超高效液相色谱-质谱法测定药包材中的双酚A

翟美娟，陈伯文，唐莲

(南京医科大学附属苏州医院，苏州市立医院药学部，江苏 苏州 215002)

双酚A(bisphenol A，BPA)，简称二酚基丙烷，是一种外源性的内分泌干扰物，具有某些雌激素特性[2],是合成塑料包装材料制品的一种添加剂，常用于生产聚碳酸酯、环氧树脂、聚砜树脂、聚苯醚树脂等多种高分子材料[1]。双酚A易溶于碱性水溶液、丙酮和醇类，用含双酚A的材料制成的药包材及食品包装材料(饮料瓶、饮水瓶、奶瓶等)时，材料中的双酚A会迁移到药品或食品中，从而进入人体，对人体健康带来潜在危害。

目前双酚A的测定方法主要有高效液相色谱法[3-4]、液质联用(LC-MS)法[5]、气相色谱法[6]、气质联用法[7]等。本文建立了超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用法[8]测定了部分药品包装材料中的双酚A含量，方法简便快捷、灵敏度高，为药包材中BPA的含量控制及药包材的选用提供了参考依据。

1 仪器与试剂

超高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Waters xevo TQ-S)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；双酚A标准品(美国Supelco公司，纯度为99.9%)；药包材(苏州市立医院提供，详见表9)；甲醇、乙腈均为LC-MS级别。

2 试验方法

2.1 溶液的制备

2.1.1 标准溶液的制备 精密称取双酚A对照品10.63 mg至10 mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，配制成浓度为1.063 mg·mL-1的标准储备液。

精密移取1 mL标准储备液至100 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，稀释成浓度为10.63 μg·mL-1的标准溶液。

2.1.2 样品溶液的制备 分别将药包材剪碎或打成粉末，精密称取0.5 g样品至10 mL容量瓶中，加甲醇溶解超声提取60 min后，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，10 000 rpm离心10 min，取上清液待测。

2.2 色谱及质谱条件

2.2.1 色谱条件 色谱柱为BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；流动相：乙腈-水，梯度洗脱(洗脱程序见表1)；柱温：40 ℃；样品室温度：15 ℃；流速：0.4 mL·min-1；进样量：2 μL。

2.2.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：负离子扫描；离子喷雾电压：2.5 kV；锥孔电压：50 V；离子源雾化温度：600 ℃；去溶剂气流量：1 100 L·h-1；锥孔气流量：150 L·h-1；雾化器气流量：7 Bar；碰撞气体流量：0.15 mL·min-1；检测模式：多反应监测(MRM)模式，双酚A的离子对及质谱分析条件参数见表2。空白液、对照品及样品液的质谱图见图1，结果表明，药包材中的其他成分不干扰BPA的测定。

表1 流动相梯度洗脱

表2 双酚A的质谱参数

2.3 标准曲线的制备 用甲醇逐级稀释BPA标准溶液，配制成BPA浓度分别为0.531 5、5.315、26.58、53.15、106.3 ng·mL-1的标准溶液，进样分析，以峰面积(A)为纵坐标对BPA浓度(C)为横坐标进行线性回归，得标准曲线方程：A=1 432.781 1C+416.762 4，r=0.999 9，BPA浓度在0.5～106.3 ng·mL-1范围内线性关系良好。

A.空白液;B.对照品；C.样品液图1 双酚A的质谱图

2.4 精密度 分别取低、中、高3种不同浓度的BPA标准溶液，按上述色谱-质谱条件，在1 d内连续进样5次，以及连续5 d进样测定，计算BPA的日内及日间精密度RSD(见表3)。

表3 日内日间精密度实验结果(n=5)

2.5 稳定性 取浓度为53.15 ng·mL-1BPA标准溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h时进样分析，按“2.2”项下条件测定峰面积，计算RSD值。并精密称取外用液体药用聚酯瓶(批号：1511054)粉末0.5 g，按上述样品处理方法操作，分别在0、2、4、6、8、10 h时进样分析，按上述条件测定峰面积，计算RSD值(结果见表4)，结果表明对照品及样品溶液在10 h内均稳定。

2.6 加样回收率 称取样品(外用液体药用聚酯瓶 批号：1511054)粉末约0.5 g 9份，分别精密加入相当于上述药包材粉末中含量80%、100%、120%的BPA对照品，按上述样品处理方法操作，制备样品并进样分析，测定加入的BPA的量，计算回收率(见表5)。

表4 稳定性试验

表5 加样回收率测定(n=3)

由上表可见，回收率整体在92%～105%之间，RSD<10%，符合含量测定要求。

2.7 重复性 精密称取外用液体药用聚酯瓶(批号：1511054)粉末0.5 g，按上述样品处理方法操作，平行制备6份，进样分析，计算BPA的含量，计算其RSD(结果见表6)。

表6 重复性试验(n=6)

由上表结果可知，重复性结果良好。

2.8 样品含量测定 分别精密称取各药包材粉末或碎片0.5 g，按上述样品处理方法操作，进样测定，计算BPA的含量(结果见表7)。

3 讨论

3.1 质谱条件的优化 将浓度为531.5 ng·mL-1的BPA标准溶液在负离子模式下进行母离子全扫描，得到双酚A分子离子峰为227.1，分别对锥孔电压、离子源温度、去溶剂气温度等条件进行优化。通过碰撞反应进行子离子扫描确定双酚A的定量离子和定性离子，再进行MRM检测反复优化，在锥孔电压54 V时，碎裂能分别为26和18 V，m/z133.1和m/z212.1碎片离子强度比较大，所以选择m/z133.1和m/z212.1作为定量离子和定性离子。

表7 含量测定结果

3.2 色谱条件的优化 试验分别考察了甲醇、乙腈作为有机相对BPA测定的影响，发现甲醇作为流动相灵敏度高，但是噪音较大，色谱峰分离不完全。而以乙腈和水为流动相产生的噪音较小，因此试验选择乙腈和水为流动相，并采用梯度洗脱的方式，色谱峰的分离效果较好。

3.3 BPA的提取 BPA不溶于水，易溶于碱性水溶液、丙酮和醇类，试验初期我们分别采用四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、甲醇等对药包材中的BPA进行提取，考察了不同溶剂对BPA提取的效果，结果表明甲醇对BPA有较好的提取效果，且提取出的杂质较少。进而对甲醇提取BPA的超声时间进行了考察，发现BPA的提取效率随着超声时间的延长而增加，60 min可基本将BPA提取完全。

综上，本试验采用超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用法测定药包材中双酚A的含量，在浓度为0.5～106 ng·mL-1范围内，具有良好的线性关系。样品的平均回收率在92%～105%之间，RSD10%。该方法具有操作简便、灵敏度和准确度高的特点，能满足药品包装材料中双酚A的准确测定。

在所提供的药包材中均检测出双酚A，虽含量差异较大，但考虑到BPA对人体的

潜在危害，本试验结果提醒我们，应慎重选择合适的药包材。