5种消毒剂对鸭场常见病原菌的杀灭效果试验

吴伯梅 ， 鲜思美 ， 饶体宇 ， 张 友 , 杨 倩 ， 包滔滔

(1.贵州大学动物科学学院 ， 贵州 贵阳 550025 ； 2.贵州省动物疫病研究所 ， 贵州 贵阳 550025)

养鸭业在我国农业经济产业中占有重要地位，随着经济发展，传统养鸭业结构也在发生着很大的变化，即由农村散养转变为集约化养殖。鸭场环境卫生不达标、地面潮湿、舍内通风不良、饲养密度过大等均是导致细菌性疾病发生的诱因，一旦发生疫病将给养殖户带来巨大的经济损失。预防性消毒是集约化养殖场防控细菌性疾病的重要措施之一，常见的消毒方法包括物理消毒、化学消毒及微生物消毒等，其中化学消毒法主要通过消毒剂熏蒸、喷洒和浸泡等方式杀灭病原微生物。本试验选用市场常售的5种消毒剂对鸭场常见5种病原菌进行杀灭效果观察，对养殖场选择消毒剂进行有效消毒具有指导意义。

1 材料与方法

1.1 菌株 大肠杆菌、鸭疫里默杆菌、巴氏杆菌、沙门菌和葡萄球菌均由贵州省动物疫病研究所临床分离鉴定及保存。

1.2 试剂 消毒剂：聚维酮碘、戊二醛癸甲溴铵(河南后裔实业集团有限公司)；苯扎溴铵(江西鹏创生物科技有限公司)；月苄三甲氯铵(西乡长江动物药品有限责任公司)；复方戊二醛(英国考文垂化学药品有限公司)。培养基：LB肉汤、普通营养琼脂、琼脂粉、脱纤维羊血、胰蛋白胨大豆肉汤、特级马血清。中和剂：参照GB15982-2012医院消毒标准配制消毒剂中和剂，聚维酮碘及月苄三甲氯铵配制0.5%硫代硫酸钠溶液；苯扎溴铵配制0.3%吐温-80+0.3%卵磷脂溶液；复方戊二醛(戊二醛+苯扎氯胺)及戊二醛癸甲溴铵(戊二醛+癸甲溴铵)配制3%吐温-80+0.3%卵磷脂+0.3%甘氨酸。

1.3 菌液制备 将加入25%甘油保存的菌种解冻，采用分区划线法在琼脂平板中接种，37 ℃恒温培养箱培养过夜后得到单个菌落，挑取单个菌落进行增菌，37 ℃恒温培养18-24 h，平板计数法测定菌落总数，制备细菌悬液。

1.4 5种消毒剂对鸭场常见病原菌的MIC/MBC测定 参照2002年版《消毒技术规范》检测MIC/MBC，使用无菌标准硬水将各消毒剂稀释成使用浓度的2倍，对该浓度进行倍比稀释。取稀释好的消毒剂1 mL分别加入含1 mL双倍营养肉汤的试管中混匀，再接入0.1 mL制备好的菌悬液混匀，标记；阳性对照以营养肉汤加菌液为对照，阴性对照以营养肉汤及无菌标准硬水为对照，各样本设2个平行对照，将试验组、阳性对照组及阴性对照组放置37 ℃摇床中，培养24 h，观察结果。判定标准：当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无菌生长(透明)，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗(抑)菌剂浓度，重复试验3次，得到一致结果，即可判定该浓度为样品对受试菌的MIC，试验菌工作浓度为5×105CFU/mL～5×106CFU/mL。

在MIC 试验观察 24 h 后，往无菌生长的试管加入经鉴定合格的中和剂 2 mL混匀，于 37 ℃ 培养箱中培养48 h，观察是否有菌生长，将培养后的液体在营养琼脂上进行点种，无细菌生长的最大稀释度即为该样品对受试菌的MBC。

2 结果

通过营养肉汤稀释法检测5种消毒剂对鸭场常见病原菌的MICs/MBCs值，结果见表1、表2。由表1、表2可知，这5种消毒剂对病原菌的杀菌效果有明显差别，聚维酮碘对同种受试菌的MICs/MBCs值均一致，对不同受试菌的MICs/MBCs值表现出2倍差异，苯扎溴铵对这5种病原菌的MICs/MBCs值分别为1∶200、1∶25；月苄三甲氯铵对这5种病原菌的MICs/MBCs值分别为1∶1 920、1∶960，复方戊二醛对这5种病原菌的MICs/MBCs值分别为1∶1 200、1∶600；戊二醛癸甲溴铵对这5种病原菌的MICs/MBCs值分别为1∶1 000、1∶500。

表1 5种消毒剂对鸭场常见病原菌的MICs值

表2 5种消毒剂对鸭场常见病原菌的MBCs值

3 讨论

在养殖鸭子的环境中存在着大量微生物，一般情况下不会对鸭产生危害，但环境污染、圈舍湿冷、气温骤变等应激导致鸭子抵抗力降低，常诱发细菌性疾病，病原菌随排泄物、分泌物排到养殖环境中，造成地表、饲料及饮水等污染，鸭群通过消化道、呼吸道及伤口感染，导致细菌性疾病的发生与传播，给养殖户带来严重经济损失。消毒是预防和控制细菌性疾病发生与流行的有效手段，常使用消毒剂消灭停留在不同传播媒介上的病原体，通过切断传播途径，以控制细菌性疾病的发生与传播。

聚维酮碘主要通过释放游离碘，作用于细菌体内的蛋白质，使蛋白质变性、沉淀，导致细菌死亡，广泛应用于黏膜、皮肤、器械、隐形眼镜等消毒[1-3]。本试验中聚维酮碘对病原菌的MICs/MBCs均低于厂家推荐使用浓度，根据周庆民等[4]研究影响聚维酮碘稳定性的试验中，发现有效碘含量会随着存储时间增加、温度升高而减少，避光保存可减缓有效碘含量的下降速率，聚维酮碘中有效碘的含量与杀菌能力呈正相关，推测试验使用的聚维酮碘中因保存不当导致有效碘含量降低，从而表现出低的杀菌效果。

本试验根据薛广波等[5]方法在检测苯扎溴铵MIC/MBC时，MICs/MBCs表现出8倍的差异，为了解导致苯扎溴铵对病原菌MIC/MBC差异大的原因，通过对苯扎溴安作用后的菌液进行细菌总数测定，发现苯扎溴铵在稀释比为1∶25～1∶200时，试管中的颜色变化与阴性对照一致，但细菌浓度比工作浓度(5×105CFU/mL～5×106CFU/mL)低，表现出一定的抑菌作用，故判定苯扎溴安对病原菌的MIC为1∶200。

检测这5种消毒剂对病原菌的MICs/MBCs值均低于厂家推荐使用浓度，按照厂家推荐使用浓度进行消毒，不能对环境做到有效消毒，而戊二醛癸甲溴铵溶液按照厂家推荐的常规环境消毒稀释比1∶2 000～1∶4 000，疫病发生时环境消毒稀释比1∶500～1∶1 000，通过与检测到的MICs/MBCs值相比，按照疫病发生时环境消毒的稀释最大比进行配制消毒剂，可对病原菌造成一定的杀灭效果。造成消毒剂对病原菌的MIC/MBC低于厂家推荐使用浓度的原因，可能是消毒剂保存不当或病原菌对消毒剂产生耐药性。因此，养殖厂在选择消毒剂时，应结合消毒剂对病原菌的杀灭效果，制定科学的消毒规程，对养殖场进行有效消毒。