地拉罗司有关物质分析方法研究

魏 娜，孟文娟，何 雷，王珍珍

(江苏豪森药业集团有限公司，江苏 连云港 222000)

过多的铁沉积在人体组织器官，会导致细胞损伤和器官功能障碍，其发病原因可分为原发和继发两种。原发性铁过载由遗传因素异常导致，见于原发性血色病。临床上以继发性铁过载多见，主要是由于长期反复输血等各种原因导致无效红细胞生成及肝病引起铁代谢障碍等造成[2]。地拉罗司是由瑞士诺华制药公司(Novartis Pharma Schweiz AG)研究开发的铁螯合剂产品，它是一种三齿状铁螯合剂，可与三价铁离子以2∶1比例形成复合物，从粪便排泄，从而降低人体中铁的含量[3]。该品种目前暂未收载于2015版中国药典、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)及英国药典(BP)中，本文对主流合成路线下可能产生的杂质进行分析，对地拉罗司的有关物质方法进行了开发优化，采用确定的分析方法进行方法验证。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，Agilent；SE602F电子天平，奥豪斯；XS105DU电子分析天平，梅特勒-托利多；S220酸度计，梅特勒-托利多；乙二胺四乙酸二钠(分析纯)；磷酸(分析纯)；乙腈(色谱纯)；纯化水。

2 杂质分析

目前主流的地拉罗司合成方法以水杨酸为原料，经与二氯亚砜氯化、水杨酰胺脱水环合、4-羧基苯肼开环重排得到地拉罗司[4]。地拉罗司中可能存在的工艺杂质主要有起始原料、中间体。起始原料有水杨酸、水杨酰胺、4-肼基苯甲酸(4-肼基苯甲酸为潜在基因毒性物质，需用灵敏度更高的方法进行控制)，中间体为2-(2-羟基苯基)-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮。取地拉罗司适量，分别在酸(1mol/L盐酸)、碱(1mol/L氢氧化钠)、氧化(30%H2O2)、热解(90℃水浴)、高温(105℃)和光照(4500lx)各条件下进行破坏，采用确定的方法进行检测，结果表明本品在酸、碱、氧化、高温、热解、光照条件下均较稳定，无明显的降解杂质。

3 检测方法开发

在二极管阵列检测器上对地拉罗司及杂质进行扫描，发现成品及主要杂质的特征吸收为250nm。本品为铁离子螯合剂，会与检测系统中可能存在的铁离子螯合，对样品的检测结果产生影响。体系中铁离子的来源主要有流动相、色谱仪管道和色谱柱，为了消除微量铁离子，在流动相中加入乙二胺四乙酸二钠，利用乙二胺四乙酸二钠与金属离子的络合作用消除对样品检测产生的干扰。

采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂色谱柱，检测波长250nm，流动相体系为乙二胺四乙酸缓冲液-水-乙腈，对流动相的pH值和色谱柱柱温进行筛选，结果表明流动相的pH值为2.0，柱温60℃时各杂质的分离是最为理想的。对梯度进行调整，最终确定的色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速为每分钟1.0mL；检测波长为250nm；柱温为60℃。流动相A为0.1mg/mL乙二胺四乙酸缓冲液(pH值=2.0)-水-乙腈(100∶800∶100)，流动相B为0.1mg/mL乙二胺四乙酸缓冲液(pH值=2.0)-乙腈(100∶900)。按表1进行梯度洗脱。

表1 洗脱进行梯度

4 结果与讨论

(1)在确定的色谱条件下，对各已知杂质进行检测，考察方法的专属性，各杂质与主峰的分离度均符合规定。

(2)地拉罗司及各杂质在0.20～2.0μg/mL的范围内线性关系良好，相关系数r均大于0.999。

(3)以各杂质限度(0.1%样品测定浓度)为基准100%，分别配制成含杂质10%、50%、100%和200%的溶液，平均回收率在91.2%～101.3%之间，该方法检测杂质的准确度良好。

(4)地拉罗司及各杂质的检测限≤0.01%(与检测浓度比值)，定量限≤0.02%(与检测浓度比值)，该方法检测杂质的灵敏度良好。

(5)微调乙二胺四乙酸缓冲液pH值、柱温和起始比例，各杂质与主峰的分离度均符合规定，该方法的耐用性良好。

(6)由不同分析人员在不同仪器设备上，不同时间进行检测，结果并无差异，表明该方法重现性良好。