1350例眼结膜囊分泌物病原菌及耐药性分析

赵荣超 ，李洁平 ，赵岩 ，郭长城

(郑州市第二人民医院检验科，河南 郑州 450000；黄河水利委员会黄河中心医院检验科，河南 郑州 450003)

结膜炎为眼科常见疾病之一，是结膜组织在外界和机体自身因素的作用下而发生的炎症反应的统称[1]。该病最为常见的致病原因是微生物感染[2]，包括细菌、病毒、衣原体、真菌、寄生虫以及立克次体等。结膜炎一般对视力影响不大，但若未及时对症治疗，致使炎症范围扩大波及角膜引起并发症时，可导致严重的视力损害，因此，鉴别病原菌种类及耐药性对临床治疗具有正面作用。本文通过对1350例眼结膜囊分泌物进行病原菌分离和鉴定，探究其分布状况及耐药性，为临床提供抗生素用药依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年5月到2017年5月我院收治的细菌性结膜囊炎患者1350例，纳入标准：①符合细菌性结膜囊炎诊断标准；②起病急促，具有脓性分泌物增多，眼睑肿胀、充血等表现；排除标准：①先天性泪囊和泪道发育异常；②临床资料不全者。研究对象中男621例，女729例；年龄 4～82 岁，平均年龄为(44.13±8.88)岁。

1.2 仪器与试剂 采用梅里埃VITEKICompact全自动细菌鉴定及药敏测试仪，并配套使用GP和GN 鉴定卡，AST－GP67、AST－GP68 及 AST－GN09药敏卡。实验中所用质控菌株有金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922，均由南京都莱生物技术有限公司提供。

1.3 方法 将无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后在患者眼睑膜囊处旋转蘸取结膜囊分泌物，在肉汤培养基中进行増菌，35℃培养24h后转种于血平板、巧克力培养基、麦康凯琼脂平板以及SS琼脂平板，进行分离纯化鉴定。操作过程严格按照第四版《全国临床检验操作规程》[3]中的相关规定和说明进行。将分离纯化的待测菌株在RST－01B自动细菌鉴定及药敏测试仪上使用GP和GN鉴定卡作革兰阴性菌和革兰阳性菌的鉴定，使用ASTGP67、AST－GP68 及 AST－GN09 药敏卡进行药敏实验，执行CLSI2016标准[4]。

1.4 统计学方法 利用 SPSS 21.0软件包进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，计数资料以百分率(%)表示，分别采用t检验和χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

1350例标本中共检出1161株致病菌，阳性检出率为86.00%，其中表皮葡萄球菌(491例)、金黄色葡萄球菌(157例)、铜绿假单胞菌(108例)、肺炎链球菌(105例)及溶血葡萄球菌(88例)是总体分离率在前五的菌株，其分离率依次为 36.37%、11.63%、8.00%、8.00%、7.78%。其中革兰阴性菌 284 例，所占构成比为24.46%(284/1161)，革兰阳性菌877例，所占构成比为75.54%(877/1161)，另检出了51例真菌。分别选取分离率在前五的革兰阴性菌和革兰阳性菌，对其耐药性进行分析，见表1和表2。

表1 284例革兰阴性菌构成及耐药率[n(%)]

表2 877例革兰阳性菌构成及耐药率[n(%)]

3 讨论

结膜炎是一种常见的眼部疾病，若按病因分类可分为细菌性、真菌性、病毒性和变态反应性，其中最常见的是细菌性结膜炎。该疾病可导致结膜及角膜组织破坏，引起视力损伤[5]，严重者可导致失明，故及时有效的对症治疗在疾病转归中具有重要作用。细菌性结膜炎常采用抗生素治疗，若药物使用不当可引起病原菌耐药性，增加治疗难度，影响疾病预后，故明确引起疾病的致病菌种类，了解其耐药性，对临床用药具有指导意义。

本研究对1350例结膜囊分泌物进行细菌学培养，共分离出1161例病原菌，阳性检出率为86.00%(1161/1350)，与范宁[6]等人的研究结果相似。分离出的革兰阴性菌为24.46%(284/1161)，革兰阳性菌为75.54%(877/1161)，提示该病致病菌以革兰阳性菌为主。总体分离率在前五的病原菌依次为表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌及溶血葡萄球菌。其中表皮葡萄球菌构成比为36.37%，结果与多篇文献报道一致[7，8]，究其原因有学者认为与表皮葡萄球菌是皮肤表面正常菌群，可在取样过程中污染标本有关[9]。除此之外，有5例致病菌检出为真菌，提示临床医生，在常规抗生素疗效不佳时应考虑真菌感染。细菌性结膜炎病原菌，亦可是嗜麦芽假单胞菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等，表明细菌性结膜炎病原菌在分布上存在一定的地域差异。有研究发现[10]，表皮葡萄球菌可利用自身的生物膜特性吸附于人工晶体、隐形眼镜等高分子聚合物之上，故在进行人工晶体置换、角膜移植等操作前应进行充分的抗菌药物预处理，做好隐形眼镜的养护和存放，预防眼内定值菌群条件性感染。

对分离率在前五的革兰阴性菌和革兰阳性菌耐药试验发现，铜绿假单胞菌耐药率最高，肺炎克雷伯菌耐药率最低，但均对环丙沙星、苯唑西林、氨苄西林有较高耐药率，可能由于上述各药物是常见的抗感染眼药水成分，使用频率较高的原因。该类细菌耐药性的产生机制是由于质粒介导产生了内酰胺酶[11]，导致细菌对抗生素抵抗能力增加，从而形成耐药性。表2结果显示，金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药的检出率高达98.63%，表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、产气葡萄菌耐苯唑西林检出率依次为75.34%、68.72%、53.44%，且对氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、环丙沙星、头孢哌酮、头孢他啶等药物具有多重耐药性。万古霉素、莫西沙星、利奈唑胺等药物对葡萄球菌有良好疗效，耐药率均为0%，可作为治疗用药的首选药物。