黑线姬鼠血清蛋白电泳图谱的建立与分析

贾修歧，杨新宇，金志民

（牡丹江师范学院 生命科学与技术学院，黑龙江牡丹江 157011）

黑线姬鼠（Apodemus agrarius）属啮齿目、鼠科、姬鼠属，广泛分布于我国各地农林区，不仅是主要害鼠之一，也是某些传染疾病的主要宿主和传染媒介，被列为我国卫生防疫和植物保护的重点监控对象[1]。

关于黑线姬鼠相关的文献已有许多[2-4]，但关于黑线姬鼠雌雄个体间血清蛋白电泳图谱比较分析还未见报道，本实验采用PAGE的方法对黑线姬鼠的血清蛋白进行比较分析，并建立黑线姬鼠血清蛋白图谱，为黑线姬鼠的深入研究和鼠类传染病防治提供基础理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

黑线姬鼠，于2018年10月用鼠笼捕自黑龙江省牡丹江市三道关林区（海拔329～386 m）的健康成年个体，雌雄个体各4只。

1.1.2 血清蛋白的制备

血清的制备:从黑线姬鼠心脏采血，室内静置20 min 后于 4 000 r/min，4 ℃，离心 20 min，上清液即为血清。

1.1.3 实验仪器

DYY-III2稳压稳流电泳仪、HWS28型电热恒温水浴锅（北京市六一仪器厂生产）、高速冷冻离心机（BECRMANTMCOULTERTM64R Centrifuge）、微量移液枪（Eppendorf）、AlphaImager Mini）型凝胶成像系统（美国Alpha公司，。

1.1.4 实验药品

Tris、HCl、TEMED、过硫酸铵、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚蓝、蔗糖、考马斯亮蓝R-250、丙三醇、冰乙酸等，均为天津市永大化学试剂有限公司生产的分析纯或生化试剂。

1.2 实验方法

采用PAGE和垂直板电泳的方法[5]，对黑线姬鼠的血清蛋白和组织蛋白进行分离、分析。为避免电泳处的谱带具偶然误差，分别在与每个样本相邻的点样孔进行3次重复点样。血清蛋白染色方法分别参照文献[6]。

1.3 实验步骤

（1）制备聚丙烯酰胺凝胶:将凝胶缓冲液、凝胶贮存液、超纯水、过硫酸铵按照1:3:2:1的比例混合均匀后灌至已经制备好的玻璃板模型中，插入点样梳，待胶聚合后缓慢拔出点样梳，用超纯水冲洗干净后安装在电泳槽中备用；

（2）进行预电泳40min；

（3）进行点样和电泳；

（4）待电泳结束后拆下玻璃板，取出聚丙烯酰胺凝胶放入染色液中染色30min后放入洗脱液中进行洗脱至出现清晰的血清蛋白谱带后迅速倾倒染色液，放入保存液中保存。

2 结果与分析

电泳分离黑线姬鼠血清蛋白的电泳图谱如图1所示，谱带分布和电泳迁移率见表1。

如图1、表1所示，黑线姬鼠雌、雄个体分别分离出12、19条谱带，迁移率为0.026～0.944，其中14、18、20号谱带为雌性黑线姬鼠所特有；4、7、9、10、12、15、16、19、21、22号带为雄性黑线姬鼠特有带；其余9条带为雌、雄黑线姬鼠共有带。按电泳迁移率的不同将电泳图谱划分为4个区域:Ⅰ区为清蛋白区，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区为球蛋白区。

在Ⅰ区内，黑线姬鼠雌、雄个体共分离出1、2、3号谱带，迁移率0.700～0.944，活性:3号＞2号＞1号。Ⅱ区分离出4、5、6号3条谱带，迁移率0.649～0.545，其中，4号带为雄性黑线姬鼠特有带，5、6号带为雌雄共有带，活性:5号＞6号。Ⅲ区共分离出7～14号的8条共有谱带，迁移率0.321～0.522，其中8、14号带为雌性黑线姬鼠特有带，活性:14号＞8号；7、9、10、12号带为雄性黑线姬鼠所特有，活性:10号＞9号＞12号＞7号；8、11、13号带雌雄黑线姬鼠共有带，且活性13号＞11号＞8号。Ⅳ区共有15～22号的8条谱带，迁移率0.026～0.246，其中18、20号带为雌性黑线姬鼠特有带，活性:18号＞20号；15、16、19、21、22号带雄性黑线姬鼠特有带，活性:15号=16号＞19号＞21号＞22号；17号带为雌雄黑线姬鼠共有带，活性:雌性＞雄性。

图1 黑线姬鼠血清蛋白质电泳图谱

3 结论

黑线姬鼠雌雄个体血清蛋白分别分离出12、19条谱带，通过电泳图谱可以看出黑线姬鼠血清蛋白谱带活性和分布有着明显差异。这与物种间基因的选择性表达以及雌雄激素分泌水平密切相关。球蛋白与机体的免疫功能密切相关[7]，黑线姬鼠雌雄个体在球蛋白区分别分离出12和19条谱带，由此可见雄性黑线姬鼠在自然环境中的抗逆性强于雌性黑线姬鼠。

表1 黑线姬鼠血清蛋白质谱带分布及电泳迁移率