维生素D结合蛋白基因遗传变异与海南省老龄慢性鼻窦炎的关联性

陈赛明 周小柳 李志路 张云霞 周代锋

(海南医学院 1第一附属医院，海南 海口 571102；2科学实验中心)

慢性鼻窦炎(CRS)分为慢性鼻窦炎鼻息肉和单纯性慢性鼻窦炎，而后者的发病率约占80%〔1～4〕。欧洲国家的CRS患者中，老年人占4.5%～12.0%，对生活质量有显著影响〔5〕；而17%的中国老龄人患有CRS，严重影响着中国老龄人的生活质量〔6,7〕。近些年的研究表明，脂溶性维生素D与CRS存在显著的关联，它在体内首先与维生素D结合蛋白(VDBP)结合，并通过维生素D受体、细胞色素P450家族等成分的作用进行信号传递，实现对机体免疫系统的调节〔8～10〕。VDBP的编码基因为GC，该基因存在超过2 000个单核苷酸多态性(SNP)位点，这些位点的多态性与CRS的关联性研究数据颇少，而与海南省老龄人群CRS的关联性研究更是尚未见报道。本研究通过分析海南省老年CRS患者GC多态性的三个多态性位点rs7041、rs222016、rs4588，探讨其与CRS的关联性。

1 对象与方法

1.1对象 选择海南医学院第一附属医院2017年3～12月收治的37例老龄单纯性CRS患者作为病例组，选择同期在该院体格检查科检查的99例健康老年人作为对照组。病例组男23例，女14例，年龄60～75岁。对照组中男54例，女45例，年龄60～76岁。两组性别及年龄无统计学差异。样本纳入及排除标准： CRS诊断严格根据2012年欧洲鼻-鼻窦炎临床诊疗指南(EPOS-2012)和CPOS2088的建议，CRS诊断标准包括症状、体征和辅助影像学检查三个方面：(1)持续超过12 w的四种症状：主要症状：鼻塞，黏脓性鼻塞；次要症状：嗅觉减退，头面部闷胀沉重感；四种症状中必须有两种以上，其中主要症状必有其一。(2)体征：使用前鼻镜或鼻内镜检查可见中鼻道或嗅裂有脓性分泌物。(3)影像学检查：包括鼻窦X线检查、鼻窦CT检查、鼻窦MRI检查，其中鼻窦CT检查是诊断CRS最直接和准确的方法。所有受试者排除癌症史、心血管疾病、自身免疫性疾病或已知感染性疾病史。

1.2基因分型方法 采集所有受试者EDTAK2抗凝血2 ml，取100 μl提取高质量基因组DNA。委托上海捷瑞生物工程有限公司对样本进行基因多态性位点的分型。具体过程：合成引物P1(AAAGAGGAGGTGAGTTTATGGAA)、P2(GACTGGCAGAGCG-ACTAA)，扩增包含rs7041(扩增片段长度：122 bp)的PCR片段；以引物P3(CTCTGTTGGTGATTTGATCTTGAA)、P4(GGCTCTGTCCTCTTACTCTTG)扩增包含rs222016(扩增片段长度：103 bp)的PCR片段；以引物P5(GACTGGCAGAGCGACTAA)、P6(AAAGAGGAGGTGAGTTTATGGAA)扩增包含rs4588(扩增片段长度：121 bp)的PCR片段。多重PCR的扩增条件：95℃(3 min)；94℃、15 s,55℃、15 s，72℃、30 s共35个循环；72℃延伸3 min。纯化产物以引物P7(CTAAAAGCAAAATTGCCTGA)、P8(ctgactgactAGGATTAACCTCCATGCTGA)及P9(ctgactgactgactgactgaTAACCAGCTTTGCCAGTTCC) 分别进行延伸反应。利用美国ABI公司的3730XL基因测序仪进行序列测定及数据读取。

1.3统计学分析 登陆网站https://www.snpstats.net/start.htm?q=snpstats/start.htm，利用SNPStats软件进行基因型云分析，基因型的组间差异用共显性模型进行验证。等位基因频率及组间差异采用SPSS25.0软件行χ2检验。

2 结 果

三个多态性位点均可以检测出三种基因型，rs7041的三种基因型TT、GT、GG在病例组及对照组中的发生率差异无统计学差异(P>0.05)；该位点的等位基因T和G亦无组间统计学差异(P>0.05)。rs222016的三种基因型AA、AG、GG在病例组和对照组中的基因型及等位基因分布频率比较无统计学差异(P>0.05)。rs4588的三种基因型CC、AC、AA在病例组和对照组中的基因型及等位基因分布频率比较也无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 GC基因多态性与海南省老龄CRS的关联性〔n(%)〕

3 讨 论

VDBP是维生素D进入细胞后第一个与之结合的蛋白，在维生素D发挥作用的过程中具有极其重要的作用。该蛋白除了运输维生素D及其代谢产物外，还具有调节肌动蛋白、调节免疫和炎症反应、结合脂肪酸、调节骨质发育等功能〔11～13〕。 VDBP的编码基因GC在人群中存在广泛多态性，而这些多态性位点与某些疾病的关联性已经被广泛研究并报道〔14～17〕。

rs7041多态性(T→A)突变可导致VDBP第432位的氨基酸由天冬氨酸突变位为氨酸，rs4588(C→A)突变可导致VDBP第436位氨基酸由苏氨酸转变为赖氨酸。Navasnazario等〔18〕发现rs7041与儿童哮喘密切相关，在基因型TT、TA、AA的儿童中，哮喘的发病频率依次递减，而rs4588与同批样本无显著关联性。

本研究首次报道了海南省老龄CRS人群中GC基因多态性，三个多态性位点rs222016、rs4588、rs7041在海南省老龄CRS人群中均具有野生型、杂合型及突变型三种基因型。三种基因型分布频率均与海南省老龄CRS无显著关联性；此外，等位基因的分布频率亦无组间差异。这说明VDBP多态性与海南省CRS的关联性较弱。当然，也不排除本次收集的样本量较小的原因。