门与拟杆菌门的比例进一步减小。 基于OTU的聚类分析情况如下：OTU 为1 时， 相似度为0.32，建模后到灌胃初期相似度仅为0.07， 停灌后OTU的相似度达到0.2。当样本间相似度达到80%以上时，OTU 在建模前为10，灌胃初期为9，灌胃后期为8，而停灌期为11。 基于门水平上的聚类分析：建模前各组间的门水平相似度达到0.72， 而建模后直至灌胃初期各组件的而相似度仅为0.12，灌胃后期组间相似度增加至0.43， 停灌后相似度增加至0.5。 基于属水平上的聚类分析：建模前属水平相似度在0.65 以上，灌胃初期模型组与其他组的相似度仅为0.06， 在灌胃后期， 种属相似度提高，在停灌期相似度达到0.33。 Unifrac. weighted在建模期、灌胃后期与灌胃初期、停灌期差异极显著。 在建模前，益生菌和益致比的水平最高，而建模后益生菌极显著减少， 灌胃后期恢复至正常水平的82.6%，停灌后15d 恢复至86%，而致病菌的变化正好相反， 建模前最低， 而建模后致病菌增加， 到灌胃初期时致病菌的值是建模前的18.73倍，建模后期由于纳豆菌的调节作用，致病菌极显著减少，直至恢复正常水平。 综上结果，纳豆菌能够有效调节肠道菌群失衡水平， 增加益生菌而减少致病菌在肠道的吸附定植。 总之，中剂量BNPr对于抗生素介导小鼠的肠道菌群调节作用最佳。