香菇多糖对猪瘟疫苗免疫效果的影响

阳玉彪 唐桂华 郑明愈 凌丁* 李军成 莫文湛 胡传水 熊飙 杨柳

(1.广西农业职业技术学院,广西南宁 530007；2.广西横县绿健达养猪场,广西南宁 530300)

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种传播快、流行广、致死性高、接触性广、以稽留高热和皮肤与黏膜出血为主要特征的传染病[1-2]。猪瘟对养猪业的健康发展有严重影响,世界动物卫生组织把猪瘟列为A类烈性传染病,我国农业农村部兽医局把猪瘟列为一类动物疫病[1-2]。

对于猪瘟的防制,欧美等发达国家以巨大的财力补助,通过严格的扑杀净化措施来阻止猪瘟的传播[3],我国与广大发展中国家一样,因为财力不足,所以一直采用以免疫接种CSF兔化弱毒疫苗为主的综合防控,这种措施对我国CSF的防控也起到了重要作用[4]。每年,我国出现一定数量的“非典型猪瘟”“温和型猪瘟”和“母猪带毒综合征”,其原因除了猪自身、环境等因素外,免疫失败也是一个重要原因[5-6],因此有效地提高猪群猪瘟免疫水平是防控猪瘟的关键手段。

免疫增强剂可以提高猪的免疫功能和增强猪的抗病力,与猪瘟疫苗的合理搭配可以提高猪瘟疫苗免疫效果[7]。目前,研究最热的免疫增强剂之一是多糖。研究发现,多糖密码按一定规则排列形成信息分子,具有促进蛋白质合成,活化机体免疫系统,影响机体免疫如细胞免疫、体液免疫、特异性和非特异性免疫的作用。按照多糖来源不同,分为真菌、植物、藻类地衣、动物、细菌类多糖。其中真菌多糖的研究日益受到广泛关注,其作为药物研究、免疫增强剂研究分别起于20世纪50年代和60年代。作为担子菌纲伞形科真菌的香菇,是世界名贵食药两用菌之一,其中最重要的一种生物活性物质即香菇多糖,它具有免疫调节、肿瘤抑制等多种活性,且毒副作用小[8]。但是这些研究及其应用主要在人医领域,在畜牧业上的研究及其应用主要集中在对鸡的抗病免疫力、抗肿瘤、生长性能方面。在养猪生产中,香菇多糖的应用研究相对较少,这限制了其作为猪瘟疫苗免疫增强剂的应用。

因此,本研究以不同剂量的香菇多糖作为猪瘟疫苗的稀释液,免疫28日龄健康断奶仔猪,研究香菇多糖对猪瘟疫苗免疫效果的影响,旨在为新型猪瘟疫苗免疫增强剂的研发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

广西横县绿健达养猪场未免疫猪瘟疫苗的28日龄健康断奶仔猪。

1.2 试验材料

猪瘟疫苗(福州大北农生物技术有限公司生产的诸稳康,产品批号为2018015)；香菇多糖(金陵药业股份有限公司即福州梅峰制药厂生产的香菇多糖注射液,产品批号为17010201)；猪瘟抗体检测试剂盒(武汉科前生物股份有限公司生产的猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒,产品批号为180203)。

1.3 试验方法

1.3.1 试验分组 选择试验前未接种过任何猪瘟疫苗的断奶仔猪60头,试验前称重,随机分6组,每组10头,第1组(空白对照组)用生理盐水为稀释液,第2组(对照组)用猪瘟疫苗专用稀释液,第3、4、5、6试验组分别使用不同剂量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg) 作为猪瘟疫苗稀释液,仔猪免疫后在同等条件下进行常规的饲养管理,由专人管理和观察记录,抽血送检。

1.3.2 血清样品的采集 分别于免疫当天(0d)、免疫接种后第7、14、21、28d,用5mL一次性注射器从前腔静脉无菌采集血液3mL,于冷冻离心机以1500r/min离心10min,分离血清,将上清液移入另一新的1.5mL灭菌离心管中,-20℃保存备用。

1.3.3 猪瘟抗体检测 采用ELISA检测血清中的猪瘟抗体,严格按照猪瘟抗体检测试剂盒使用说明书进行,分别测定猪瘟疫苗免疫前(0d)以及免疫后第7、14、21和28d采集的血清样品中的猪瘟抗体水平。

1.3.4 统计分析 试验数据采用SPSS 21.0软件进行方差分析,结果用均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 各组猪瘟抗体水平

表1 不同时间各组猪瘟抗体阻断率检测结果

表2 免疫前、后猪瘟抗体阻断率检测结果

图1 免疫不同时间对猪瘟疫苗抗体阻断率的影响

由表1、2和图1可知,猪瘟疫苗接种第0d时各试验组猪瘟抗体阻断率与对照组比较,均无统计学意义(P＞0.05)；猪瘟疫苗接种后第7d和14d时,各组的猪瘟抗体阻断率平均显著高于对照组(P＜0.05)。数据统计显示,免疫后第14d、第28d,香菇多糖各剂量组的猪瘟抗体阻断率均比猪瘟疫苗专用稀释液稀释组和生理盐水稀释组有不同程度的提高,其中第4组(0.1875mg香菇多糖)的猪瘟抗体阻断率平均值分别比猪瘟疫苗专用稀释液稀释组高13.6%和12.2%。说明香菇多糖对猪瘟疫苗免疫效果有促进作用。

2.2 各组免疫合格率

表3 各组免疫保护率

图2 免疫不同时间对猪瘟疫苗免疫合格率的影响

由表3和图2可知,免疫后第14d、第28d,只有第4组和第6组的免疫合格率都达到100%。

3 讨论与小结

我国每年出现了“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“母猪带毒综合征”,除了猪自身、环境等因素可导致这种现象外,免疫失败是出现CSF不断发生和流行的一个重要原因。因此,寻求一种确实有效的提高猪群猪瘟疫苗免疫抗体水平的新型免疫增强剂,是猪场防控猪瘟的关键手段之一。

我国资源丰富,香菇产量世界上最大,其香菇化学成分也丰富,药理作用明显,是最有开发价值的功能性食品和药品资源之一。作为香菇中主要生物活性成分的香菇多糖,具有增强免疫力、抗病力等作用。香菇多糖在养猪生产中的应用研究为其在养猪生产上的应用奠定了基础,为畜牧业健康发展、增产增收发挥作用。

香菇多糖是一种宿主防卫增强剂。有报道显示香菇多糖能够显著增强鸡的淋巴细胞转化水平和血清抗体水平[9]。本研究通过用香菇多糖作为猪瘟疫苗的稀释剂稀释疫苗进行免疫接种,研究香菇多糖对猪瘟疫苗的免疫效果。从试验结果来看,使用不同剂量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg)作为猪瘟疫苗稀释液,免疫28日龄健康断奶仔猪,在同等条件下进行常规饲养和管理,期间采食、饮水和排泄物均正常,未出现发病和死亡情况,各试验组仔猪生长良好,说明香菇多糖对断奶仔猪是安全的。 以不同剂量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg)作为猪瘟疫苗稀释液免疫仔猪,与常规猪瘟疫苗稀释液相比,各试验组血清中的猪瘟抗体水平均有不同程度变化,表明香菇多糖具有提高猪瘟疫苗抗体水平的效果。且以第4组(0.1875mg香菇多糖)产生的猪瘟抗体水平最高,维持时间较长。免疫后第 14d、第 28d,第 4组(0.1875mg香菇多糖)和第6组(0.75mg香菇多糖)的免疫合格率都达到100%。