发酵液中正己醇含量的检测方法

2019-05-05 08:16廖勤俭周韩玲安明哲李杨华
酿酒科技 2019年4期
关键词:浓香型二氯甲烷中正

郭 艳,廖勤俭,王 芳,周韩玲,安明哲,李杨华

(四川宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007)

正己醇是浓香型白酒中一种微量成分物质,俗称“杂醇油”,具有强烈的、特殊的刺激性气味。窖池中酒醅的发酵,形成了浓香型白酒与众不同的成分构成和风味特征[1],各种微量成分物质对白酒的风格形成和风格典型性起着至关重要的作用[2]。当白酒中正己醇含量超出一定范围时,白酒会呈现出一种令人不悦的滋味,对人体有一定的毒害作用[3]。研究人员有对杂醇油进行过相关研究,但是专门针对正己醇的研究却鲜有报道。本实验研究了一种检测发酵液中正己醇的检测方法,可以通过气相色谱快速检测出发酵液中正己醇的含量,对探究白酒中正己醇的产生机理具有十分重要的意义。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

原料:窖泥、黄水,取自某浓香型酒厂。

试剂:葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、无机盐、碳酸钠等。

培养基:细菌完全培养基。

正己醇标准品的配制:准确称取色谱级正己醇,以无水乙醇配制成100 mL浓度为10 g/L的标准储备液,放置于4℃冰箱中冷藏,备用。

仪器设备:美国Agilent公司6890气相色谱,FID检测器。

1.2 试验方法

1.2.1 发酵液培养方法

配制200 mL细菌完全培养基于500 mL三角瓶中,称取适量底层窖泥加入其中,将三角瓶置于30℃恒温培养箱中培养4 d。待菌液培养成熟后,将种子培养液如此重复培养3次,即为己醇发酵液。

图1 正己醇标样图谱

1.2.2 色谱条件

色谱柱条件:色谱柱:HP-INNOWax Agilent30×0.25×0.25;进样口温度250℃;检测器(氢焰离子化检测器)温度250℃;柱流速:恒流1.0 mL/min;分流模式:20∶1;进样量:1 μL;柱温程序升温:(HP-INNOWax Agilent)40 ℃(保持7 min),以7 ℃/min升温至100℃(保持2 min),再以30℃/min升温至180 ℃(保持1 min)。

1.2.3 样品前处理

取发酵液5 mL于20 mL离心管中,加入5 mL萃取剂进行萃取,振荡15 min后再静置15 min,然后于离心机中以5000 r/min离心5 min,下层萃取液经过0.2 μm的膜过滤后,待测。

1.2.4 萃取剂的选择

取5支20 mL的离心管,向每支试管中加入5 mL空白培养基和10 μL的10 g/L正己醇标准溶液,再分别加入5 mL二氯甲烷、正己烷、甲苯、石油醚,振荡过滤后待测。

2 结果与分析

2.1 标样的检测及样品萃取剂的确定

取10 g/L的标准储备液,用无水乙醇稀释至200 mg/L进行定性检测,标准品的气相色谱图见图1。己醇的出峰时间在15.845 min左右。

用不同萃取剂萃取后的检测结果见表1。由于二氯甲烷萃取后的正己醇测定值最高,说明二氯甲烷对正己醇的萃取效果最好,所以选择二氯甲烷为发酵液的萃取剂。

表1 不同萃取剂检测结果

2.2 标准曲线及线性范围

取10 g/L的正己醇标准溶液,用60%vol乙醇稀释至20mg/L、60mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、300 mg/L共6个梯度制作定量标准曲线。以峰面积Y为纵坐标,以质量浓度(mg/L)为X横坐标进行线性回归,结果见图2。结果表明,化合物线性关系良好,回归方程为y=0.2511x+0.0448,R2值为0.9999,满足分析要求。根据3倍信噪比计算出化合物的定量检出限为2.5 mg/L。

图2 正己醇标准曲线图

2.3 精密度实验

用上述试验方法对同一样品测定6次,得到的正己醇发酵液经前处理后的待测样品中正己醇含量的检测结果见表2,6次平行结果的相对偏差(RSD)为0.92%,满足分析要求。

2.4 加标回收率实验

表2 精密度实验结果(n=6)

取同一三角瓶中的发酵液4份,其中1份作为空白本底值,另外3份分别加入已知量的标准溶液,把4份处理后的样品进行样品前处理,再按上述实验方法检测后进行回收率的计算。表3中数据为处理后样品及加标处理后样品的测定值。实验结果表明,发酵液中正己醇的回收率为97.27%~103.72%,满足分析要求。

表3 回收率实验结果

3 结论

该方法能快速准确地分析发酵液中的正己醇含量。发酵液样品只需要简单的萃取就能进样分析,R2值、检测的精密度、加标回收率等各项指标均达到分析要求。

该方法还可以检测浓香型白酒酿造副产物黄水中的正己醇,对研究黄水的综合利用有重要意义。

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