非小细胞肺癌组织ZNF217蛋白表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系

常世川，朱川，任必勇，黄小平，邓超，刘良忠

(重庆三峡中心医院，重庆404000)

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常见的类型，约占肺癌总数的85%[1]，其早期确诊率不高，大部分患者确诊时已进展为局部晚期或晚期，错过了最佳手术时机，预后较差。随着分子生物学的不断发展，NSCLC被细分为不同的分子亚型，并由此研发了各类分子靶向药物。分子靶向药物的应用能够明显改善NSCLC患者预后，但大部分患者用药6～12个月出现获得性耐药[2]。因此，寻找NSCLC新的治疗靶点具有重要意义。人类20号染色体，特别是20q13区域基因扩增与乳腺癌、卵巢癌、胃癌等肿瘤发生、发展密切相关[3～6]。1998年，Collins等[7]在人染色体20q13区域发现了一个含260 kb的基因，命名为锌指基因217(ZNF217)，其表达产物为ZNF217蛋白。但目前ZNF217蛋白与NSCLC的关系尚不明确。本研究观察了NSCLC组织ZNF217蛋白表达变化，并分析其表达变化与患者临床病理特征和预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010年1月～2012年1月重庆三峡中心医院收治的NSCLC患者85例。所有患者经术后组织病理检查明确诊断。纳入标准：①符合NSCLC诊断，初诊；②年龄>18岁；③TNM分期(IASLC第七版)Ⅰ～Ⅲ期；④均行肺癌根治术，术前未行任何抗肿瘤治疗；⑤ECOG评分0～2分；⑥临床病理资料完整。排除标准：①非NSCLC者；②术前已发生远处转移者；③术前接受其他抗肿瘤治疗者；④术后残留病灶者；⑤合并其他肿瘤或心、脑、肾等重要器官严重疾病者；⑥临床病理资料不完整者。其中，男59例，女26例；年龄≤60岁51例，>60岁34例；有吸烟史53例，无吸烟史32例；ECOG评分：0分46例，1分33例，2分6例；病理类型：腺癌35例，鳞癌43例，其他7例；T分期：T1期37例，T2期37例，T3期11例；N分期：N0期36例，N1期44例，N2期5例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期57例，Ⅲ期8例；手术方式：肺叶切除80例，单侧全肺切除5例。本研究经重庆三峡中心医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意。

1.2 ZNF217蛋白表达检测 采用免疫组化法。取手术切除的NSCLC组织及其配对的癌旁正常组织(距肿瘤组织边缘>3 cm)，10%中性甲醛固定，常规脱水、透明，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。将切片置于80 ℃烤箱30 min，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3%过氧化氢室温避光孵育10 min，0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液加热抗原修复，自然冷却至室温。10%正常山羊血清封闭30 min，然后加入兔抗人ZNF217抗体(稀释比1∶800)，4 ℃孵育过夜。次日加入生物素标记的山羊抗兔IgG二抗，37 ℃孵育30 min。DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知ZNF217蛋白阳性切片作为阳性对照。所有操作严格按Envision试剂盒说明进行。

由两位病理科医师采用双盲法独立阅片。ZNF217蛋白阳性染色定位于细胞核，呈淡黄色至棕褐色颗粒。每张切片随机至少选取5个400倍视野，评价染色强度，计数阳性细胞，计算阳性细胞比例。以染色强度评分和阳性细胞比例评分综合判定ZNF217蛋白阳性表达。染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞比例评分：<10%为0分，10%～<25%为1分，25%～<50%为2分，≥50%为3分。两项评分乘积≥1为ZNF217蛋白阳性表达。

1.3 随访 所有患者术后定期随访，随访方式包括电话、门诊、信件等，随访截至2017年1月。统计患者总生存期(OS)。OS是指患者首次诊疗至因任何原因引起死亡的时间(失访患者为最后一次随访时间，研究结束仍然存活患者为随访截至日期)。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC组织与癌旁正常组织ZNF217蛋白表达比较 NSCLC组织与癌旁正常组织ZNF217蛋白阳性表达率分别为55.3%(47/85)、25.9%(22/85)。NSCLC组织ZNF217蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常组织(χ2=23.999，P<0.01)。

2.2 NSCLC组织ZNF217蛋白表达与患者临床病理特征的关系 NSCLC组织ZNF217蛋白表达与肿瘤T分期、N分期和TNM分期有关(P均<0.05)，与性别、年龄、吸烟史、ECOG评分、病理类型、手术方式无关(P均>0.05)。见表1。

2.3 ZNF217蛋白表达与NSCLC患者预后的关系 所有患者术后随访截至2017年1月，随访6～78个月、中位随访时间50.6个月。ZNF217蛋白阳性表达者中位OS为39个月，ZNF217蛋白阴性表达者为61个月。ZNF217蛋白阳性表达者中位OS明显低于ZNF217蛋白阴性表达者(χ2=7.770，P<0.01)。见图1。

3 讨论

NSCLC是现阶段全球范围内肿瘤相关死亡的主要原因之一。随着分子生物学的不断发展，NSCLC系列致癌驱动基因相继确定，肺癌分型也由过去单纯的组织病理学分类，进一步细分为基于驱动基因的分子亚型[8]，并由此研发了各类分子靶向药物。分子靶向药物的临床使用明显改善了携带相应驱动基因的NSCLC患者预后。但大部分患者用药一段时间后易出现获得性耐药。因此，需要不断寻找NSCLC新的致癌驱动基因。

表1 NSCLC组织ZNF217蛋白表达与患者临床病理特征的关系(例)

图1 不同ZNF217蛋白表达者生存曲线

ZNF217定位于人染色体20q13.2，是新发现的候选癌基因。有研究证实，ZNF217与乳腺癌、胃癌、结直肠癌等肿瘤的发生、发展有关[9]。ZNF217编码产物为ZNF217蛋白，属于锌指蛋白家族成员。研究表明，锌指蛋白家族成员在多种肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。但目前ZNF217蛋白与NSCLC的关系尚不明确。

季婷婷等[10]研究发现，胰腺癌组织ZNF217蛋白表达明显高于癌旁正常组织，且其高表达与肿瘤体积、TNM分期、神经浸润、淋巴结转移有关。有研究认为，ZNF217可能在mRNA转录层面上抑制E-cadherin表达，从而促进细胞上皮-间质转化(EMT)，最终导致肿瘤的发生、发展[11，12]。Luo等[13]通过慢病毒介导shRNA来抑制胶质瘤细胞ZNF217表达，发现PI3K/AKT信号通路失活，该信号通路的下游基因E-cadherin表达明显上调，N-cadherin、c-myc表达明显下调，肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。本研究结果发现，NSCLC组织ZNF217蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常组织，提示ZNF217蛋白可能与NSCLC的发生、发展有关。进一步研究发现，ZNF217蛋白表达与肿瘤T分期、N分期和TNM分期有关，而与性别、年龄、吸烟史、ECOG评分、病理类型、手术方式无关。提示ZNF217蛋白可能在NSCLC的侵袭和转移过程中发挥重要作用。

韩亮等[14]研究发现，ZNF217蛋白低表达胃癌患者生存时间明显长于ZNF217蛋白高表达胃癌患者。Shida等[15]研究发现，ZNF217蛋白阴性表达肿瘤患者无复发生存期和总生存期均长于ZNF217蛋白阳性表达肿瘤患者。Jiang等[16]研究发现，抑制ZNF217蛋白表达，可抑制前列腺癌进展。Cheng等[17]荟萃分析发现，ZNF217蛋白可作为预测恶性肿瘤患者预后的指标。以上研究表明，ZNF217蛋白可作为预测肿瘤患者预后的指标。但其能否用于预测NSCLC患者预后尚不清楚。本研究结果显示，ZNF217蛋白阳性表达NSCLC患者中位OS明显低于ZNF217蛋白阴性表达NSCLC患者。说明ZNF217蛋白亦可用于预测NSCLC患者预后。

综上所述，NSCLC组织ZNF217蛋白表达明显升高，其表达变化与肿瘤进展和患者预后不良有关。ZNF217有可能成为NSCLC精准治疗的一个潜在靶点。