乳腺癌细胞中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达的相关性及其临床价值探讨

张颖 雷洁 许静

乳腺癌是女性发生率较高的恶性肿瘤之一，近年其发生率呈直线上升趋势，给女性的身心健康带来了很大影响[1]。临床上近年研究的热点问题为乳腺癌的转移、侵袭分子调控机制。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）是近年临床上新发现的缺氧应答调控因子，它在人体以及哺乳动物体内广泛存在，在维持全身氧稳态、细胞稳定性方面发挥了非常重要的作用，是促使肿瘤发生的中间站，具有耐药、抗凋亡、细胞增殖、无氧糖酵解、促使肿瘤血管生成的作用，在缺氧诱导基因中有一定的调控作用，HIF-1α含量升高是癌症的不良预后因素[2]。生存素（inhibitor of apoptosis protein，Survivin）是凋亡抑制蛋白（IAPs）的一种，是近几年临床上新发现的凋亡因子，它具有抑制细胞凋亡、细胞分裂分化作用，在促进乳腺癌的发生、肿瘤内部血管生成方面发挥关键性作用[3]。在很多恶性肿瘤中HIF-1α、Survivin都存在过表达的情况，它们与肿瘤的发生紧密相关[4]。我院在乳腺癌细胞中HIF-1α与Survivin表达的相关性研究期间，发现HIF-1α与Survivin在乳腺癌的发生过程中存在很大联系，通过检测HIF-1α与Survivin的表达水平可以判断患者的病情发展程度，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2017年5月～2018年8月收治的乳腺导管内增生病变及乳腺癌患者130例，对所有患者的HIF-1α、Survivin含量进行检测。纳入标准：①所有患者均符合乳腺导管内增生病变及乳腺癌相关诊断标准[5，6]，且通过检查确诊为乳腺导管内增生病变、乳腺癌；②临床资料完整者；③随访资料完整者；④所有患者均知晓同意此次研究。排除标准：①合并有其他肿瘤者；②临床资料不完整者；③随访资料不完整者；④精神异常者。130例患者，年龄 23～78 岁，平均（50.3±3.1）岁；其中肿瘤直径≤2.0cm者49例，2.0～5.0cm者56例，＞5.0cm者25例；组织学：Ⅰ级24例，Ⅱ级67例，Ⅲ级39例；其中远处转移18例，＞3个淋巴结转移35例，1～3个淋巴结转移27例，腋窝淋巴结无转移50例；分期：Ⅰ期25例，Ⅱ期41例，Ⅲ期23例，Ⅳ期41例；其中乳腺普通导管增生（UDH）27例，乳腺非典型导管增生（ADH）29例，乳腺导管原位癌（DCIS）35例，浸润性乳腺癌（IDC）39例。所有患者一般资料存在可比性（P＞0.05），研究获得了我院伦理委员会审核与批准。

1.2 方法HIF-1α、Survivin含量检测：所应用的试剂由福州迈新生物公司提供，应用免疫组织化学（Ultra Sensitive TMS-P）法对 DAB 进行显色，试剂盒为S-P，对常规的3～4μm切片进行脱蜡、水化，应用3%的双氧水对其进行处理，修复EDTA[7]。设置阳性、阴性对照组，阳性对照：已知的阳性切片，阴性对照：PBS代替一抗。后应用高倍镜观察，对结果进行判定，0分：阳性细胞数不超过5%；1分：阳性细胞数在6%～25%；2分：阳性细胞数在26%～50%；3分：阳性细胞数在51%～75%；4分：阳性细胞数超过75%。阳性强度判断，1分：黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色；根据上述阳性细胞数分数以及阳性强度判定分数之和来判定阳性，两者相加总分≥4分为阳性[8]。

1.3 观察指标①分析HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌不同组织中的表达情况。②分析HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的表达情况与临床病理之间的关系。③分析HIF-1α与Survivin的表达相关性。

1.4 统计学方法数据应用SPSS 18.0进行分析，其中计数资料行χ2检验，计量资料行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌不同组织中的表达情况HIF-1α、Survivin在乳腺浸润性癌中的阳性表达率高于其他组织（P＜0.05），见表1。

2.2 HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的表达情况与临床病理之间的关系HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的表达情况与患者的年龄、肿瘤大小无明显关系（P＞0.05），肿瘤发生远处转移、淋巴结转移、组织学级别越高、肿瘤分期越高者HIF-1α、Survivin阳性率越高（P＜0.05），见表2。

2.3 HIF-1α与Survivin表达相关性分析在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中，HIF-1α与Survivin的表达呈正相关（P＜0.05），见表3。

表1 HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌不同组织中的表达情况[n（%）]

表2 HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的表达情况与临床病理之间的关系（例）

表3 HIF-1α与Survivin表达相关性

3 讨论

乳腺癌是临床上常见的女性恶性肿瘤之一，与其他国家相比，我国的乳腺癌发生率近年呈直线上升趋势，且偏向于年轻化[9，10]。实体肿瘤中最常见的为缺氧，HIF-1α主要是肿瘤在缺氧条件下分泌而来，其表达情况可以反映肿瘤瞬间缺氧状况[11]。肿瘤细胞发生缺氧后会刺激HIF-1α的表达，另外，肿瘤细胞中的某些抑癌基因、癌基因会被激活而促使HIF-1α的分泌，提高HIF-1α的水平[12]。HIF-1α被激活后可以对多种下游基因进行调节，进而会促使血管生成因子的增长繁殖，加快肿瘤发展。HIF-1α在乳腺癌发生、发展过程中也是过表达，过度表达对预后不利。生长素（Survivin）是临床上近几年发现的具有较强凋亡抑制作用的因子，在多种恶性肿瘤中它的表达水平比较异常，其作用是促进细胞分裂、生长、抑制细胞凋亡等[13]。

抑癌基因失去活性、癌基因被激活等都会使HIF-1α的水平显著增高，使活性显著增强。HIF-1α在缺氧诱导基因发挥作用的过程中起着非常重要的作用，HIF-1α可以对多种下游靶基因的转录活性进行调控。近几年临床上对HIF-1α与乳腺癌之间的关系进行了研究，发现在乳腺癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌中HIF-1α阳性表达率较高，在很多癌前病变中也有一定的表达，但是在良性肿瘤中没有HIF-1α的表达[14]。通过对乳腺癌患者的组织进行免疫组织化学实验，可以观察患者不同组织处HIF-1α、Survivin的表达情况。研究显示，HIF-1α、Survivin在乳腺浸润性癌中的阳性表达率高于其他组织（P＜0.05），随着乳腺癌组织的恶化程度，HIF-1α、Survivin的表达情况也发生着变化，恶化程度越高，HIF-1α、Survivin含量就越高。因此，可以通过检测患者体内的HIF-1α、Survivin含量来判断患者的病情变化。

乳腺癌对广大女性的身心健康造成了很大影响，因此，尽早进行诊断、实施治疗对于改善患者预后非常重要。HIF-1主要是机体为了适应缺氧应激而分泌的因子，有α和β两种形式，都是通过核转位进入细胞核，活性主要由HIF-1α因子的稳定性与表达水平决定[15，16]。肿瘤在进行生长、发展期间，HIF-1α因子会与其他的缺氧因子比如促红细胞生成素（EPO）、血管内皮生长因子（VEGF）等结合来促使肿瘤血管的生成，HIF-1α因子会与其他的缺氧因子结合，加快肿瘤的生长与发展进程。HIF-1α含量与乳腺癌患者的雌激素水平之间存在一定的联系，患者的雌激素水平越高，说明分子分型较好，治疗后的效果也更好[17]。因此检测乳腺癌患者的HIF-1α含量，有利于判断患者预后、肿瘤转移、侵袭情况、肿瘤生长发展状况等。另外，HIF-1α还可以激活乳腺癌耐药蛋白（BRCP）基因的活性，使它在乳腺癌耐药过程中发挥一定的作用。Survivin是一种IAPs家族的因子，它的作用是调节细胞分裂、抑制细胞凋亡，其抑制细胞凋亡的作用非常强。另外，Survivin可以使肿瘤细胞失去凋亡监测点的束缚，会使细胞发生异常生长与分裂，进而使癌细胞加快生长繁殖进程；同时，Survivin可以促进淋巴管、肿瘤血管的生产，降低放化疗对肿瘤细胞的促凋亡作用。Survivin主要在胎儿生长发育过程中表达，在健康人体中的非增殖细胞内不会表达。研究显示，HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的表达情况与患者的年龄、肿瘤大小无明显关系（P＞0.05），肿瘤发生远处转移、淋巴结转移、组织学分级高其表达阳性率较高（P＜0.05），这就说明，HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中的高表达可能与乳腺癌发生远处转移密切相关，因此，HIF-1α、Survivin在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中过度表达会促进肿瘤细胞的生长繁殖，它们在促进肿瘤发展进程中起到了关键性作用。另外，细胞核中Survivin的表达水平可以反映乳腺导管内增生病变及乳腺癌患者的总生存期，当细胞核中Survivin的表达水平与胞质中Survivin的表达水平比例超过5时，乳腺导管内增生病变及乳腺癌患者的总生存期较高，细胞核中Survivin的表达水平与胞质中Survivin的表达水平比例与患者的原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER-2）阴性率、雌激素受体阳性率呈正相关[18]，这就说明，细胞核中Survivin的表达水平与胞质中Survivin的表达水平比例越高，患者的原癌基因人类表皮生长因子受体2的阴性率就越高，雌激素受体阳性率就越高，这对患者的预后有积极的改善作用。

研究显示，在乳腺导管内增生病变及乳腺癌中，HIF-1α与Survivin的表达呈正相关（P＜0.05），这说明，降低乳腺导管内增生病变及乳腺癌患者的HIF-1α表达水平，有利于降低Survivin表达水平，这利于改善患者预后。同时，在乳腺癌发生发展期间，HIF-1α与Survivin会相互协同发生作用，因此，尽早对患者进行检查、诊断、治疗，更有利于提高患者的生存质量。在恶性肿瘤发生、发展过程中，最少会有2个基因被异常激活，从而才可以有效地促进肿瘤生长、诱导肿瘤转移和侵袭等。

此次研究的不足：样本量较小，所得到的结果可能存在一定的局限性，在今后的工作中，会不断进行深入的研究与分析，以便对本次结果进行证实。

综上所述，乳腺癌细胞中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达呈正相关，可以通过HIF-1α、Survivin在乳腺癌中的表达情况来判断患者的病情进展，进而有利于为临床治疗提供一定的依据，有较高的临床价值。