鱼金注射液对大鼠的亚急性肝肾毒性研究

1.黔西南民族职业技术学院，贵州 黔西南 562400；2.黔西南州人民医院，贵州 黔西南 562400

鱼金注射液是一种纯中药注射剂，由鱼腥草、金银花提取制成，现有质量标准采用GC色谱法测定甲基正壬酮。鱼腥草始载于《名医别录》，为三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataTunb)的鲜全草或干燥地上部分，性微寒、味辛，归肺经，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功效，用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢、痈肿疮毒等症[1]。其主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物，尚含生物碱、脂肪酸、有机酸、蕺菜碱、钾盐等。现代药理研究[2-7]表明，鱼腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗过敏、镇咳、增强机体免疫力等药理作用。现部分地区已对其进行人工培植，以四川、贵州、云南等地较为广泛。金银花(LoniceraJaponicaThunb)又名忍冬花，具有悠久的用药历史，是忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花[1]。“忍冬”始载于《名医别录》，初始以茎叶入药，李时珍所著《本草纲目》载：“茎叶及花，功用皆同”。自此，花与藤叶以“忍冬”或“金银花”为名，同作一药使用，当代主以花入药。金银花性寒，味甘，入肺、心、胃经，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风的功效，主治胀满下疾、温病发热、热毒痈疡，丹毒和肿瘤等症[1,8]。从金银花中分离鉴定的化学成分类型较多，主要有挥发油类、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜类等[9]。药理研究[10]表明，金银花具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利胆、降血糖、降血脂、增强免疫、抗氧化、抗生育、止血等作用。

鱼金注射液被广泛地应用于临床治疗呼吸、消化、泌尿生殖等系统的感染性疾病，取得了较好的效果[11]。有研究[12]选取128例支气管肺炎患者为研究对象，使用中药鱼金注射液联合抗生素治疗，临床疗效显著。另有学者研究发现山海丹牌鱼金注射液口腔雾化给药具有抗炎、解热及抗菌作用[13]。研究以小儿支气管肺炎为研究对象，发现鱼金注射液用于雾化吸入对发热、咳嗽、气急等症状疗效显著，具有起效快、退热作用好、且全身副作用小等特点[14]。目前，尚未出现专门针对鱼金注射液毒副作用、毒性物质基础和产生毒副作用的剂量范围的相关研究。本实验以大鼠为研究对象，观察2 mL/kg、4 mL/kg鱼金注射液较长时间应用对机体肝、肾功能的影响，为鱼金注射液临床使用剂量、时间等提供相应实验依据。

1 仪器与材料

1.1 动物 SD大鼠60只，雌雄各半，(200±20) g，清洁级，购自重庆腾鑫生物技术有限公司，动物许可证号SCXK(军)2012-0011。

1.2 药品 鱼金注射液(批号：17060621E，朗致集团万荣药业有限公司)。

1.3 试剂 采血针(批号：170905，南昌市赣达医疗器械有限公司)；采血管(批号：180529，南昌市赣达医疗器械有限公司)；高效切片石蜡(批号：20180118，上海华灵康复器械厂)；多聚甲醛(批号：20180112，国药集团化学试剂有限公司)；PBS磷酸盐缓冲液(批号：ZLI-9062，北京中杉金桥生物技术有限公司)；无水乙醇(AR级，批号：GB678-90，江苏海兴化工有限公司)；二甲苯(AR级，批号：20180110，天津致远化学试剂有限公司)；苏木素染液(批号：BA-4097，珠海贝索生物技术有限公司)；伊红染液(批号：BA-4099，珠海贝索生物技术有限公司)；盐酸(AR级，批号：20180118，成都市科龙化工试剂厂)；中性树胶(批号：20171009，国药集团化学试剂有限公司)；重铬酸钾(AR级，批号：20180120，成都市科龙化工试剂厂)；浓硫酸：(AR级，批号：20180119，成都市科龙化工试剂厂)；组织包埋盒(批号：31050102W，江苏世泰实验器材有限公司)。

1.4 仪器 5800全自动生化仪(贝克曼)；R35刀片(日本羽毛安全剃刀株式会社)；转轮式切片机(德国徕卡-2016)；TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机(常州市中威电子仪器有限公司)；BMJ-Ⅲ型包埋机(常州郊区中威电子仪器厂)；PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器有限公司)；BA400Digital数码三目摄像显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)；Image-Pro Plus 6.0图像分析软件(美国Media Cybernetics公司)。

2 方法

2.1 动物分组和给药 60只清洁级SD大鼠随机分为3组，每组20只，雌雄各半。正常组、鱼金注射液低剂量组(2 mL/kg)、鱼金注射液高剂量组(4 mL/kg)，分别灌胃给予生理盐水2 mL/kg、鱼金注射液2 mL/kg、鱼金注射液4 mL/kg，每天灌胃给药1次，连续给药5周。

2.2 鼠肝脏指数和肾脏指数 取大鼠新鲜肝脏、肾脏，使用生理盐水将其冲洗干净，分别称取肝脏和肾脏湿重，计算肝脏指数和肾脏指数。肝脏指数=肝重(mg)/体重(g)，肾脏指数=肾重(mg)/体重(g)。

2.3 大鼠肝、肾功能检测 摘眼球采集大鼠血液，以2500 rpm/min，4 ℃离心15 min后吸取血清，全自动生化仪检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。

2.4 大鼠肝脏和肾脏病理检测 取大鼠新鲜肝肾组织适当大小迅速放入4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋、切片，HE染色，采用麦克奥迪实业集团有限公司生产的BA200Digital数码三目摄像显微摄像系统对切片进行图像采集，每张切片先于40倍下观察全部组织，观察大体病变，选择要观察的区域采集100倍、400倍图片，观察具体病变。

3 结果

3.1 大鼠肝、肾脏器指数检测结果 与正常组比较，鱼金注射液低、高剂量组雄性与雌性大鼠体重及肝脏指数、肾脏指数差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1～2。

表1 鱼金注射液对大鼠肝脏指数的影响

表2 鱼金注射液对大鼠肾脏指数的影响

3.2 大鼠血清肝、肾功能检测结果 与正常组比较，鱼金注射液低高剂量组雄性与雌性大鼠肝肾功能检测指标ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3～5。

表3 鱼金注射液对大鼠肝脏功能的影响

表4 鱼金注射液对大鼠肝脏功能的影响

表5 鱼金注射液对大鼠肾功能的影响

3.3 大鼠肝组织病理检测结果 正常组肝脏：肝脏被膜完整，肝细胞分叶不明显，肝索排列紊乱，少量肝细胞颗粒或空泡变性，胞质染色不均，可见数量不等的细小颗粒物质或大小不等的空泡；肝窦内未见明显的炎细胞浸润；门管区结构较为完整，未见明显的纤维组织增生及炎细胞浸润；其他亦未见明显病理变化。鱼金注射液低高剂量组肝脏组织镜下所见与正常组比较无明显差异。见图1、图2。

3.4 大鼠肾组织病理检测结果 正常组肾脏组织被膜完整，皮质和髓质分界清晰，肾小球结构完整清晰，未见毛细血管基底增厚及炎性渗出；部分肾小管可见上皮细胞变性，胞质染色不均；间质内未见炎细胞浸润及纤维组织增生；其他亦未见明显病理变化。鱼金注射液低高剂量组肾脏组织镜下所见与正常组比较无明显差异。见图3、图4。

4 讨论

鱼金注射液是一种新型中药注射剂，具有清热解毒、疏散风寒之功效，疗效可靠。临床应用中，其多采用静脉滴注、穴位注射或雾化吸入等方式，可用于治疗急性上呼吸道感染、急性支气管炎等，有“中药中的抗生素”之称。但由于中药制剂药物纯度一直存在争议，因此目前在临床的推广运用上有一定阻碍。目前，尚未出现专门针对鱼金注射液毒副作用、毒性物质基础和产生毒副作用的剂量范围的相关研究。本实验分别对大鼠灌胃给予鱼金注射液低剂量(2 mL/kg/d)、高剂量(4 mL/kg/d)，分别相当于人体推荐剂量的 50、100 倍，持续5周，就肝肾功能血清指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量，肝脏指数、肾脏指数及肝肾HE染色组织病理改变，探讨其对肝、肾组织的亚急性毒性。结果显示，鱼金注射液低剂量组、鱼金注射液高剂量组血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr水平，肝脏指数、肾脏指数及肝肾组织病理改变与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)，表明连续较长时间(5周)应用大剂量鱼金注射液(临床等效剂量的50、100倍)无显著肝肾毒性，其安全性较佳。本研究部分填补了鱼金注射液药理毒理内容，为其在临床上的推广运用提供了理论基础。