黄牛茶根醇提物的抗炎作用研究

唐周一豆，覃骊兰

（广西中医药大学，广西 南宁 530200）

黄牛茶为藤黄科黄牛木属植物黄牛木Cratoxylon ligustrinum（Spach）Blume.的嫩叶、根或树皮，别名为黄芽木，主产于广西金秀、平南、桂平、北流、龙州、武鸣、隆安、靖西等地，来源广泛［1-2］。据记载，黄牛茶叶含黄酮苷、酚类、糖类，根含黄酮苷、酚类、氨基酸［3］。笔者在前期预实验发现黄牛茶根部的抗炎活性较好，故通过实验进一步探讨其抗炎作用，为黄牛茶的进一步开发利用提供参考。

1 实验材料

1.1 仪器及试剂 Secura225D-1CN型万分之一电子天平（德国赛多利斯）；N-1100型旋转蒸发器（德国Heidolph）；1～100µl型移液枪（德国Eppendorf公司）；小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：H052）。

1.2 药物 黄牛茶，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为藤黄科黄牛木属植物黄牛木Cratoxylon ligustrinum（Spach）Blume.的根；醋酸地塞米松（浙江仙琚制药股份有限公司，生产批号：161259）；角叉菜胶（德国Sigma公司，批号：C1013-100G）。

1.3 动物 清洁级昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g，购自湖南省斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（湘）2016-0002。

2 方 法

2.1 黄牛茶根醇提物的制备参考文献［4］方法，将黄牛茶根粉碎，过50目筛，加10倍（m/V）量的60%乙醇，浸泡30 min后回流提取1 h，过滤；再次加入8倍量的60%乙醇回流提取1 h，合并提取液，旋转蒸发浓缩，配制成每毫升含0.65 g和1.3 g生药的溶液，置4℃冰箱中备用。

2.2 二甲苯致小鼠耳廓肿胀法［5］取40只小鼠随机分成4组，每组10只，分别为：模型组（予蒸馏水）、醋酸地塞米松组（予醋酸地塞米松0.005 g/kg）、黄牛茶根醇提物低剂量组（13 g/kg）、黄牛茶根醇提物高剂量组（26 g/kg）。小鼠均以20 ml/kg的给药体积灌胃给药，每天1次，连续给药7 d。末次给药后1 h，每组小鼠右耳用精密移液枪均匀涂布二甲苯30 μl，双面致炎，以左耳作为对照。20 min后将小鼠脱颈椎处死，剪下两耳叠加整齐，用8 mm打孔器打下耳片，精确称重，由右耳重量减去左耳重量得肿胀度，并按以下公式计算肿胀抑制率。

2.3 棉球致小鼠肉芽肿胀法［6］动物分组和用药同2.2。各组小鼠分别按20 ml/kg腹腔注射4%水合氯醛麻醉，于小鼠左右两侧腋窝下分别植入已高温灭菌的棉球（在烘箱中100℃下干燥12 h至恒重5.0±0.1 mg），缝合，第二天开始连续以20 ml/kg的给药体积灌胃给药7 d，末次给药后24 h脱颈椎处死小鼠，将左右两侧腋下的棉球取出，剔除脂肪组织，将棉球放入60℃烘箱干燥12 h至恒重，精密称量，以左右棉球的平均值与棉球的初始重量相减得肉芽肿质量。并按以下公式计算肿胀抑制率。

2.4 角叉菜胶致小鼠足趾肿胀法［7］取50只小鼠随机分成5组，每组10只，分别为：空白组（予蒸馏水）、模型组（予蒸馏水）、醋酸地塞米松组（予醋酸地塞米松0.005 g/kg）、黄牛茶根醇提物低剂量组（13 g/kg）、黄牛茶根醇提物高剂量组（26 g/kg）。各组小鼠均以给药体积为20 ml/kg的剂量灌胃给药，连续7 d，每天1次。末次给药后30 min，除空白组外，余组每只小鼠右后肢足跖皮下注射50 μl 1%角叉菜胶，4 h后脱颈椎处死小鼠，眼球取血1 ml，于踝关节处剪下左右后足，称重，每组小鼠左右足趾质量相减得肿胀度。并按以下公式计算足趾肿胀抑制率。

血样本于室温下自然凝血2 h，3 500 r/min离心10 min，吸取血清，参照试剂盒说明书步骤测定血清中TNF-α的含量。

2.5 统计分析方法 采用SPSS统计软件进行分析，所有数据以均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05时为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 黄牛茶根醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用 见表1。与模型组比较，阳性药醋酸地塞米松组及黄牛茶根醇提物高剂量组均可以显著抑制二甲苯所引起的小鼠耳肿胀炎症的发生（P＜0.05）。

表1 黄牛茶根醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

表1 黄牛茶根醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

注：与模型组比较，①P＜0.05

组 别模型组醋酸地塞米松组黄牛茶根醇提物低剂量组黄牛茶根醇提物高剂量组n 10 10 10 10剂量（g/kg）—0.005 13 26耳廓肿胀度（mg）6.48±3.88 2.80±1.38①3.85±2.11 2.55±1.89①抑制率（%）—56.79 40.59 60.65

3.2 黄牛茶根醇提物对棉球致小鼠肉芽肿的抑制作用 见表2。与模型组比较，醋酸地塞米松组及黄牛茶根醇提物高、低剂量组均对棉球致小鼠肉芽肿有极显著的抑制作用（P＜0.01）。

表2 黄牛茶根醇提物对棉球致小鼠肉芽肿的抑制作用

表2 黄牛茶根醇提物对棉球致小鼠肉芽肿的抑制作用

注：与模型组比较，①P＜0.01

组 别模型组醋酸地塞米松组黄牛茶根醇提物低剂量组黄牛茶根醇提物高剂量组n 10 10 10 10剂量（g/kg）—0.005 13 26干肉芽肿质量（mg）9.95±1.95 5.66±0.47①7.60±0.70①6.72±0.65①抑制率（%）—43.14 23.58 32.43

3.3 黄牛茶根醇提物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的抑制作用

3.3.1 小鼠足趾肿胀的测定 见表3。与空白组比较，模型组小鼠足趾肿胀显著（P＜0.01）；与模型组比较，醋酸地塞米松组及黄牛茶根醇提物高、低剂量组对小鼠足趾肿胀均有显著的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）。

表3 黄牛茶根醇提物对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

表3 黄牛茶根醇提物对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

注：与空白组比较，①P＜0.01；与模型组比较，②P＜0.05，③P＜0.01

组 别空白组模型组醋酸地塞米松组黄牛茶根醇提物低剂量组黄牛茶根醇提物高剂量组n 剂量（g/kg） 抑制率（%）10 10 10 10 10— —— —0.005 13 26足趾肿胀度（mg）2.98±1.88 61.81±13.88①11.89±4.55③42.64±18.35②40.90±13.01③80.76 31.01 33.83

3.3.2 小鼠血清中的TNF-α含量测定 见表4。与空白组比较，模型组小鼠TNF-α含量显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，醋酸地塞米松组及黄牛茶根醇提物高、低剂量组中的TNF-α含量无显著改善（P＞0.05）。

表4 黄牛茶根醇提物对足趾肿胀小鼠血清中TNF-α的影响

表4 黄牛茶根醇提物对足趾肿胀小鼠血清中TNF-α的影响

注：与空白组比较，①P＜0.05

组 别空白组模型组醋酸地塞米松组黄牛茶根醇提物低剂量组黄牛茶根醇提物高剂量组n 剂量（g/kg）10 10 10 10 10— —0.005 13 26 TNF-α（ng/L）294.52±61.70 362.65±58.23①311.67±73.74 364.65±41.56 300.08±66.66

4 讨 论

炎症（inflammation）是机体在遇到各种刺激时所做的防御反应，通常表现为红、肿、热、痛和功能障碍。在大多数情况下，炎症对于机体是有益的，这是机体面对刺激时的一种防御能力，机体通过炎症反应控制损伤的进一步发生，然后在某些失控的情况下也可能会对机体有一定的损害。在炎症发展过程中，一方面，损伤因子可直接或间接损伤组织和细胞，另一方面，机体通过一系列血管反应、液体渗出、白细胞渗出及活化，稀释、中和、杀伤和包围损伤因子；同时，通过实质和间质细胞的再生使受损伤的组织得以修复和愈合。因此可以说炎症是损伤、抗损伤和修复的统一过程［8］。

黄牛茶主产于广西，其药理活性及作用机制尚不明确。现采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠棉球肉芽肿法以及小鼠足肿胀法观察黄牛茶根醇提物对小鼠急慢性炎症的影响，以期为黄牛茶的临床应用及产品开发提供一定的实验依据。

本试验研究表明，黄牛茶根醇提取物对小鼠耳廓肿胀、棉球肉芽肿以及足肿胀均具有较强的抑制作用，但是对足趾肿胀小鼠血清中的TNF-α炎症因子含量无显著影响。在实验过程中，我们还观察到阳性药醋酸地塞米松组小鼠体重减轻，而黄牛茶根醇提取物高、低剂量组小鼠的体重均处于正常状态，由此推测黄牛茶副作用少，今后可进一步研究其药理作用，以期扩大其临床应用。