免疫组化标记物检测技术在子宫内膜癌早期诊断中的应用价值

何江耀，王健文，朱新宇

（广东省东莞东华医院 病理科，广东 东莞 523110）

子宫内膜癌是妇科最为常见的三大恶性肿瘤 之一，随着外源性雌激素接触机会的增加以及生活质量的改善、平均寿命的延长，女性罹患该病的风险较以往有所增加，且存在年轻化的趋势。我国在子宫内膜癌的发病率方面缺乏大样本的流行病学研究，但通过对住院患者中宫颈癌与该病的比例进行估算发现，该病的发病率已明显上升，且在经济发达地区尤为显著[1-2]，需引起广大学者的高度重视。子宫内膜癌的早期诊断和治疗可使患者获得良好的预后，大多数研究已证实超声和宫腔镜对该病的早期诊断价值[3-4]，但对于免疫组化标记物检测技术的应用价值仍存在一定争议，本研究对此展开探讨，以期为提高子宫内膜癌早期诊断的准确性提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2016年1月- 2018年1月本院收治的80 例早期子宫内膜癌患者的组织标本纳入观察组。年龄35～75岁，平均（51.53±9.42）岁；初潮年龄12～17岁，平均（14.23±2.05）岁；有生育史69例，无生育史11例；绝经51例，未绝经29 例。纳入标准：①术后病理确诊为子宫内膜癌，依据国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO）2014年修订的外阴癌、宫颈癌和子宫内膜癌病理分期标准[5]诊断为I期者；②初次就诊，在未行放化疗和激素疗法时进行手术并获取子宫内膜组织标本；③未合并其他恶性肿瘤、肝肾功能不全、心脑血管疾病、自身免疫性疾病以及除剖宫产以外的腹部手术史；④对本次研究知情同意并自愿签署知情同意书。排除标准：①术前通过实验室和影像学检查为子宫内膜癌晚期患者；②合并有急性感染性疾病；③严重的精神疾病者；④病历资料不完整者。再将同期经病理证实为单纯子宫内膜增生者的组织标本50例纳入对照组。年龄30～79岁，平均（50.89±8.57）岁；初潮年龄12～18岁，平均（14.86±2.61）岁；有生育史44例，无生育史6例；绝经35例，未绝经15例。观察组和对照组年龄、初潮年龄、生育史和绝经情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

两组子宫标本组织均采用免疫组化检测，应用EnVision两步法，首先经10%福尔马林固定、乙醇脱水、石蜡包埋及切片等处理，确认后行脱蜡处理，再采用3%双氧水进行室温下孵育10 min，蒸馏水冲洗，高压修复抗原，再用磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）冲洗，滴加一抗，放于37℃冰箱1 h后以PBS冲洗并滴加二抗，37℃下孵育30 min，PBS冲洗，采用二氨基联苯胺显色5 min后反复水洗，复染后再次行乙醇脱水，中性树胶封片等处理，将处理好的标本在显微镜下进行观察。

1.3 结果判断标准

以PBS代替一抗作为阴性对照，细胞相应部位出现棕黄色颗粒深染为阳性。雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progestrone receptor,PR）、p53和ki67阳性定位于细胞核；癌胚抗原（carcino-embryonic antigen,CEA）阳性定位于细胞质；p16阳性定位于细胞核/细胞质。

1.4 观察指标

比较观察组和对照组之间ER、PR、CEA、p16、p53和ki67表达情况的差异；再比较观察组不同分期、分型和组织分化程度患者上述标记物表达情况的差异。

1.5 统计学方法

采用EXCEL和SPSS 19.0软件对本研究数据进行统计和分析，计量资料以均数±标准差（）表示，计量资料组间比较采用t检验；计数资料以百分比（%）表示，计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组免疫组化标记物表达情况比较

观察组ER、PR、p16的阳性表达率显著低于对照组（P＜0.05），CEA、p53和ki67的阳性表达率显著高于对照组（P＜0.05）。见表1。

2.2 观察组临床病理特征与标记物表达的关系

不同临床分期之间，ER、PR、p16的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），CEA、p53和ki67的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）；不同分型之间，CEA和p16的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），ER、PR、p53和ki67的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）；不同组织分化程度之间，p16和p53的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），ER、PR、CEA和ki67的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 2。

表1 两组免疫组化标记物表达情况比较 例（%）

表2 观察组临床病理特征与标记物表达的关系 例

3 讨论

在子宫内膜癌的发生和发展中，ER和PR起着尤为重要的作用，国内外学者就此开展了多项研究[6-8]，证实了该病与人体激素代谢紊乱尤其是雌激素增多密切相关。正常情况下，雌激素和孕激素通过与ER和PR结合来发挥生理作用，并参与子宫内膜的增殖，当细胞病变时，这些受体的数量会显著减少，功能明显减弱[9]。本研究中，观察组ER和PR的阳性表达率显著低于对照组，说明子宫内膜癌I期患者存在ER和PR减少甚至消失的情况。进一步对临床病理特征分析显示，肌层浸润＜50%（IA期）和肌层浸润≥50%（IB期）之间ER和PR阳性表达率差异无统计学意义，说明ER和PR的表达可能不受肌层浸润程度的影响。子宫内膜癌分为I型（雌激素依赖型）和II型（非雌激素依赖型），本研究中，I型患者ER和PR阳性表达率显著低于II型患者，说明ER和PR的检测有助于该病的临床分型判断。另外，不同组织分化程度间ER和PR的阳性表达率差异显著，说明ER和PR的检测有助于评估肿瘤分化程度。这些结果说明，随着疾病的进展，ER和PR表达逐渐缺失，其缺失程度与细胞恶性程度上升、浸润性增加以及转化为非激素依赖型密切相关。

p16是一种细胞周期依赖激酶抑制蛋白，与ER和PR类似，其在肿瘤细胞中处于表达缺失的状态[10]。p53是人体抑癌基因，可抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，但是p53的点突变可能使该基因失去原本的作用，甚至诱导正常的细胞发生恶变[11]，本研究中，观察组p16的阳性表达率显著低于对照组，p53的阳性表达率显著高于对照组，说明子宫内膜癌I期患者存在p16表达减少和p53表达增多的情况。临床病理特征分析显示，p16的表达不受肌层浸润程度、分型和肿瘤组织分化程度的影响，但p53的表达受肌层浸润程度和分型的影响，但不受肿瘤组织分化程度的影响。

CEA是一项临床广泛应用的肿瘤标志物，在多种肿瘤组织中均可检出。ki67则是一种与细胞有丝分裂过程密切相关的增殖细胞抗原，其表达水平的高低可反映细胞增殖的活跃状态[12]。本研究中，CEA和 ki67的阳性表达率显著高于对照组，说明子宫内膜癌I期患者存在CEA和ki67表达增多的情况。临床病理特征分析显示，CEA的表达不受子宫内膜癌分型的影响，但与肌层浸润程度和肿瘤组织分化程度有关，而ki67的表达则与肌层浸润程度、分型和肿瘤组织分化程度均相关。

综上所述，通过免疫组化标记物检测技术评估子宫内膜组织ER、PR、CEA、p16、p53和ki67的表达情况，有助于提高该病早期诊断的准确性，具有一定应用价值。