人胰腺癌细胞系PANC-1细胞培养方法的改良

孙如玉 何志成 江静 蒋燕 胡秀娟 王振振 吴青杰 李群超 胡贤伟 姜楠 刘超

（1安徽医科大学基础医学院 安徽 合肥 230032）

（2安徽医科大学第二临床医学院 安徽 合肥 230601）

人胰腺癌细胞系中，源自胰腺癌导管细胞的PANC-1细胞被广泛应用于科学研究中。本课题组以前PANC-1细胞培养采用的是传统细胞培养方法[1]，培养细胞所用的培养液为90%DMEM/HIGH Glucose (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 加上10% 胎牛血清（BI-FBS）和1%双抗（青霉素和链霉素混合液）[2]；根据实验中具体操作步骤，对PANC-1细胞的培养方法进行改良。改良后的方法，简化了步骤，减少污染机率。

1.资料与方法

1.1 细胞株

人胰腺癌细胞系PANC-1细胞；购自中国科学院细胞库（上海）。

1.2 主要试剂

DMEM/HIGH Glucose(1X）培养基（Hyclone，美国）。

1.3 主要仪器

5%CO2培养箱（Thermo美国），医用净化工作台（苏州）。

2.改良的PANC-1细胞培养方法

2.1 PANC-1细胞的复苏

1）准备器械和试剂，常规消毒和复苏细胞；在标记好的培养皿加入适量的培养液；

2）将细胞悬液吸出直接加入培养皿，充分震荡混匀；

3）镜下观察细胞密度及分布后，置于37℃5%CO2培养箱内孵育，24小时后换液。

2.2 PANC-1细胞的传代

1）准备器械和试剂，常规消毒；

2）镜下观察细胞生长状态和汇合度，一般于汇合度80%左右进行传代；

3）常规洗涤、胰酶消化细胞；

4）利用消化的间隙，在新培养皿中加入培养液，作好标记；

5）镜下观察细胞脱落和离散；

6）将原培养皿内细胞悬液，平均分配于新培养皿中；震荡混匀后放37℃，5%CO2培养箱孵育。

3.结果

从2016年8月-2017年9月，本课题组共复苏PANC-1细胞11次，传代19次，见图。

图 传统方法和改良方法对比图

细胞传统复苏到传代和改良复苏到传代平均用时差异显著（P＜0.05）；传统细胞传代周期和改良细胞传代周期间差异不显著。

4.讨论

本课题组人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的培养传统方法主要参考贾连群，雷萍主编的现代基础医学理论与技术进展中细胞培养基本技术[1]和赛默飞世尔科技（ThermoFisher Scientific）贴壁细胞培养技术[3]。

细胞冻存液由90%胎牛血清（BI-FBS）和10%二甲亚砜(dimethyl sulPhoxide，DMSO)配制[4]。DMSO作为常用的低温冷冻保护剂，部分学者认为对大多数细胞无毒性[5]。改良细胞复苏方法中，是把处于冻存液中的细胞悬浮液直接加入到培养皿中，没有离心去除DMSO。

改良方法优点：（1）细胞传代过程中不使用离心机，减少细胞损失和细胞污染的机会；（2）简化细胞传代步骤，特别适用于新进人员；（3）可以比较快速增殖细胞。

改良方法缺点：细胞传代过程中，细胞悬液的分配过程中液量可能会有偏差。解决方法，正常加胰酶消化，加等量的培养液中和并吹打均匀，细胞悬液分配前，要注意一下具体的液量，尽量分配。

综上所述，基于传统细胞培养基础上的改良方法，可以用于人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的培养，也为其它细胞培养方法的改良提供参考。