血清miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平对肝硬化失代偿期患者的诊断价值

宋贤超

（商丘市第四人民医院普外科，河南 商丘 476000）

乙型肝炎肝硬化失代偿期是慢性乙型肝炎、肝纤维化发展的最终结局之一[1]。研究显示，3%的乙型肝炎患者出现失代偿期肝硬化，疾病进一步恶化可发展为原发性肝癌，5年生存率只有30%左右[2]。所以早诊断早治疗，抑制病情进展对于改善肝硬化失代偿期患者的预后质量有重要价值。miR-143、miR-145、AFP以及AFP-L3是临床上常用的肝硬化诊断指标。本研究比较慢性乙肝肝硬化失代偿期患者与慢性乙肝患者miR-143、miR-145、AFP、AFP-L3的表达水平，为慢性乙肝肝硬化失代偿期患者的临床诊断提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月—2017年2月我院收治的慢性乙肝肝硬化失代偿期患者30例为研究组，选取同期收治的慢性乙肝患者30例为对照组，纳入标准：均符合《实用医学》中肝硬化失代偿期的诊断标准[3]，并根据临床表现等确诊；HBeAg阳性患者HBV DNA≥105拷贝/mL，HBeAg阴性患者HBV DNA≥104拷贝/mL；所有病例符合Child-Pugh分级B级和C级。排除标准：合并其他恶性肿瘤患者；合并自身免疫系统疾病患者；妊娠或哺乳期患者。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 检测miR-143、miR-145无菌操作下分别抽取两组患者静脉血3 mL，离心处理之后分离血清，应用微量离心管储存，常温条件下持续水浴3 min之后，取200 μL，根据miR RNA试剂盒说明书完成提取。根据miRNAcDNA第一链合成试剂盒（KR211）说明书要求，将提取的总RNA逆转录为cDNA。反转录体系的配制：解冻2×miRNA RT Reaction Bu ff er并混匀，miRNA RT Enzyme Mix放于冰中备用，在冰上预冷RNaseFree的反应管内加入 2×miRNA RT Reaction Bu ff er 10 μL、miRNA RT EnzymeMix 2 μL 至总体积 20 μL（最后加入 miRNA RT Enzyme Mix）。重复进行3次实验，反应完成之后分析PCR曲线，计算miR-143、miR-145值[4]。

1.2.2 AFP以及AFP-L3检测方法AFP-L3检测应用吸附离心管法，其中试剂为热景生物公司生产。AFP检测应用化学发光法，仪器为雅培公司生产，试剂为仪器配套试剂盒[5]。

1.3 观察指标

比较两组miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比较

研究组miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比较

3 讨论

乙型肝炎肝硬化失代偿期的并发症比较多，预后质量较差，病死率居高不下，给患者的生命健康以及生活质量带来严重不良影响[6]。失代偿期的患者长期使用NUC治疗能够有效改善患者的血清学状况以及病毒学状况，从而避免患者出现失代偿期并发症例如肝性脑病以及肝细胞癌等。但HBV闭合环状DNA（cccDNA）无法得到完全清除，因此乙肝肝硬化失代偿期的患者需要长期坚持进行抗病毒治疗。在临床治疗的过程当中，一方面需要规范化进行抗病毒治疗，另一方面还需要遵循个体化的原则，根据患者的经济条件、病情状况、不良反应、药物特点以及治疗依从性等，合理选择治疗方案以及治疗时机，同时全程对患者的抗病毒治疗加强管理，从而获得最为理想的治疗效果。这就需要准确诊断从而为抗病毒治疗提供指导。

微小RNA(miRNA)是一种单链RNA，长约为20个左右核糖核苷酸。少数miRNA同肿瘤疾病的出现存在密不可分的联系。传统上研究人员分析恶性肿瘤组织内部miRNA的时候，需要使用病理组织切片，随着技术的进步，研究人员发现血清中也存在miRNA，且肿瘤血清当中miRNA含量同健康人群存在明显差异，可作为特异性肿瘤标记物[7]。也有研究人员认为miR-143、miR-145表达在慢性乙肝患者当中明显下调，同时在乙肝肝硬化标本当中明显上调[8]。本研究结果显示，肝硬化失代偿期患者的miR-143、miR-145水平均显著高于慢性乙肝患者（P＜0.05），说明miR-143、miR-145水平同患者病情存在显著相关性，这是因为乙肝肝硬化失代偿期患者肝细胞HBV存在持续复制倾向，同时肝脏结构中肿瘤细胞数量明显增多，导致miR-143、miR-145水平上升[9-10]。

甲胎蛋白（AFP）是临床上常用的一种血清学标志物，研究人员普遍认为血清AFP水平同肝脏疾病存在着密不可分的联系，正常肝组织当中的肝细胞AFP水平比较低甚至完全检测不出，但是在肝硬化患者组织以及肝炎患者组织当中，AFP含量水平上升异常明显，同时在肝癌组织当中上升的幅度最高。但AFP在早期肝硬化失代偿期患者诊断中灵敏度较低，只有50%左右的患者呈现AFP阳性。通常情况下，AFP作为肝硬化失代偿期患者早期诊断的血清学标志之一，敏感度为40%左右，特异度为80%左右[11]，所以单纯借助于AFP用来监测预警肝硬化失代偿期存在着一定程度的限制。上世纪七十年代，研究人员借助于凝胶电泳分离得到AFP异质体，后续研究发现AFP-L3超过10%同肝硬化失代偿期患者存在显著相关性，可作为早期诊断的重要标志物，因此AFP-L3检测对于肝硬化失代偿期患者的早期诊断有重要的价值。本研究结果显示，研究组AFP和AFP-L3水平均显著高于对照组（P＜0.05）。说明慢性乙肝肝硬化失代偿期患者的AFP、AFP-L3水平高于慢性乙肝患者，可作为检测疾病进展的标志物。

综上所述，肝硬化失代偿期患者的血清miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平显著上升，积极采取治疗措施，有利于改善患者预后质量。