不同炮制工艺对蛇床子理化性质和蛇床子素含量的影响

沈 迪，陈锦红，朱小峰

（浙江中法制药有限公司，浙江 嘉兴 314008）

蛇床子是伞形科植物蛇床（Cnidium monnieri(L)Cuss.）的干燥成熟果实。夏、秋二季果实成熟时采收，除去杂质，晒干[1]。蛇床子外用能燥湿祛风、杀虫止痒，用于阴部湿痒、湿疹、湿疮、疥癣；并且它辛润而不燥，性温能助阳，入肾经而有温肾壮阳之功，故可用于肾阳虚衰所致的阳痿遗精，宫冷不孕等症[2]。《神农本草经》将蛇床子列为上品，言其“主男子阳痿，久服轻身”[3]。唐宋时期，蛇床子临床作为补虚常用药。明清以后，近代以来，蛇床子主要作外用，很少作内服。如《本草正义》提到蛇床子“绝少用为内服之药”[4]。

关于蛇床子的炮制首见于《雷公炮灸论》[5]“须用浓兰汁、并百部草根自然汁二味，同浸三伏时，漉出，日干。却，用生地黄汁相拌蒸，从午至亥，日干用”；《日华子本草》[6]有云“蛇床，凡合药服食即挼去皮壳取仁，微炒杀毒即不辣，作汤洗病则生使”；有文献认为蛇床子入药内服须经过炮制[7]。蛇床子的主要炮制方法有炒制、酒炙、酥炙等。现今，古代的炮制方法已基本不用，一般市场上提供的都是蛇床子生品。现为了进一步研究炮制的蛇床子和生品的理化性质和蛇床子素含量的差异，为临床用药提供依据，本实验对不同炮制工艺的蛇床子理化性质和蛇床子素含量进行比较和研究。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（岛津 LC-10ATVP）；CPA324S型电子天平；DHG-9070A电热恒温古风干燥箱；Sx2-2.5-10型箱式电阻炉；三明紫外仪；超声清洗仪。

蛇床子的生产厂家安徽盛海堂中药饮片有限公司，批号2016090151，经鉴定为伞形科植物蛇床（Cnidium monnieri(L) Cuss.）的干燥成熟果实；蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110822-201308）；乙腈为色谱纯；乙醇为分析纯；纯化水；其它溶液均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 蛇床子的炮制方法

①生品：取蛇床子药材，筛选，除去杂质，即可[8]。②炒蛇床子：取上述生品50 g，置锅内，用文火炒，至有香味逸出，取出摊凉。③酒炙：取上述生品50 g，加10 ml黄酒，与净药材拌匀，稍闷，吸尽，用文火炒至香气逸出，色变深时，取出摊凉。④酥炙：取上述生品50 g，酥油10 g，小火拌炒至酥油吸尽，香气渐浓即可，取出摊凉。上述4种蛇床子均捣碎。用于含量测定的过30目筛后备用。

2.2 蛇床子及炮制品的水分测定

根据中国药典水分测定法中第二法（烘干法）[9]对蛇床子及各炮制品进行水分测定：取供试品2～5 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，开启瓶盖在105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg。根据减失的重量，计算供试品水分含量。蛇床子及炮制品平均含水量的测定结果：生品蛇床子11.1%，炒制3.4%，酒炙9.4%，酥炙2.3%。

2.3 蛇床子及炮制品的总灰分

根据中国药典[9]对蛇床子及各炮制品进行水分测定：粉碎供试品，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品3～5 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至600℃，使完全灰化并至恒重。蛇床子及炮制品灰分的测定结果：生品蛇床子10.9%，炒制11.9%，酒炙11.3%，酥炙8.5%。

2.4 蛇床子及炮制品酸不溶性灰分

根据中国药典[9]的方法，对蛇床子及各炮制品进行酸不溶性灰分的测定：取2.3项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10 ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5 ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。蛇床子及炮制品的酸不溶性灰分的测定结果：生品蛇床子3.1%，炒制2.7%，酒炙3.7%，酥炙2.1%。

2.5 蛇床子及炮制品浸出物

根据中国药典[9]的方法，取供试品约4 g，精密称定，置250 ml的锥形瓶中，精密加95%乙醇100 ml，密塞，冷浸，前6个小时内时时振摇，再浸置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）。蛇床子及炮制品的浸出物含量的测定结果：生品蛇床子18.2%，炒制17.1%，酒炙15.1%，酥炙23.5%。

2.6 蛇床子及炮制品蛇床子素的含量测定

2.6.1 色谱条件

色谱柱：迪马C18（150 mm×4.6 mm，5 μm，北京迪科马科技有限公司）；流动相：乙腈-水（65:35）；流速1.0 ml/min；检测波长322 nm；柱温35℃；理论板数按蛇床子素计算应不低于3000。

2.6.2 对照品溶液的制备

精密称取蛇床子素适量，精密称定，加乙醇制成每1 ml含45 μg的溶液，即得。

2.6.3 供试品溶液的制备

精密称取上述蛇床子不同炮制粉末约0.1 g（过三号筛），置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 ml，密塞，称定重量，放置2小时，超声处理（功率300 W，频率50 KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量。精密量取上清液5 ml，置10 ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.6.4 测定方法

使用外标法对蛇床子生品及炮制品中含的蛇床子素进行测定；进样量：对照品10 μL，供试品10 μL；校正因子=（对照品峰面积×稀释倍数）/对照品重量；蛇床子含量=（供试品峰面积×稀释倍数×10-3）/[平均校正因子×粉末重量×（1-含水量）]×100%

2.6.5 测定结果

测定结果见表1。

表1 蛇床子及炮制品蛇床子素的含量

3 讨 论

对蛇床子生品和蛇床子炮制品的理化性质和蛇床子素含量进行比较发现，蛇床子采用炒、炙的炮制方法通过加热使蛇床子生品的水分蒸发，因此炮制品的水分含量下降。此外，经炮制后，蛇床子的总灰分、酸不溶性灰分并没有显著变化，这可能和蛇床子药材本身特性和采收过程有关。在炮制后，浸出物的含量有变化，尤其是采用酒炙和酥炙，推测可能和蛇床子中的主要有效成分香豆素类和萜类化合物[10]能溶解于酒精或者是脂溶性物质中，或者是与酒精或脂溶性物质发生了酯化反应等，因此经酒炙或酥炙后，炮制品中的水溶性浸出物含量与生品的浸出物含量有差异。蛇床子的浸出物含量变化还需要做进一步的研究和分析。

对于蛇床子中有效成分的分析，考虑到目前蛇床子的活性成分研究多集中在香豆素类成分，尤其是蛇床子中含量最高的香豆素（约占60%）——蛇床子素[11]，它属于简单香豆素。在中华人民共和国药典（2015年版）也将蛇床子素作为蛇床子的指标成分。所以本项研究对于生蛇床子和炮制品的主要活性成分的研究主要以蛇床子素作为参照进行比较。蛇床子经炒制、酒炙和酥炙之后，其蛇床子素的含量均有不同程度的下降。尤其是酥炙之后，蛇床子素含量下降较大。

蛇床子的生品在中国药典[1]的性味与归经为：辛、苦，温；有小毒。归肾经。查阅古代文献，《药性论》[12]和《雷公炮制论性解》[13]描述蛇床子有小毒。现代研究发现，蛇床子生品对小鼠的半数致死量（LD50）为83.37 g/kg，其急性毒性高于关木通和香加皮[14]。也有研究发现蛇床子素对细胞体外生长抑制率达到70.13%，有较强的体外细胞毒活性[15]。蛇床子经炒制、酒炙和酥炙等炮制方式，一定程度上能将蛇床子素的含量降低，就是传统炮制描述的“改变其燥性”，这可能也是炮制之后降低生品蛇床子毒性的一个方面。对于蛇床子炮制后的药理药效等变化，需要做进一步深入的研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:315.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知:中药饮片卷[M].北京:中国医药科技出版社,2011:1215.

[3]魏·吴普.神农本草经[M].北京:科学技术文献出版社,1996:30-31.

[4]张山雷.本草正义[M].程东旗,点校.福建:福建科学技术出版社,2006:166-167.

[5]南北朝·雷敩.雷公炮制论[M].王兴法,辑校.上海:上海中医学院出版社,1986:26.

[6]常敏毅,辑注.日华子本草辑注[M].北京:中国医药科技出版社,2016:35.

[7]伍冠一,曾曼榈,吉玉芳,等.蛇床子本草考证[J].中国民族民间医药,2017,25(4):72-75.

[8]石继连,何 群,杨梓懿.不同炮制方法对蛇床子中蛇床子素含量的影响[J].中国药师,2007,10(1):44-45.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[S].北京,中国医药科技出版社,2015.

[10]陈 艳,张国刚,余仲平.蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展[J].沈阳药科大学学报,2006,23(4):256-260.

[11]沈丽霞,张丹参,张 力.蛇床子化学成分药理作用与应用的研究[J].医学综述,2003,9(9):565-567.

[12]唐·甄权.药性论[M]芜湖:皖南医学院科研科,1983:22.

[13]明·李中梓.雷公炮制药性解[M]金芷君,校注.北京:中国中医药出版社,1998:98.

[14]张 智,闪增郁,向丽华,等.15味有毒中药小鼠半数致死量的实验研究[J].中国中医基础医学杂志,2005,11(6):435-436.

[15]段绪红,张玉卓,何 培,等.蛇床子中的细胞毒活性香豆素[J].中国中药杂志,2015,40(18):3594-3597.