康普瑞汀A4纳米制剂的处方前研究

史国慧 曹青日（通讯作者）

（苏州大学药学院 江苏 苏州 215123）

康普瑞汀A4（CA4）是一种顺式二苯乙烯类天然化合物，它能够抑制肿瘤血管的生成，是一种新型的抗肿瘤药物。然而CA4水溶性极差，导致其在体内疗效较低，限制了临床应用。为此，研究者们对CA4进行了各种修饰及前药研究，其中康普瑞汀磷酸二钠（CA4P）是极具代表性的一种，国外该药已进入Ⅲ期临床研究阶段[1]。但是，由于纳米材料的代谢产物存在一定的细胞毒性，导致无法确认其安全性。而聚乳酸～羟基乙酸共聚物（PlGA）恰好可以弥补这一缺点，它水解生成的乳酸和羟基乙酸这两种内源性代谢产物，很容易被人体代谢，所以它几乎没有系统毒性。并且它具有可调的降解速率，被广泛应用于药物缓控释体系中[2]。因此，笔者考虑以PlCA为载体材料，制备CA4缓释纳米制剂。

本研究以CA4为模型药物，在药物的分析方法建立、溶解度、辅料相容性等方面进行了处方前研究，为后续CA4纳米制剂的开发奠定基础。通过这些试验来估算是否需要更稳定剂型，一旦在此过程中发现主药在溶解度和相容性上存在问题，则可考虑改进其剂型设计，保证后期处方研究顺利进行。

1.仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260高效液相色谱仪、FA2004电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)，SHA-B恒温振荡器(常州市国旺仪器制造有限公司)、DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、H-1650台式高速离心机(湘仪离心机仪器有限公司)、YG120药物光照试验箱（上海恒谊制药设备有限公司）。

1.2 试药

康普瑞汀A4(≥98%，南京春秋生物工程有限公司)；PlGA(75∶25，12000Da，济南岱罡生物工程有限公司)；大豆卵磷脂S100（94%，LiPoid）；甲醇（色谱纯，Sigma～Aldrich)；水为超纯水(产自实验室纯水仪)；其它试剂为分析纯[3]。

2.实验方法与结果

2.1 分析方法建立

2.1.1 色谱条件色 谱柱：COSMOSIL5C18-MS-Ⅱ(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇-水(65：35)，检测波长：295nm，流速：1.0mL·min～1，柱温：40oC，进样量：20μL。该方法下，CA4色谱图见图1，杂质峰与主峰分离度良好（＞1.5），不会干扰测定。

图1 CA4的HPlC色谱图

2.1.2 线性关系

见图2。结果表明，CA4溶液在0.5～250μg·mL-1范围内呈良好线性关系。

图2 CA4溶液标准曲线

2.1.3 精密度

结果表明，该方法的精密度良好（RSD＜2%）。见表1、2。

表1 日内精密度

表2 日间精密度

2.1.4 稳定性

结果表明，CA4溶液室温下24小时内是稳定的（RSD＜2%）。见表3。

表3 溶液稳定性

2.1.5 定量限和检测限

取“2.1.2”项下的CA4母液，用甲醇逐步稀释至主峰的响应值约为噪音水平的10倍，见图3，得CA4定量限为0.1056μg·mL-1；响应值约为噪音水平的3倍，见图4，得CA4的检测限为0.0264μg·mL-1。

图3 CA4定量限

图4 CA4检测限

2.2 溶解度

2.2.1 CA4在不同Ph缓冲液中的溶解度

CA4几乎不溶于各种Ph值的缓冲溶液，且溶解度不随Ph值而改变。见表4。

表4 CA4在不同Ph值缓冲液中的溶解度

2.2.2 CA4在不同有机溶剂中的溶解度

CA4可溶于甲醇、乙醇，易溶于丙酮、三氯甲烷及二甲基亚砜。见表5。

表5 CA4在不同有机溶剂中的溶解度

2.3 辅料相容性

本研究选择PlGA、大豆卵磷脂S100作为辅料，因此，分别考察CA4与大豆卵磷脂S100、PlGA在高高温（40℃）、高湿（RH92.5%）、强光（4500lx）条件下的相容性。见表6。

表6 药物与辅料相互作用考察表

3.讨论

作为一种新型的血管生成抑制剂，CA4具有肿瘤增殖抑制和血管破环双重作用，有很高的抗癌活性[4]。PlGA是一种理想的控缓释材料，利用PlGA包封原料药制成纳米制剂，可提高药物疗效并减少毒副作用[5]。

本研究利用HPlC建立CA4的分析方法，结果表明，该方法专属性强、精密度高、稳定性良好，可用于CA4纳米制剂中药物含量的测定[6～7]。在此分析方法的基础上，测定了CA4在不同介质中的溶解度，结果显示，药物在各Ph缓冲液中几乎不溶，且不受Ph的影响。另外，药物可溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，这为后续处方工艺中溶剂的选择提供了依据。原辅料相容性试验结果表明，CA4与PlGA的相容性良好（RSD＜2%），但大豆卵磷脂S100在强光条件下会使CA4含量有轻微减少（2%＜RSD＜10%），但无明显影响，所选辅料与主药的配伍稳定性较好，均可用于后续处方工艺研究。本实验为CA4纳米制剂的制备提供了处方依据。