老年结直肠癌组织中miR-182表达及其与临床病理参数的关系

蒋华锋 沈毅 薛露

(1绍兴市人民医院肛肠外科，浙江 绍兴 312000；2吉林大学第一医院小儿血液科)

结直肠癌的发病率和死亡率较高，早期局限性结直肠癌的死亡率为7%～26%，发生转移的结直肠癌的死亡率则高达80%，因此早期诊断结直肠癌对降低结直肠癌的死亡率、改善预后具有重要价值〔1，2〕。微小RNA(miR)长18～22 nt，由内源基因编码的单链非编码RNA，研究发现多种miR在结直肠癌组织中表达失调，在结直肠癌的发生发展中发挥重要作用〔3，4〕。miR-182在多种组织和细胞中表达，在组织器官的生长、分化、发育等过程中发挥重要作用〔5〕，miR-182在恶性肿瘤的发生发展中也发挥重要作用〔6〕。本文对老年结直肠癌组织中miR-182水平进行研究，探讨其在结直肠癌中的价值。

1 材料与方法

1.1材料 组织标本：选择绍兴市人民医院2010年1月至2011年12月70岁以上老年结直肠癌患者120例结直肠癌组织及其相应的癌旁组织标本。120例患者均经病理证实为结直肠癌，均为初次诊断为结直肠癌者，术前未行放化疗等其他治疗，首次进行手术治疗，均签署知情同意书。120例患者年龄(75.86±3.72)岁；男78例，女42例；结肠癌67例，直肠癌53例；浸润深度T1者31例，T2者26例，T3者34例，T4者29例；TNM分期Ⅰ期者27例，Ⅱ期41例，Ⅲ期者38例，Ⅳ期者14例；有淋巴结转移者43例；有远处转移者38例。入选患者术后均进行正规随访，未正规随访或失访者剔除，随访时间从手术结束后开始至患者死亡或随访截止日期2016年12月31日。本研究经绍兴市人民医院伦理委员会审批。

1.2结直肠癌组织和癌旁组织中miR-182水平测定 取患者新鲜结直肠癌组织和癌旁组织匀浆后提取总RNA，根据实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定组织中miR-182水平，PCR反应条件为：95℃ 10 min；95℃ 20 s，62℃ 30 s，72℃ 30 s，共42个循环，以U6为内参照。结直肠癌组织和癌旁组织中miR-182水平以2-ΔΔCT表示。实时荧光定量PCR相关试剂及仪器购于美国Sigma公司。

1.3统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行t检验，结直肠癌组织中miR-182水平对结直肠癌的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线分析，结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌预后的关系采用Kaplan-Meier法。

2 结 果

2.1结直肠癌组织和癌旁组织中miR-182水平比较 结直肠癌组织中miR-182水平(1.81±0.21)明显高于癌旁组织(1.00±0.13，t=35.926，P=0.000)。

2.2结直肠癌组织中miR-182水平与临床病理特征的关系 结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移患者结直肠癌组织中miR-182水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P<0.05)；结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、CEA水平无关(P>0.05)。见表1。

表1 结直肠癌组织中miR-182水平与临床病例特点的关系

2.3结直肠癌组织中miR-182水平对结直肠癌的诊断价值 结直肠癌组织中miR-182水平诊断结直肠癌的ROC曲线下面积为0.812，95%CI为0.809～0.815，miR-182水平界值为1.623，灵敏度为86.34%，特异度为77.16%。

2.4结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌预后的关系 120例结直肠癌患者随访时间7.86～68.67个月，患者中位生存时间为28.71个月，结直肠癌组织中miR-182以1.623为界，miR-182低表达患者的生存率明显高于高表达者(P=0.009)。

3 讨 论

结直肠癌在不同地区的发病率不同，结直肠癌的发生和遗传因素、环境和生活方式关系密切，结直肠癌的易感因素包括家族史、年龄、炎症性肠病，食用大量红色肉类、酒精过剩、肥胖、高脂肪饮食及吸烟等不良生活方式增加结直肠癌的发病风险〔7，8〕。结直肠癌经历了从基因突变引起肠道黏膜上皮细胞腺瘤到向结直肠癌转变的过程，该过程为连续完整的过程，通过筛查、化学预防、手术等手段可以干扰该自然过程，预防结直肠癌的发生〔9，10〕。结直肠癌的预后和结直肠癌诊断时的分期、淋巴结转移及远处转移关系密切，早期结直肠癌患者的生存率相对较高，而发生转移患者的生存率明显降低。由于结直肠癌早期症状不明显，因此结直肠癌的早期筛查具有重要价值〔11，12〕。近年来新出现的内窥镜检查等大大提高了结直肠癌的早期诊断率，但仍有大部分患者不能在早期诊断，往往发现时已为结直肠癌晚期，严重影响患者的预后〔13，14〕。考虑内镜检查价格比较昂贵且为侵入性操作，因此开发非侵入性的比较准确的结直肠癌的诊断和预后评价标志物具有重要价值。

miR在恶性肿瘤细胞的增殖、代谢、转化、凋亡、侵袭和转移等多种病理过程中发挥重要作用，参与多种恶性肿瘤的发生发展过程〔15，16〕。miR具有高度保守性，可通过和靶mRNA结合，导致靶基因降解或抑制靶基因翻译，从而在基因转录后的调控中发挥作用〔17，18〕。大量研究发现miR在结直肠癌中表达异常，参与结直肠癌的发生发展过程〔19〕；不少miR成为结直肠癌诊断、预测化疗敏感性、预后的潜在生物标志物〔20，21〕。

miR-182在多种恶性肿瘤中表达异常，和恶性肿瘤的转移关系密切〔22〕。在不同恶性肿瘤中miR-182表达不同〔23〕，在黑素瘤、肝细胞癌、卵巢癌等恶性肿瘤中高表达，并可促进肿瘤细胞生长及转移〔24，25〕；miR-182在肺癌和胃癌中低表达，可抑制肿瘤细胞的生长〔26，27〕。本文结果表明miR-182可能参与结直肠癌的发生发展过程，可用于预测结直肠癌的病情严重程度，有望成为结直肠癌诊断和预后判断的潜在指标。