人乳头瘤病毒感染与阴道微生态环境的相关性研究

涂 梅

广西壮族自治区容县妇幼保健院保健部，广西容县 537500

人乳头瘤病毒（HPV）根据亚型致病力大小或者致癌危险性不同分为低危型，高危型两类，高危型可引起生殖器疣病外，还会引起外生殖器癌，子宫颈癌和高度宫颈上皮内瘤变[1]。阴道pH值、过氧化氢以及白细胞酯酶等是主要的反应乳酸杆菌功能的指标。有研究显示[2]，性活跃女性中，细菌性阴道病与高危型HPV感染有共生关系，常同时发生。而细菌性阴道病患者引导乳酸杆菌显著减少或者消失，乳酸杆菌导致宫颈黏膜屏障被破坏，过氧化氢水平下降，增加HPV持续感染的风险[3]。有研究显示[4]阴道滴虫感染增加HPV感染后促进宫颈上皮内瘤变的发生，对后者诱发子宫颈癌有协同作用。因此，研究阴道的微生态环境与HPV感染的相关性研究对于预防HPV感染有一定的临床指导作用。本研究选择2016年6月～2017年5月在我院妇科门诊妇科检查的患者486例为研究对象。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年6月～2017年5月在我院妇科门诊妇科检查的患者486例为研究对象。纳入标准：非妊娠期及哺乳期，月经周期规律，无阴道出血，无其他系统严重疾病，3d内无阴道冲洗治疗及其他阴道操作史，3d内无性生活史，1个月内无服用任何药物，1年内宫颈细胞学检查无异常，对本次研究知情同意。排除标准：不符合上述纳入标准，合并有其他系统疾病，无性生活史，不同意参加本次研究。本研究经过医院医学伦理委员会同意。根据HPV检测结果分为HPV阳性组101例与HPV阴性组385例。阳性组年龄（36.1±5.9）岁，月经周期（28.8±4.2）d，初孕年龄（24.1±4.9）岁，孕次（2.9±1.0）次，产次（1.8±0.5）次，性生活频率（4.1±1.5）次 /月；阴性组（37.0±6.3）岁，月经周期（29.1±4.6）d，初孕年龄（24.6±7.1）岁，孕次（2.7±1.1）次，产次（1.9±0.6）次，性生活频率（4.2±1.2）次/月。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经过医院医学伦理委员会同意。

1.2 方法

采集阴道及宫颈分泌物标本，分别进行宫颈液基细胞学检测，高危型HPV感染检测，阴道环境进行判断等。宫颈液基细胞学检测采用液基波层制片进行检测，用特制的细胞刷，刷取宫颈细胞，收集在保存瓶内，离心，弃除杂质，将细胞转移在特制的玻片上，染色后，制作为优质涂片，在显微镜下进行观察；参考2001年修订的TBS分类标准进行分类：（1）鳞状上皮细胞：非典型鳞状上皮细胞，低度鳞状上皮内病变，高度鳞状上皮内病变，鳞癌；（2）腺上皮细胞：非典型腺上皮细胞，倾向于肿瘤的不典型腺细胞，颈管原位癌，腺癌。高危型HPV感染检测，采用HC2技术进行检测（德国凯杰DH系列，采用高危型HPV-DNA试剂盒），为直接核酸检测，对宫颈粘液脱落细胞溶解细胞，解链，变性核算，释放HPV DNA单链，全长病毒RNA探针与HPV病毒靶DNA结合，形成RNA：DNA复合物，复合物被包被在微孔板上的抗体捕获，一抗特异性结合RNA：DNA复合物，二抗结合捕获后的复合物，二抗偶联有碱性磷酸酶，加入碱性磷酸酶底物，产生化学发光信号，采用仪器，读取发光信号，判断标准：RLU/CO＞1.0pg/mL为阳性，共检测15种高危型HPV。阴道环境进行判断：收集阴道壁分泌物检测乳酸杆菌、念珠菌、滴虫、BV等，并判断清洁度。

1.3 检测指标

根据患者HPV检测结果分为HPV阳性组与HPV阴性组，比较两组阴道念珠菌、滴虫、BV的检测结果，比较两组乳酸菌缺乏、过氧化氢缺乏、白细胞酯酶阳性发生率。比较两组混合型阴道炎、细菌性阴道病发生率。细菌微生态改变对高危型HPV感染的影响采用多因素Logistic回归分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验、校正χ2检验或Fisher精确概率法，计量资料采用（±s）表示，采用 t检验，影响分析采用多因素Logistic回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV检测结果

486例患者101例HPV阳性，感染率为20.78%。

2.2 两组阴道炎发病率比较

HPV阳性组细菌性阴道病、外因阴道假丝酵母菌病的发生率分别为9.9%，19.8%，显著高于HPV阴性组的3.6%与7.3%，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组滴虫阴道炎发生率、混合型阴道炎、细菌性阴道病+滴虫阴道炎、细菌性阴道病+外因阴道假丝酵母菌病、细菌性阴道病+滴虫阴道炎+外因阴道假丝酵母菌病比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 1～2。

表1 两组阴道炎发病率比较

表2 两组混合型阴道炎比较[n（%）]

2.3 两组阴道乳酸菌、过氧化氢、白细胞酯酶、阴道微生态检测结果比较

HPV阳性组乳酸杆菌量少或无、H2O2缺乏的发生率（68.3%，39.4%）显著高于HPV阴性组（39.5%，19.7%），差异有统计学意义（P＜ 0.05）。两组白细胞酯酶阳性率（1.0% vs 1.6%）、阴道微生态正常率（13.5% vs 20.0%）比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 两组阴道乳酸菌水平、过氧化氢缺乏、白细胞酯酶阳性、阴道微生态正常率比较[n（%）]

2.4 阴道微生态改变对HPV感染的影响分析

乳酸杆菌量少或者缺乏、细菌性阴道病是高危型HPV感染的独立危险因素（OR=4.474，3.935，P＜0.05）。见表4。

表4 阴道微生态改变对HPV感染的影响分析

3 讨论

大约10%～30%的成人感染HPV，而性生活活跃人群甚至更高，达到50%～80%，好发年龄段是20～29岁。感染HPV后，部分患者持续感染高危型HPV，发生宫颈上皮内瘤样病变，经过10～15年，发展为早期宫颈癌，进而发展为晚期宫颈癌[5]。高危型HPV是引起宫颈癌的主要病因，99%的宫颈癌HPV阳性，其中HPV16、HPV18占到大约70%。HPV感染是引起宫颈癌的必要条件，但HPV-DNA的拷贝数并不与疾病进展直接相关，只有持续的高危型HPV感染才会增加宫颈癌的风险[6]。目前HPV监测是宫颈癌的初筛方法，作为对细胞学记过不明确女性分流、追踪方法，是对宫颈病变治疗后的复查及追踪方法，是宫颈上皮内瘤变样病变风险的指标[7]。

阴道微生态系统是人体四大生态系统中较为复杂的系统，对预防微生物入侵具有重要的作用。乳酸杆菌是阴道微生态环境中的优势菌，其产生乳酸，降低局部pH值，抑制其他细菌的感染，其还有竞争粘附作用，能产生H2O2，发挥杀死其他细菌的作用，维持微生态的平衡[8]。阴道乳酸杆菌检出率降低增加患者阴道炎症的风险。在本次研究中，HPV感染患者阴道乳酸杆菌量少或无的发生率（9.9%，19.8%）显著高于HPV阴性的患者，并且在影响因素分析中也显示其是HPV感染的独立危险因素。周丹等[9]研究显示HPV16/18感染患者阴道黏膜乳酸杆菌的定植密度为104（68～186）个/HP，低于正常对照组234（161～326）个/HP（P＜0.05），HPV感染组阴道内卷曲乳酸杆菌、惰性乳酸杆菌、加氏乳酸杆菌明显减少（P＜0.05），认为HPV16/18感染可能与阴道黏膜乳酸杆菌减少、阴道菌群失调相关；卷曲乳酸杆菌、惰性乳酸杆菌、加氏乳酸杆菌可能在维持阴道微生态环境中起主要作用。阴道乳酸杆菌水平下降，阴道内pH值升高，产生的股氧化氢以及抗微生物因子减少，对其他病原菌的入侵的抑制作用下降，增加HPV感染的风险。在本次研究中，HPV感染的患者H2O2缺乏率（39.4%）升高，但在多因素分析中排除了该因素，考虑H2O2缺乏与乳酸杆菌水平下降关联。

细菌性阴道炎的发生与乳酸杆菌减少密切相关，乳酸杆菌水平下降，粘蛋白降解菌增加，宫颈黏膜屏障破坏，H2O2数量减少，影响细胞因子产生，增加了高危型HPV的感染风险，这也是持续HPV感染的因素之一[10-13]。滴虫性阴道炎是阴道毛滴虫感染，有研究认为滴虫性阴道炎能够协同HPV促进宫颈上皮内瘤变以及子宫颈癌的发生，但是不增加高危型HPV感染的风险。在本次研究中，HPV感染患者与阴性患者滴虫性阴道炎的发生率没有显著差异。外因阴道假丝酵母菌病即霉菌性阴道炎，其中白色念珠菌是主要的感染菌。阴道假丝酵母菌患者阴道乳酸杆菌数量下降，H2O2水平下降。假丝酵母菌感染后导致乳酸杆菌下降，增加其他细菌感染的风险[14-16]。在本次研究中HPV阳性组外因阴道假丝酵母菌阴道炎的发生率更高，但是在多因素分析中该因素被排除。混合性阴道炎是2种及以上病原体感染导致的阴道炎，而细菌性阴道病在混合性阴道炎中最常见。在本次研究中HPV阳性患者与阴性患者混合型阴道炎的发生率无显著差异，也可能是与纳入的样本数较少有关，期望今后能增加样本量进一步研究。

综上所述，高危型HPV感染与阴道微生态具有密切的关系，尤其细菌性阴道病、乳酸杆菌量少或缺乏等，明显增加高危型HPV感染的风险。