乳腺癌患者超声检查中PSV、RI值与术后组织中MMP-11、VEGF表达的相关性探讨

谭兴利,陆伟辉,汤学文,缪贤盛,徐 蓓,彭世义△

1.复旦大学附属中山医院青浦分院超声科 (上海201799);2.复旦大学附属中山医院青浦分院普外科(上海201799)

乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一，主要发生于中老年女性[1]。超声是常规筛查的重要方法，近年认为收缩期峰值血流速度(PSV)和阻力指数(RI)对判断病变性质有重要价值[2]。乳腺肿瘤在生长时间质的血管生成作用明显，可以用CD31和CD34等血管内皮标记物辅助观察，这种新形成的血管常伴随着血管内皮生长因子等血管生成因子的大量分泌[3]。血管内皮生长因子(VEGF)具有经典的血管生成的作用，可以通过其受体VEGFR2调节血管内皮的增殖[4]。MMPs家族的多个成员在乳腺癌的生长及转移中起重要的调节作用，也能通过调节VEGF的表达，间接促进血管的生成[5]，基质金属蛋白酶-11(MMP-11)作为家族的重要成员，具有对细胞外基质的调节作用和间接的促血管生成的作用。本研究观察乳腺癌患者超声中PSV和RI值的特征，并探讨两者与术后组织中MMP-11和VEGF的关联性，现报道如下。

资料和方法

1 一般资料 收集2016年8月至2018年3月在我院诊断为乳腺癌的患者作为研究组，共71例，患者均为女性，年龄41～87岁，中位年龄59岁。纳入标准：①经术后病理医师确诊并分级，符合WHO中的诊断标准；②均为首次乳腺癌发病；③家属或患者签署知情同意书。排除标准：①术前行放、化疗的患者；②有家族遗传病史者；③伴有其它器官恶性肿瘤者。收集19例乳腺良性病变患者作为对照组，均为女性，年龄41～78岁，中位年龄53岁，均经术后病理确诊，其中乳腺腺病10例，乳腺纤维腺瘤9例。

2 超声检测PSV和RI值 患者检查时取仰卧位，应用GE logiq E9百胜MyLab 30彩色超声诊断仪，选择高频浅表探头，频率是5～12 MHz，两上肢肘关节呈90度，显露乳房，以乳头为中心由内向外探查，发现肿块标记，观察部位、大小、形态、边缘及血供情况，同时测量肿块的血流动力学参数，重点关注PSV和RI值。

3 MMP-11和VEGF表达检测 术后组织常规行中性福尔马林固定、脱水、石蜡包埋及切片。MMP-11和VEGF的检测均应用免疫组化方法。MMP-11和VEGF的试剂均为浓缩液，先按不同比例稀释后进行预实验，以最佳显色浓度用于正式实验(MMP-11为1∶250，VEGF为1∶500)。标本均集中检测，由同一病理科技师进行操作，严格按说明书中的操作步骤完成实验，做好质控工作。

4 MMP-11和VEGF结果判定 MMP-11和VEGF的阳性部位是细胞浆，以呈现浅黄色、黄色及棕黄色为阳性。显色强度：无着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性百分比评分：选择上皮细胞分布且显色较为集中的热点区，并在400倍视野下进行百分率评估，以小于5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，大于51%为3分。以显色强度和阳性百分比两者评分相加为最后得分。以<2分为阴性，以≥2分为阳性。计算阳性率。

结 果

1 两组中PSV和RI值比较 两组中PSV和RI值比较差别有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 两组中PSV和RI值比较

2 两组中MMP-11和VEGF阳性率比较 两组中MMP-11和VEGF的阳性率差别有统计学意义(P<0.01),见表2。

表2 两组中MMP-11和VEGF阳性率比较[例(%)]

3 PSV和RI值在观察组不同临床特征分组中的比较 观察组中PSV、RI的表达与肿瘤的最大径和组织学评分相关,见表3。

4 MMP-11和VEGF在观察组不同临床病理特征中的比较 观察组中MMP-11和VEGF的表达与肿瘤的最大径和组织学分级相关，MMP-11与淋巴结转移相关，VEGF与肿瘤的增殖指数相关，见表4。

5 观察组中PSV、RI值与MMP-11和VEGF表达的相关性分析 线性相关分析显示RI 与VEGF(r=0.45，P=0.0412)、RI与MMP-11(r=0.41，P=0.0458)、MMP-11与VEGF(r=0.53，P=0.0129)均具有正相关性。其它指标间未见明显相关性。

表3 PSV和RI值在观察组不同临床特征分组中的比较

表4 MMP-11和VEGF在观察组不同临床病理特征中的比较[例(%)]

讨 论

乳腺癌二级预防是恶性肿瘤中最能有效提高生存率和降低死亡率的重要措施，临床上早期乳腺癌的发现率仅25%，超声检查是早期筛查的重要方法[6]。乳腺癌发生初期主要局限在输乳管或终末小叶单位内的上皮，表达为上皮的异型增生和癌变，如果增生的上皮尚未突破基底膜或肌上皮细胞构成的屏障，则为原位癌，如果突破基膜或肌上皮细胞构成的屏障则形成浸润性癌。组织学表现为病灶不规整，边缘不清晰。超声检查可见边界不规则、有锯齿状改变、回声不均匀、微粒样钙化等[7]，尤其是病灶后方回声衰减、微钙化是临床诊断的重要依据。研究认为肿瘤细胞数量增加时，血管内皮细胞间的连接也明显增加，血流供应丰富。CDFI/PDI能观察到直径大于0.1 cm的血管，并能初步判断血管分枝和级联的方式[8]。PSV和RI是超声中观察血管的重要指标。恶性肿瘤患者可以观察到血流信号，并发现RI值超过0.65的病变，呈现高速高阻型频谱的现象。近年学者在组织学中可以观察到恶性肿瘤间质的血管生成，并发现了相关的蛋白。VEGF是血管生成的促进因子，在恶性肿瘤进展时，肿瘤细胞分泌增加，并且对肿瘤间质的内皮细胞增殖有明显的促进作用，新生血管在机械性的冲击下形成管腔，使肿瘤的血液供应增加，为细胞生长提供必要的养料[9-10]。MMP-11是MMPs家族中间质溶解素成员，其对基质蛋白的降解在不同肿瘤中的程度不一样，但是其对丝氨酸蛋白酶抑制因子有明显的作用，并且可以被弗林蛋白激活，与MMPs家族中其它成员的对机体的作用相似[11]。史晓宇等[12]认为MMP-11在结肠腺癌中表达的阳性率明显升高，其与TNM分期、分化程度和淋巴结转移相关，且二者具有正相关性，认为二者的高表达与病变的形成密切相关，并且可以作为临床早期诊断、监测转移及预后的指标。

本研究结果显示两组术前超声中PSV和RI值的表达差别有统计学意义，提示两者的升高可能提示有乳腺癌的风险。结果显示两组术后组织中MMP-11和VEGF的表达差别有统计学意义，提示者具有癌基因样的作用，可能是肿瘤形成的促进蛋白。观察组中PSV、RI值、MMP-11和VEGF的表达均与肿瘤的最大径和组织学分级相关，提示PSV、RI值提示肿瘤生长和进展，MMP-11和VEGF是促进肿瘤生长和进展的蛋白，即MMP-11和VEGF高表达引起肿瘤细胞生长和蔓延。线性相关分析显示RI 与VEGF、RI与MMP-11均具有正相关性，提示RI值与术后组织中MMP-11和VEGF的表达有一致性。近年认为VEGF与预后有关，因此术前RI值升高不仅在一定程度上提示肿瘤性质，其也可能反应出患者预后的特征。实验结果也证实RI值的不同对术后组织学分级有一定的预测价值。VEGF与肿瘤细胞增殖有明显关联，即VEGF高表达可以促进肿瘤细胞的增生和繁殖，肿瘤细胞生长加速，肿瘤体积增大，细胞异型性明显，预后较差。而MMP-11可能具有多种功能，其在乳腺癌中可以在一定程度上降解细胞外基质，还可能对血管生成有一定的调控作用，这也是MMPs家族成员中多种蛋白的作用之一[13]。MMP-11对血管的调控可能是间接的，与机体中其它蛋白协同作用后，进而促进内皮细胞增殖[14]。本实验观察到MMP-11和VEGF的相关性也证实了MMP-11对血管生成的间接作用。VEGF对肿瘤血管生成的调节是直接的，通过分泌作用，直接促进内皮细胞的生长。

总之，超声检测PSV和RI值在术前判断乳腺癌有一定帮助，组织中MMP-11和VEGF的表达与病变的进展有关。RI值与MMP-11和VEGF的表达有一定相关性。RI值升高的意义可能更明显。这种无创性检查在术前评估有明显意义，适于在临床中应用。