气相色谱法测定紫雪散中麝香酮的含量

1.广西壮族自治区梧州市食品药品检验所中药室，广西 梧州 543001； 2.广西壮族自治区妇幼保健院中药房，广西 南宁 530003

紫雪散收载于2015年版中国药典一部，是由石膏、北寒水石、滑石、磁石、玄叁、木香、沉香、升麻、甘草、丁香、芒硝(制)、硝石(精制)、水牛角浓缩粉、羚羊角、人工麝香、朱砂等药材组成的复方制剂，具有清热开窍、止痉安神的功能。由于麝资源的不足，远远不能满足许多名贵中成药(包括急救药)的生产及临床用药，现国家规定处方中麝香以人工麝香等量替代使用[1]，本处方中的人工麝香芳香以开心窍，三药配伍，清热开窍熄风，为佐使药[2]。人工麝香具有降压、抗缺氧、抗缺血、抗炎等药理作用，临床用于高血压、急性脑缺血损伤及中风急性期的治疗[3]，常用于配制化妆品，亦在香精料、医药工业上使用[4]。麝香酮在紫雪散中的含量紧紧关联着药物的质量和药物的有效性，目前对中成药中的麝香酮含量测定已有相关报道[5-7]，但尚未见有对紫雪散中麝香酮的含量测定方法进行报道，而在中国药典中有用气相色谱法对紫雪散中麝香酮成分进行鉴别，供试品提取方法为索氏提取，以供试品色谱峰应呈现出与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰而鉴别出紫雪散中含有麝香酮[8]，但并没有对其含量进行明确的规定，因此建立紫雪散中麝香酮的含量测定方法对控制该药的质量和保证其临床用药的有效性、安全性有着重要的意义。麝香酮的含量测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、薄层扫描法和比色法[9-11]，已有文献使用GC-MS法测定麝香酮含量[12-14]，因麝香酮在大多数的中成药中的含量极低，干扰成分多，气相色谱法灵敏度和分离效率高，适用于含量低的样品测定[9]。本文采用气相色谱法，以麝香酮为对照品对紫雪散中麝香酮含量进行测定，该方法准确、简单、便捷，可以用于控制紫雪散中人工麝香的麝香酮含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 气相色谱仪GC-2010(配备火焰离子化检测器FID，日本岛津公司)；GR-202电子分析天平(梅特勒-托利多公司)；KM-1990QFY智能型液晶数控型超声波清洗机(威固特新型设备有限公司)。

1.2 试药 麝香酮对照品(批号：110719-20121，中国药品生物制品检定所)，紫雪散样品(批号：150803、141202、140903，分别由3个不同制药公司提供，方法学采用批号为150803)；乙酸乙酯(分析纯)。

2方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：聚乙二醇(ZB-Wax)毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,涂层厚0.25 μm)；进样口温度：250℃；色谱柱温度180℃；FLD检测器；检测器温度250℃；分流比10∶ 1；进样量1 μL。

2.2 样品的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取麝香酮对照品适量，加入乙酸乙酯配制成0.02 g·L-1的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品约1 g，精密称定，置具塞锥形杯中，精密加入乙酸乙酯10 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取人工麝香外根据处方量及其工艺制得的样品约5 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液，即得。

取对照品溶液，阴性样品溶液和样品溶液分别进样，记录色谱图，见图1～3。结果表明，样品中缺麝香酮以外的成分对含量测定无干扰，保留时间8.694 min，理论塔板数均不低于5000。

2.3 线性关系考察 取麝香酮对照品0.4709 g/L，然后分别精密吸取该溶液0.2、0.5、1、2、5 mL置25 mL容量瓶中，加入乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，并依照上述方法测定，结果详见图4。以浓度(mg/L)为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归处理，求得回归方程：Y= 1639.2X-69.329，r= 0.9993。麝香酮在3.767～94.180 ng范围内呈良好的线性关系。

2.4 稳定性试验 供试品(批号：150803)，按2.2.2项下的供试品制备方法制备供试品溶液。以1 μL为进样量，测定样品中麝香酮的峰面积。然后放置0、2、4、6、10 h后按上述色谱条件进行分析，结果RSD为0.42%。试验表明，在24 h内被测物稳定。

2.5 重复性试验 取相同批号的样品(批号：150803)，共6份，按2.2.2项下的提取方法提取供试品溶液，进样量为1 μL，按样品含量测定方法测定，结果测得样品中麝香酮的含量为0.1082 mg/g，RSD为2.77%。试验表明本方法重复性良好。

2.6 精密度试验 以2.3项下对照品溶液，按上述相同色谱条件连续测定6次，所得平均峰面积为28800.23，RSD=0.46%，试验表明本方法的精密度较好。

2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量样品(批号：150803，麝香酮含量为0.1082 mg/g)0.5 g，共取6份，置具塞锥形瓶中，精密加入麝香酮对照品溶液适量，按样品含量测定方法测定，计算回收率.结果麝香酮的的平均回收率(n=6)为101.11%;RSD为2.11%，详见表1。

表1 加样回收率结果 (n=6)

2.8 样品测定 取3个不同厂家的紫雪散共3批，按正文含量测定项下的方法制得供试品溶液，测定麝香酮的含量，结果3批含量分别为(0.118±0.002)mg/g、(0.066±0.001)mg/g、(0.075±0.001 )mg/g。详见表2。

表2 含量测定结果 (n=3)

3 讨论

根据麝香酮的极性,参考相关的文献[15-22]，本文提取溶剂分别考察了无水乙醇、乙酸乙酯、环己烷、甲醇等有机溶剂对样品进行提取，结果分析表明，用乙酸乙酯作为提取溶剂，杂质干扰较小，而其余均存在不同程度的干扰，容易影响测定结果，所以选用乙酸乙酯作为提取溶剂。对常用的3种提取方法浸渍、超声、回流进行考察，3种方法分别为：超声30 min、浸渍4 h、回流1 h，超声30 min与浸渍4 h提取效果基本相同，而回流提取样品麝香酮的含量降低，分析原因在于麝香酮有挥发性，回流过程中较高温度使麝香酮的含量在提取过程中有所减失，故排除回流作为提取方法。所以，在提取时间和提取方法的简便性上综合比较，选用超声30 min作为提取方法。对提取方法为超声时长进行了考察，结果超声30 min能够达到满意的效果。

目前人工麝香的质量控制指标尚未得到全面的控制以及采用，所以在制备紫雪散时选用与购买的人工麝香的质量会有所差别，而这个差别也是影响麝香酮在该药中含量的原因之一，但人工麝香配方工艺严格保密[23]，其质量标准也未见有相关的报道，所以在原料药人工麝香的选取上也会对紫雪散中麝香酮的含量造成影响。本文通过对麝香酮的含量测定研究结果可发现，目前市面上的紫雪散，相同厂家，不同批号测定出的麝香酮的含量也有所不同，分析其原因可能为本文中检测的紫雪散生产年份不同，即生产的时间上有所区别，而麝香酮在放置环境与储存时间的长短也会影响麝香酮在紫雪散中的含量[24-25]; 人工麝香的质量控制指标尚未得到全面的控制以及采用，所以在制备紫雪散时选用与购买的人工麝香的质量会有所差别，而这个差别也是影响麝香酮在该药中含量的原因之一。因此本文建立紫雪散中麝香酮的含量测定方法有着重要的作用，本文采用气相色谱法进行测定，该方法具有操作简便、迅速、准确、干扰少、精密度与重复性较好等优点，可用来测定紫雪散中麝香酮的含量。