结肠癌组织中CD151和整合素α3的表达及其临床价值

吴春平 刘艳彩 刘学刚 赵岭岭 李景光

结肠癌是1种常见的消化道恶性肿瘤疾病，易发生局部和远处转移，从而影响患者预后[1]。CD151是4次跨膜蛋白超家族中的重要成员，同时也是4次跨膜蛋白超家族中的唯一癌基因，CD151高表达可与多种整合素相互结合，然与整合素α3关系最为密切，两者结合则可形成复合物，其与细胞粘附、细胞迁移转移等存在紧密联系[2]。本研究旨在探讨CD151、整合素α3应用于结肠癌中的价值，为改善结肠癌患者预后提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2016年7月至2017年8月收治的60例结肠炎患者和经手术组织病理检查诊断为结肠癌的120例患者作为本次研究对象。结肠炎患者中，男性38例、女性 22例；年龄33～76岁，平均为(49.5±3.7)岁。结肠癌患者中，男性78例、女性42例；年龄35～78岁，平均为(49.7±3.5)岁；溃疡型40例、肿块型50例、浸润型30例；高分化腺癌30例、中分化腺癌60例、低分化腺癌26例、黏液腺癌4例；肿块直径1.6～5.9 cm，平均为(3.6±0.7) cm；淋巴结转移者90例、无淋巴结转移者30例；远处转移者48例、无远处转移者72例。

1.2 方法

应用免疫组化SP法检测受检对象组织中CD151和整合素α3表达情况。试剂：鼠抗人CD151单克隆抗体、整合素α3单克隆抗体，由美国Santa Cruz公司提供；免疫组化SP法所使用的相关试剂则由福州迈新生物技术公司提供，严格按照说明书执行操作，其中阳性组织切片作为阳性对照，而阴性对照采用PBS代替鼠抗人CD151单克隆抗体、整合素 α3单克隆抗体。严格按照说明执行各项操作步骤，每张切片均分别加入50 μl过氧化酶阻断剂，然后放置于室温下孵育，时间为10 min，再使用PBS液(福州迈新生物技术公司提供)冲洗3 次，每次冲洗3 min。然后于每张切片上加入50 μl非免疫性动物血清，放置于室温下孵育，时间为5 min，此步骤不需进行冲洗，然后将多余液体甩除。向各切片上分别加入50 μl一抗，并将其放置于40 ℃冰箱中进行孵育、过夜，于第2天采用PBS液冲洗，每次冲洗3 min，共冲洗3次。分别向各切片加入生物素标记的二抗50 μl，然后于室温下孵育，时间为10 min，再采用PBS液冲洗，每次冲洗3 min，共冲洗3次。再将50 μl链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶溶液加入到各切片中，放置于室温下孵育，时间为10 min，采用PBS液冲洗，每次冲洗3 min，共冲洗3次。向各切片中分别加入100 μl新鲜配制的DAB溶液，然后于显微镜下观察其显色情况来决定是否需停止显色，采用自来水进行冲洗，并采用苏木精复染，应用乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.3 观察指标

因CD151、整合素α3蛋白阳性定位于细胞膜或细胞质，且呈棕褐色颗粒，所以采用半定量积分法进行判断。显色度：按照细胞着色深浅进行计分，其中0分：基本无色；1分：浅黄色；2分：浅棕色；3分：深棕色；根据阳性细胞比例计分：其中0分：无阳性细胞；1分：<10%；2分：10%～50%；3分：50%～75%；4分：>75%。显色强度与阳性细胞比例相乘，如得分≥3分则判断为阳性；反之则为阴性[3]。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 19.0软件处理，计数资料采用率表示，采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关性分析，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠炎与结肠癌组织中CD151与整合素α3表达情况比较

结肠炎患者组织中无CD151和整合素α3表达，而结肠癌组织中CD151和整合素α3阳性表达率分别为88.33%(106/120)、85.83%(103/120)，差异有统计学意义(χ2=128.919、120.389，P=0.00、0.00)。

2.2 结肠癌组织中CD151和整合素α3表达状况与临床病理特征的关系

不同年龄、性别、组织学分型、肿瘤大小及分化程度结肠癌组织CD151和整合素α3表达阳性率比较，P>0.05；而存在淋巴结转移的结肠癌组织CD151阳性表达率明显高于无淋巴结转移者，P<0.05；远处转移结肠癌组织CD151阳性表达率明显高于无远处转移者，P<0.05。存在淋巴结转移的结肠癌组织整合素α3阳性表达率明显高于无淋巴结转移者，P<0.05；远处转移结肠癌组织整合素α3阳性表达率明显高于无远处转移者，P<0.05。见表1。

2.3 CD151与整合素α3的相关性分析

结肠炎患者中，CD151和整合素α3均为阴性表达。结肠癌组织中，CD151和整合素α3阳性表达率分别为88.33%、85.83%；经Spearman等级相关性分析，CD151和整合素α3阳性表达在结肠癌患者中呈正相关性(γ=0.5123，P=0.000)。

3 讨论

结肠癌具有较高的发病率和死亡率，尽管现代医学技术得到快速发展，结肠癌筛查和诊治也得到明显进步，但结肠癌患者预后仍不理想。结肠癌是1种常见的恶性肿瘤疾病，影响患者预后的因素主要是肿瘤细胞侵袭和转移，而肿瘤细胞侵袭和转移则是1个多因素参与的复杂过程。所以深入研究结肠癌发生、发展成为当前临床医师和各学者研究重点。

表1 结肠癌患者不同情况下CD151和整合素α3表达状况比较(例，%)

CD151基因是人们最近发现的一种癌基因，其可与整合素特异性结合，并形成复合体参与调控肿瘤细胞增殖和粘附及迁移等过程[4]。相关研究发现[5-6]，CD151在多种恶性肿瘤中存在高度表达情况，如膀胱癌、结肠癌、肝癌及前列腺癌等，且发现CD151高度表达与各恶性肿瘤发生、发展及预后存在紧密联系。本文研究通过对结肠癌患者中CD151、整合素α3进行检测，旨在探讨其表达状况，为临床判断结肠癌患者病情提供参考，同时为医师制定治疗方案提供依据。本次研究中整合素α3可通过与其配体蛋白的作用来调控细胞内外信号传导，对细胞迁移、转移有一定影响。然细胞迁移信号从细胞外向细胞内传递的关键步骤则是整合素与CD151复合体的形成，所以通过检测CD151、整合素α3表达情况对掌握结肠癌患者病情及预后具有重要意义。本文研究结果显示，CD151、整合素α3在结肠癌组织中呈高度表达，且CD151与整合素α3呈正相关性，由此说明CD151、整合素α3相互结合可能在结肠癌发生、发展中起着重要作用。有报道称[7]，CD151与整合素的复合体形成后，其在纤维粘连蛋白上的连接大约减少90%。本文研究结果显示，CD151与整合素α3在结肠癌细胞侵袭和转移中起着关键作用，同时为临床医师判断患者病情状况提供重要依据，为临床治疗提供指导价值。

综上所述，结肠癌患者CD151与整合素α3可作为临床医师评估结肠癌患者预后的重要指标。此外，随着临床不断深入研究，相信今后结肠癌靶向治疗会出现新的分子靶点，更好地改善患者预后。