泰地罗新注射液在藏鸡体内的药动学研究

蒲秀花，赵 森，者永辉

（1．青海省海西州德令哈市尕海镇畜牧兽医工作站，青海海西州817099；2．青海省海西州动物疫病预防控制中心，青海海西州817099；3．青海省西宁市畜牧兽医站，西宁810000）

泰地罗新（Tildipirosin，TIP）是一种新型大环内酯类半合成抗菌药，为泰乐菌素的衍生物，其注射液于2011年在欧洲被批准生产上市［1］，是一种广谱、高效的抗微生物药物，对引起畜禽呼吸道疾病的病原菌，如胸膜肺炎放线杆菌［2］、多杀性巴氏杆菌［3］、支气管败血波氏杆菌［4］、副猪嗜血杆菌［5］、溶血性曼海姆菌［6］等具有特效，是治疗畜禽呼吸道疾病极为理想的药物［7］。目前，我国正处于新兽药研究阶段，有关其药物动力学的研究报道较少，未见其在藏鸡体内的药物动力学研究报道。为了解其在藏鸡体内的吸收、分布、转化及排泄规律，本研究建立了泰地罗新高效液相色谱检测方法，研究了其在藏鸡体内的药物动力学特征，为其新兽药研发和临床使用提供理论参考。

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 试验药品 泰地罗新标准品（批号：T440150，纯度98．2%）购自美国加拿大Trc 公司，准确称取泰地罗新标准品100 mg 溶于50 mL 甲醇中，配制成2．0 mg／mL 的泰地罗新标准品标准溶液，避光保存；泰地罗新注射液（批号：1303001，规格50 mL）山东齐鲁动物保健品有限公司提供。乙腈、甲醇：色谱级，购自美国Thermo 公司；甲酸、磷酸二氢钾：分析纯，购于国药集团。

1．1．2 试验仪器 美国Agilent1200 型高效液相色谱仪，自动进样器、紫外检测器，Agilent ZORBAX SB-C18 柱（250 mm×4．6 mm，5 μm） ；TG-16W 高速离心机：长沙湘仪离心机有限公司；万分之一电子天平，德国赛多利斯公司；XH-B 涡旋混合器：江苏康佳医疗器械有限公司；氮吹仪：N-EVAPTM111型，美国路易公司。

1．1．3 试验动物 藏鸡12 羽，体重（650±50） g，购于海西州藏鸡养殖户。自由饮水和采食，饲料为不含任何药物的全价商品日粮，饲养在试验鸡舍中，温度控制在（20±2）℃。在试验前观察饲喂1 周；试验前12 h 禁食，自由饮水；试验期间自由采食和饮水。

1．2 试验方法

1．2．1 色谱条件 经过多次试验，确立泰地罗新的高效液相色谱检测条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；检测波长为289 nm；流动相为甲醇-乙腈-0．05 mol／L磷酸二氢钾溶液（pH7．00）＝（35 ∶30 ∶35）；流速为1．0 mL／min；进样量为20 μL；柱温为（30±0．1）℃。

1．2．2 药物动力学试验设计 根据泰地罗新的推荐使用剂量，12 羽藏鸡以4 mg／kg．bw 的剂量肌内给药。给药后分别于0．0833、0．25、0．5、1、2、4、6、8、10、24、48、72、96、120、144、192、240、288 和336 h于翼下静脉采血2 mL，置于已添加肝素钠的聚丙烯离心管中，以3000 r／min 离心15 min，取上清液于-20 ℃冷冻保存，待测定。

1．2．3 血浆样品处理 准确吸取血浆0．5 mL，分别加入3．0 mL 乙腈提取2 次，每次涡旋振荡1 min，4000 r／min 4 ℃离心10 min；合并2 次提取液取上清于10．0 mL 尖底离心管中，45 ℃氮气吹干，再用200 μL 流动相溶解，涡旋振荡1 min，10000 r／min 4 ℃离心10 min，取上清液即为待测样品。

1．2．4 血浆标准曲线的建立 向8 支10．0 mL 聚丙烯离心管中各加入0．5 mL 空白血浆，留一支作空白对照，然后依次加入泰地罗新标准工作液，便得到药物浓度依次为0．01、0．05、0．10、0．50、1．00、2．00、2．50 μg／mL 的血浆样品。分别按照泰地罗新血浆样品处理方法处理后，进样分析。以测得泰地罗新的峰面积（A）为横坐标，药物浓度（C）为纵坐标，建立标准曲线，得出泰地罗新回归方程。

1．2．5 方法学验证 取空白血浆0．5 mL，添加适量泰地罗新标准工作液，使其浓度分别为2．50、1．00、0．10 μg／mL，按照血浆样品的处理方法处理，进行HPLC 检测，每个浓度设置5 个平行，测定日内变异系数；重复检测5 d，测定日间变异系数；并计算其回收率。

1．2．6 数据处理及统计分析 方法学验证考察数据采用SPSS 软件分析处理；药-时曲线图和消除动态图采用Excel 软件绘制；药物动力学模型拟合及参数计算均采用3P97 药动学软件分析计算。

2 结果与分析

2．1 方法专属性 通过反复多次试验所建立的色谱条件，基线平稳，药物峰形良好，泰地罗新在色谱条件下均能与杂质峰良好分离。结果表明，本测定方法简便，杂质峰干扰小、分离度良好，泰地罗新出峰时间为14．2 min，空白血浆和血浆中添加药物色谱图见图1和图2。

根据标准曲线建立的方法，以测得泰地罗新的峰面积（A）为横坐标，药物浓度（C）为纵坐标，建立标准曲线如图3。泰地罗新在0．01～2．5 μg／mL的浓度范围内，具有良好的线性关系，回归方程为C＝0．0008A+0．0174，相关系数为0．9999。

2．2 方法学验证 在空白血浆中添加泰地罗新标准工作液，使其浓度分别为0．10、1．00、2．50 μg／mL，按血浆样品处理，HPLC 检测，每个浓度设置5 个平行，测定日内变异系数在5%以内；重复检测5 d，测定日间变异系数在10%以内；回收率为89．19%～91．36%；检测限（LOD）、定量限（LOQ）分别为0．01、0．05 μg／mL。具体数据如表1。

2．3 药物动力学数据 按照试验设定方案进行给药和样品处理，经高效液相色谱分析检测、软件分析计算。藏鸡肌内注射泰地罗新各时间点药浓度见表2，药物动力学参数见表3。

图1 空白血浆对照色谱图Fig 1 Chromatograms of control plasma

图2 血浆0．1μg／mL 色谱图（A 为泰地罗新）Fig 2 Chromatograms of Tildipirosin in Tibetan Chicken plasma（0．1 μg／mL）

图3 泰地罗新在血浆中的标准曲线Fig 3 Standard curve of determination of Tildipirosin in pigs plasma

表1 泰地罗新在血浆中的方法学考察数据（n=5）Tab 1 The result of method validation of Tildipirosin in plasma （n=5）

续表

表2 藏鸡肌内注射泰地罗新（4 mg／kg．bw）后各时间点的血药浓度（n=12）Tab 2 Plasma concentration vs time after a single 4 mg／kg．bw im Tildipirosin Injection in Tibetan Chicken（n=12）

表3 肌内注射泰地罗新4 mg／kg．bw 在藏鸡体内的药动学参数（n=12）Tab 3 Pharmacokinetic parameters of Tildipirosin（4 mg／kg．bw） in Tibetan Chicken（n=12）

由表1、2可见，泰地罗新肌内注射后，在藏鸡体内吸收迅速，达峰时间快，达峰浓度较高，消除半衰期较长，药-时曲线（图4）符合有吸收三室开放模型，其药-时方程为C＝0．4461e-0．1748t+0．3721e-0．0257t+0．2903e-0．0074t-1．1086e-2．0134t。

图4 泰地罗新肌内4 mg／kg．bw 给药的血药浓度-时间曲线Fig 4 Changing curve of Tildipirosin plasma concentration vs time after a single 4 mg／kg．bw im Tildipirosin Injection in Tibetan Chicken

3 讨论与结论

藏鸡是至今世界上在高海拔生活历史较为悠久的原始地方小型鸡种，其体型轻小、胸腿肌肉发达、极耐粗饲、抗病力强，肉质鲜嫩、风味独特，营养丰富，药用价值极高，对高原恶劣的气候和低氧环境有良好的适应能力，是藏区养鸡业发展极其重要的品种资源［8-9］。研究泰地罗新在藏鸡体内的药物动力学特征，对了解其在机体内的变化规律，指导临床合理科学的使用意义重大。

研究表明，单剂量肌内注射泰地罗新（4 mg／kg．bw）后，在藏鸡体内的药-时曲线符合有吸收三室开放模型；Tmax为（1．727±0．237） h，Cmax为（0．938±0．121）μg／mL，t1／2为（36．198±2．394） h，AUC 为（55．564±3．675） μg·h／mL，Vd为（16．155±2．676） mL／kg。Rose 等［10］报道，猪单剂量给泰地罗新4 mg／kg．bw，Tmax为（0．38±0．14） h，Cmax为（0．895±0．453） μg／mL，t1／2为（106±15） h，AUC 为（11．012±2．989） μg·h／mL；Menge 等［11］报道，给牛单剂量皮下注射4 mg／kg．bw泰地罗新，Tmax为0．383 h，Cmax为0．7 μg／mL，T1／2为216 h；郭美珍［12］报道皮下注射泰地罗新在健康小鼠血浆的Tmax为0．083 h，t1／2为（14．123±1．758） h。由此可知，本研究结果与泰地罗新在猪、牛及小鼠体内的Tmax有一定的差距，即在藏鸡体内达峰时间相对较长；在Cmax方面与国内外相关报道基本相似；泰地罗新在藏鸡体内的t1／2为（36．198±2．394） h，较其在小鼠体内（14．123±1．758） h 长，较猪（106±15） h、牛216 h 均较短；这可能与动物种类及高原环境有一定的关系。泰地罗新注射液在藏鸡体内达峰时间短，在机体内转运速度快，这可能与泰地罗新本身脂溶性较高有关。泰地罗新在藏鸡体内的半衰期约为36 h 左右，说明其在藏鸡体内消除慢、血浆清除率低，药效持久。与大环内酯类的其他药物相比，泰地罗新以单剂量肌肉注射给药就可以保持较长的药物浓度，不需要多次重复给药，对耐药性的控制和临床治疗效果的发挥具有较大的优势［10，13］。因此，本研究将对泰地罗新的新兽药研发和临床使用提供重要参考。