女性躯体形式障碍患者外周血中miR-16、miR-182表达与临床特征关系

宋 晋 马子龙 陈绘景 王 强

1.华中科技大学同济医学院附属精神卫生中心(430012)；2.武汉科技大学医学院

躯体形式障碍(SFD)是一种临床常见的神经症，以失眠、头痛、眩晕为主要临床表现，常伴有抑郁、焦虑等症状，发病率较高，严重影响患者社会功能，给患者带来沉重的心理和经济负担[1]。微小RNA(miRNA)可参与精神分裂症[2]、癫痫[3]、抑郁[4]等神经异常疾病发展过程。微小RNA-16(miR-16)是miRNA中一员，在抑郁疾病发展中发挥重要作用[5]。Li等[6]研究发现，微小RNA-182(miR-182)在抑郁进程中表达升高，参与抑郁的发生与发展过程。但miR-16、miR-182在女性SFD患者外周血浆中表达及与病证关系鲜见报道。本研究通过观察女性SFD患者外周血血浆中miR-16、miR-182表达水平，分析二者与SFD临床特征关系，为SFD临床诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般临床资料

选取2017年3月-2018年12月于本院就诊的SFD女性患者115例为病例组，同期女性健康体检者为对照组。诊断标准：由两名专业精神科医生依据中国精神障碍分类与诊断(第三版)关于SFD的评判标准[7]确定SFD。纳入标准：①符合SFD评判标准；②年龄19～65岁；③病理诊治资料完全。排除标准：①患有严重躯体疾病史；②患有严重抑郁、焦虑症等严重精神病史；③中途退出研究。本研究经本院伦理委员会审批，研究对象签署知情同意书。

1.2 评估标准

症状自评量表(SCL-90)[8]包含躯体化、强迫状态、人际关系、抑郁、焦虑、恐怖、敌对、精神病性、偏执及其他共10个因子，分为90个项目，每项均采用1～5级评分，以个体单个因子评分>2分时表示存在心理问题。SCL-90均分=各项评分之和/项目数。

1.3 检测方法

1.3.1主要试剂TRIzol RNA分离试剂购买于上海赛默飞世尔科技，PrimeScript RT reagent Kit with gDNA eraser试剂盒、SYBR PrimeScript RT-PCR试剂盒均购买于大连TAKARA生物科技有限公司，miR-16、miR-182及内参U6均由上海吉玛公司设计合成。

1.3.2样本采集及预处理采取所有对象空腹静脉血置肝素抗凝剂离心管离心，取血浆置-20℃冰箱保存，2h内检测。血浆样本置冰盒融化，依据TRIzol RNA分离试剂说明书加1ml TRIzol行裂解处理，抽提总RNA。利用Nanodrop紫外分光光度计对总RNA质量和浓度检测，以A260/A280在1.8～2.0为合格样本行后续实验。按照PrimeScript RT reagent Kit with gDNA eraser试剂盒说明书合成cDNA后，依照SYBR PrimeScript RT-PCR试剂盒说明书进行扩增、检测。miR-16、miR-182均以U6为内参，其引物序列如表1所示。以2-△△CT法计算miR-16及miR-182表达水平。

表1 miR-16、miR-182及内参U6的引物序列

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组对象基本情况

病例组115例，年龄(42.9±7.6)岁(19～65岁)，受教育(12.8±2.0)年(9～16年)；对照组118例，年龄(43.2±7.9)岁(20～63岁)，受教育(11.9±2.0)年(8～16年)。两组比较无差异(P<0.05)。

2.2 miR-16、miR-182表达及SFD临床特征

病例组外周血浆miR-16(1.57±0.38)、miR-182(1.70±0.41)表达水平均高于对照组(1.02±0.30、1.09±0.33)(t=12.279、12.526，均P=0.000)。以病例组SFD患者miR-16和 miR-182表达量平均值为界，分为低表达组和高表达组。结果显示，SFD患者miR-16、miR-182相对表达水平均与抑郁、焦虑因子有关(P<0.05)，与年龄及躯体化、强迫状态、人际关系等8项因子均无关(P>0.05)。见表2。

表2 SFD组患者血浆miR-6、miR-182表达与临床特征[例(%)]

2.3 两组SCL-90均分及与miR-16、miR-182表达关系

SCL-90均分病例组(2.84±0.65分)高于对照组(1.72±0.39分)(t=15.995，P=0.000)。Pearson 相关性分析，miR-16、miR-182相对表达水平与SCL-90均分均呈正相关(r=0.356,P<0.05；r=0.466,P<0.05)。见图1。

图1 miR-16、miR-182表达水平与SCL-90均分相关性

2.4 发生SFD 的多因素分析

以SFD是否发生为因变量，以miR-16、miR-182表达水平、SCL-90均分为自变量，进行多因素logistic回归分析显示，miR-16、miR-182、SCL-90均分均为女性发生SFD的危险影响因素(P<0.05)。见表3。

表3 女性发生SFD的多因素影响分析

3 讨论

SFD是临床常见的以各种躯体不适为主要临床症状的神经症，抑郁症、焦虑症等是SFD患者常伴的临床症状，且女性更易情绪化发病率较高[9]。寻找影响SFD发病因素及早期临床诊断生物学指标，及时采取干预，对提高患者生命质量和改善其社会功能具有重要意义。

miRNA可调控目标靶基因的表达，影响一系列正常生理、病理过程[10]。袁梅菊等[11]研究发现miR-124在抑郁症患者外周血中表达上调，其表达与抑郁的诊治密切相关，可作为抑郁诊断及预后评估指标。miR-17-92在抑郁和焦虑中呈低表达，与抑郁、焦虑症发生与发展关系密切[12]；miR-499、miR-708、miR-1908在抑郁发作期间表达异常[13]。以上研究表明miRNA表达失调与抑郁、焦虑等神经症关系密切。Bai等[14]发现母爱剥夺及慢性不可预测的压力诱导的抑郁行为可引起miR-16表达上调。Manami等[15]研究发现，长期学业压力造成的焦虑可使miR-16表达水平异常升高。SFD是神经症状的一种，临床特征与抑郁、焦虑等神经症状存在重叠，并相互作用[16]。本研究病例组外周血血浆miR-16表达水平高于对照组，提示miR-16可能在SFD发病进展中发挥作用。miR-182是一种神经系统特异性miRNA，可在抑郁症中发挥功效[17]。miR-182过表达可加重慢性不可预测的轻度应激诱导的抑郁症[6]。本研究miR-182在病例组外周血血浆中的表达水平高于对照组，提示SFD发病与miR-182异常表达可能有关。

SCL-90是临床用评估SFD各种症状及心理问题的测量工具，SCL-90均分是受试者最近一周内的心理状况。本研究病例组SCL-90均分高于对照组，血浆miR-16、miR-182表达水平与SCL-90的抑郁、焦虑因子有关，提示SFD患者血浆miR-16、miR-182过表达，可能调控了抑郁、焦虑症的发病进展，从而参与SFD疾病的发展，提示该指标有望作为SFD发病诊治的生物学指标。miR-16、miR-182相对表达水平与SCL-90均分呈正相关，进一步表明miR-16、miR-182可通过影响SFD疾病的临床特征，进而影响SFD的SCL-90均分。进一步分析发现，miR-16、miR-182及SCL-90均分均是影响女性发生SFD的危险因素，提示miR-16、miR-182过表达及SCL-90过高可能会增加女性患SFD的风险，对miR-16、miR-182表达水平进行早期监控，并结合SCL-90均分，对早期诊断SFD有一定预测价值。

综上所述，在女性SFD患者外周血浆中miR-16、miR-182表达均升高，二者有望作为SFD病情诊断指标。由于本研究样本量较少，可能代表性不强；SCL-90均分结果带有主观因素，可能存在一定偏差；miR-16、miR-182在女性SFD中的具体机制尚未清晰，后续将扩大样本量对miR-16、miR-182在女性SFD中的相关机制进行深入研究。