肤阴清洗液的质量控制研究

陈武亮

肤阴清洗液是由我院自制的妇科清洗溶液，主要是根据传统方剂处方进行添加、去除制成的中药外用制剂。洗液制剂的组成主要借鉴清代名医高秉钧的《疡科心得集》[1]、顾世澄的《疡医大全》[2]以及王清任的《医林改错》[3]。其中的苦参汤、塌痒汤以及蛇床子散精炼而成的。在现代药理学研究中，塌痒汤由苦参、威灵仙以及蛇床子等中药材组成，主要用于治疗妇科中的湿热下注、阴中作痒以及内外生疮[4]，在现代医疗中可用于治疗阴道滴虫病。我院自制的肤阴清洗液主要用于清热燥湿、祛风解毒、杀虫止痒、收敛止痛。用于妇女阴道炎、阴痒症、宫颈炎、性病防治，亦用于产褥期、人工流产及妇科手术后的止痛和抗感染，临床的疗效比较显著，安全性好，不良反应的发生率小。本文采 用了薄层色谱法对制剂中的蛇床子、苦参、黄柏进行鉴定，以较好地掌握其制备方式及质量。现报道如下。

1 方剂的组成及制备

1.1 方剂组成

蛇床子200 g、白藓皮200 g、黄柏130 g、百部130 g、苦参130 g、大黄100 g、桉油5 ml、冰片2 g。

1.2 制备方法

将上述各个药材取蛇床子、白藓皮、黄柏、百部、苦参、大黄六味中药材加8 倍量水进行浸泡4 h，武火煎煮至沸腾后，文火持续加热2 h 后，将药液过滤网进行过滤，重复上述操作煎提两次，第二次沸腾时间为90 min，将2 次滤液合并浓缩至稠膏状，放 冷，加入3 倍量乙醇进行醇沉，静置过夜，过滤，取滤液回收乙醇至无乙醇味。加纯化水至约800 ml，然后用适量乙醇溶解桉油、冰片和适量的防腐剂并慢慢加入上述溶液中，边加边搅拌，放凉，最后加纯化水至1000 ml，过滤，分装，即得。

2 仪器与试药

2.1 仪器

美国梅特勒公司生产的电子天平（精密度为0.0001 g），上海精密科学仪器有限公司生产的精密pH 计，青岛海洋化工厂股份有限公司生产的薄层色谱板（硅胶G 板、硅胶GF254 板）。

2.2 试药

蛇床子素对照品（生产批号：12036-201512）、盐酸小檗碱对照品（生产批号：12014-201510）、苦参碱对照品（生产批号：12062-201509）、蛇床子对照药材（生产批号：130214-201504）、苦参对照药材（生产批号：131019-201507）、黄柏对照药材（生产批号：131114-201508）均购于中国药品生物制品鉴定所；肤阴清洗液由我院制剂室制备提供，其余的鉴别试剂均为分析纯。

3 质量标准

3.1 性状

本品为棕黄色液体，气味有强烈的桉油味道。

3.2 pH 值

液体的pH 值应为3.5～5.0。

3.3 鉴别

取本品20 ml 置于蒸发皿中，水浴锅上60 ℃蒸干，残渣加入乙醇溶液10.0 ml 进行溶解，滤过，滤液浓缩至4.0 ml 后作为供试品溶液，备用。另取蛇床子素对照品，精密称定后，乙醇溶液进行溶液，至容量瓶中定容配制成每1.0 ml 含有1.0 mg 的溶液，作为对照品溶液，备用。按照薄层色谱法[5]，吸取供试品和对照品溶液各2.0 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠黏合剂的硅胶G 薄层色谱板上，以苯-醋酸乙酯（30∶1）作为展开剂，标尺在1.2 cm 处进行刻度标记，将供试品溶液和对照品溶液点于刻度线，置于上述展开剂中，展开，至展开剂移动至上层刻度线后，取出，晾干，置于紫外灯下在365 nm 处进行检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，具有相同的荧光斑点。见图1。

图1 薄层色谱对照图

薄层色谱图表明，将蛇床子素作为对照品，供试品与对照品色谱在相同的位置上具有相同颜色的荧光斑点，供试品与阴性对照品色谱在其他位置上会显示不同的斑点。

3.4 相对密度测定

经制成的肤阴清洗液三个批次的相对密度分别为1.02、1.024、1.023，与《中华人民共和国药典》[6]2015年版一部附录中规定标准≥1.01 相符合，结果表明本溶液工艺的制定是可行的。

3.5 定性鉴别

3.5.1 苦参的薄层色谱鉴别

3.5.1.1 供试品溶液的配制 取肤阴清洗液20 ml，用氨水对pH 值进行调节，调节值在9.0～10.0，后置于分液漏斗中，用三氯甲烷35 ml 振摇提取，取三氯甲烷溶液蒸干，残渣加入乙醇溶液2.0 ml，将残渣溶解后密封后作为供试品，备用。

3.5.1.2 阴性样品溶液的配制 取除了苦参外的剩余中药材，按照制备工艺制成不含苦参的阴性样品溶液，按照上述供试品溶液的制备方式配制成阴性样品溶液，密封后备用。

3.5.1.3 对照品药材溶液的配制 取苦参对照药材0.2 g，加入乙醇溶液10 ml 冷浸后过夜，滤过，取滤液作为对照药材溶液，密封后备用。

3.5.1.4 对照品溶液的配制 苦参碱对照品精密称定后加入乙醇溶液制备成每1.0 ml 中含有1.0 mg 对照品的对照品溶液，密封后备用。

按照薄层色谱法《中华人民共和国药典》2015年版一部附录VI B 试验方式步骤，微量加样枪分别吸取上述配制的四种溶液5.0 μl，分别点于同一用羧甲基纤维素钠作为黏合剂的硅胶G 薄层色谱板上，并以标尺在相应位置横线作为起始和终止标记，以甲苯-丙酮-甲醇（8∶3∶1.5）作为展开剂，置于氨蒸汽中预饱和15 min，至展开剂移动至终止线后，将色谱板取出，晾干。以碘化铋钾试液喷散色谱板使之变色，供试品色谱中，在与对照药材色谱以及对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，阴性样品溶液未有干扰。见图2。

图2 苦参薄层色谱图

3.5.2 黄柏的薄层色谱鉴别

3.5.2.1 供试品溶液的配置 取肤阴清洗液20 ml，盐酸溶液1.0 ml 加入混溶后置于分液漏斗中，采用三氯甲烷35 ml 振摇均匀后将溶液进行提取，取三氯甲烷溶液，置于水浴锅上蒸干，残渣置于蒸发皿中加入甲醇1.0 ml 溶解，密封后作为供试品溶液进行备用。

3.5.2.2 阴性样品溶液的配制 取除了黄柏药材外其他的方剂中的药材，按照制备工艺制成缺少黄柏的阴性样品，按照上述供试品溶液的制备方式制成阴性样品溶液，密封后备用。

3.5.2.3 对照品药材溶液的制备 取黄柏对照药材0.1 g 精密称定后加入甲醇溶液5.0 ml，加热回流15 min后，将溶液滤过，取滤液作为对照药材溶液，密封后备用。

3.5.2.4 对照品溶液的配制 取盐酸小檗碱对照品精密称定后，甲醇溶液进行溶解，并制备成每1.0 ml溶液甲醇溶液中含有0.5 mg 盐酸小檗碱对照品的溶液，密封后作为对照品溶液，备用。

按照薄层色谱法《中华人民共和国药典》2015年版一部附录Ⅵ B 实验，吸取3.5.2.1 项下的供试品溶液和3.5.2.2 项下的阴性样品溶液各5.0 μl，3.5.2.3 和3.5.2.4 项下的对照药材溶液以及对照品溶液各2.5 μl，分别点于同一用羧甲基纤维素钠作为黏合剂的硅胶G 薄层色谱板上，在标记为横线的地方作为展开的起始位置，并在色谱板的相对顶端以标尺进行终止线的标记。以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）作为展开剂，展开至终止点处，取出，晾干。置于紫外光灯在365 nm 处检查，供试品色谱中，在与对照药材色谱以及对照品色谱相应的位置，会显示相同颜色的荧光斑点，其中阴性样品溶液并未见干扰。见图3。

图3 黄柏的薄层色谱图

3.6 含量测定

3.6.1 色谱条件的确定 色谱柱采用 EcosilC18（250 mm×4.6 mm,2.5 μm），流动相为乙腈：0.2 mol/L磷酸二氢钾（0.2 mol/L 硫酸二氢钾中含有0.2%三乙胺，采用磷酸溶液将pH 值调为2.7）=8∶92，检测波长为209 nm，柱温为室温，进样量为15 μl，流速为1.0 ml/min。按照苦参碱计算理论塔板数应≥2500。

3.6.2 对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品5.0 mg，置于25 ml 的棕色容量瓶中，以流动相为溶解溶液，将苦参碱对照品溶液后定容至刻度，摇匀后，采用0.22 μm 微孔滤膜过滤，得到苦参碱对照品溶液，储存备用。

3.6.3 供试品溶液的制备 移液管取肤阴清洗液10 ml置于分液漏斗中，采用氨试液将溶液的pH 值调节值9.0～10.0，加入氯仿进行提取，10 ml/次，共提取4 次，合并提取液，置于水浴锅上蒸干后，残渣用流动相进行溶液，定容至25 ml 容量瓶中，摇匀后即得供试品溶液。

3.6.4 苦参碱的含量测定 分别精密吸取3.6.2 和3.6.3 项下的供试品溶液以及对照品溶液，按照3.6.1项下的色谱条件进行测定，记录色谱图，按照外标法计算供试品中苦参碱的含量，取5 批次（20160112、20160221、20160523、20160721、20160830）的肤阴清洗液按照上述方法进行含量测定，在本品中苦参碱的含量均＞0.4 g/L。

表1 肤阴清洗液中苦参碱的含量(n=5)

3.7 微生物限度检查

按照2015年版《中华人民共和国药典》微生物限度检查法对肤阴清洗液进行卫生学检查，结果符合搽剂项下的规定。

3.8 稳定性试验

取样品溶液5 批次，经过室温留样12 个月进行观察，结果在12 个月内样品的性状、检查、鉴别、含量、稳定性等均无明显的变化。

4 小结

祖国医学内容博大精深，其中妇科症状阴痒症主要病因在于肝、脾功能失常，肝经湿热或者肝郁脾虚化火生湿，湿热之邪气随经下注，蕴结阴器或者虫扰阴部则发为阴痒[7-8]。肤阴清洗液主要由蛇床子、大黄、苦参、黄柏等中药制成，其中蛇床子祛风除湿，黄柏、苦参清热燥湿，白藓皮清热解毒止痒，百部独擅杀虫，而蛇床子中的蛇床子素具有显著的抗滴虫的效果，苦参药材中含有的苦参碱、氧化苦参碱，黄柏中的有效成分盐酸小檗碱，百部和白藓皮中均含有多种生物碱类成分，有较强的体外抗菌的活性，可以抑制细菌、霉菌、滴虫的生长[9-10]。本品中的诸药合用，制成浓缩洗液，直接作用于病变的部位，比较容易吸收。

在本次制备洗液过程中，采取了较为传统的水煎煮提取的方式，将各个药材进行充分的浸泡，采用细致的纯化处理，提高了洗液的质量。在本次研究中制定的肤阴清洗液的质量标准，首先采用了薄层色谱法对于处方中蛇床子中药材，采用蛇床子素对照品、供试品溶液以及阴性对照品溶液进行鉴别，又采用黄柏和苦参的相应对照品、供试品和阴性对照品进行定性鉴别，并对其相对密度进行测定，以苦参碱含量作为对照进行含量测定，微生物检查均符合《中华人民共和国药典》中的规定。并通过多次实验，确定可以有效的对肤阴清洗液的质量进行控制，表明了肤阴清洗液的制备工艺有效并可行，同时质量具有可控性。