N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 在甲状腺癌中的表达及其意义研究

逵艳，陈润东

(南阳市中心医院肝胆普外科，河南 南阳473000)

甲状腺癌属于临床上最为常见的内分泌系统恶性肿瘤，其往往以颈前无症状性肿块或结节为主要临床表现，部分患者存在颈部压迫感、持久性咳嗽、呼吸困难或吞咽困难，少数病情严重患者则伴有不同程度的声音变化、声带瘫痪、进水呛咳、咯血、肿块快速增大、单侧或双侧颈淋巴结肿大以及疼痛等相关临床症状。大量临床研究表明，甲状腺癌广泛分布于各个年龄段，并以儿童及40岁以下女性最为多见，肿瘤生长过程较为缓慢和局限，故进一步加强对甲状腺癌的早期诊断和治疗意义重大而深远[1]。临床研究显示，预计到2019年，甲状腺癌在美国将跃居女性癌症的第三位，由此所产生的医疗支出将高达200亿美金之巨，不论是对患者本人，还是对整个家庭甚至全社会都会造成沉重的经济压力和负担[2]。已有临床研究证实，神经型钙粘附蛋白（N-cadherin）、膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）、解聚素-金属蛋白酶 17（ADAM17）在多种癌症的临床诊疗过程中具有重要参考价值[3-5]。因此，本研究以2016年1月-2017年12月期间我院所收治的甲状腺癌患者作为临床研究对象，并就 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲状腺癌患者体内的表达变化意义予以深入细致的研究和分析，现将临床研究过程和结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 对象 本研究经医院医学伦理委员会批准，选取2016年1月-2017年12月期间医院行手术治疗的103例甲状腺癌患者术后甲状腺癌组织标本为观察组，所有患者经病理确诊，其中男性71例，女性32例；年龄均处于22～68岁，病程均处于1个月～4年。另选取同期在我院行活检的65例结节性甲状腺肿病灶旁正常甲状腺组织标本为对照组，所有患者经病理证实无肿瘤细胞存在，其中男性44例，女性21例；年龄均处于23～69岁，病程均处于2个月～4年。两组患者均自愿参与研究，并签署知情同意书，且在性别、年龄及病程等一般资料方面比较，其差别均不具有统计学意义 （P＞0.05），具有组间可比性，见表1。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 鼠抗人N-cadherin单克隆抗体、鼠抗人MT1-MMP单克隆抗体、鼠抗人ADAM17单克隆抗体、SP免疫组化相关试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

表1 观察组与对照组两组患者一般资料

1.2.2 实验方法 采用免疫组织化学技术En Vision 两 步 法 分 别 检 测 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的表达并对其结果进行判定分析。实验步骤：组织切片烤片，脱蜡、水化。抗原修复，滴加一抗工作液，滴加二抗。DAB显色剂显色，复燃，脱水，中性快干胶封片。采用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 结果判定 采用盲法显微镜下阅片，N-cadherin阳性为细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒，MT1-MMP阳性为细胞质呈浅黄色直至棕褐色颗粒，MT1-MMP阳性为细胞质呈棕黄色颗粒。每张切片观察10个200倍视野，综合染色强度和阳性细胞所占比例进行判定。N-cadherin阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞率＜5%为0分，5%～24%为1分，25%～50%为 2分，＞50%为 3分；N-cadherin染色强度评分标准：不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分；上述两项评分相加则为最终评分结果：0～2分判为阴性，≥3分判为阳性。MT1-MMP阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞率＜5%为 0分，5%～24%为 1分，25%～50%为2分，＞50%为3分；MT1-MMP染色强度评分标准：不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；上述两项评分相加则为最终评分结果：0～2分判为阴性，≥3分判为阳性。ADAM17阳性细胞所占比例评分标准：无阳性细胞为0分，阳性细胞率＜30%为1分，30%～70%为2分，＞70%为3分；ADAM17染色强度评分标准：不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；上述两项评分相加则为最终评分结果：0～2分判为阴性，≥3分判为阳性。

1.3 评价指标 分别对观察组和对照组患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达情况，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系进行比较和分析。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，正态计量数据用“Mean±SD”表示，两组独立，正态，方差齐资料组间比较采用t检验；计数资料采用例数或百分比表示，样本率的比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组和对照组患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达情况 观察组患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率，明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表 2。

2.2 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系 TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率，明显高于Ⅰ～Ⅱ期，差异具有统计学意义（P＜0.05）。浸润深度中浸及浆膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率，明显高于未及浆膜，差异具有统计学意义（P＜0.05）。分化程度为低分化患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率，明显高于中、高分化，差异具有统计学意义（P＜0.05）。发生肝脏转移患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率，明显高于未发生肝脏转移，差异具有统计学意义（P＜0.05）。发生淋巴结转移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率，明显高于未发生淋巴结转移，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表 3。

3 讨论

据世界卫生组织统计，目前全球甲状腺癌的发病率呈现迅猛增长的上升态势[6]。临床上根据病理类型将甲状腺癌分为乳头状癌、滤泡状癌、髓样癌、未分化癌，而其中又以甲状腺乳头状癌最为常见，约占整个甲状腺癌患病群体的85%。据文献研究资料报道，虽然甲状腺乳头状癌生长缓慢，恶性程度低，预后较其他类型肿瘤良好，但仍存在淋巴转移、远处转移的临床特征，从而使患者的生存时间和生活质量受到极大的影响[7]。近年来，随着对甲状腺癌临床研究的不断深入，其相关癌基因的研究也随之受到重视。因此，积极探寻更具代表性的肿瘤标志物对于甲状腺癌的临床诊治及判断预后均具有十分重要的意义。

表2 观察组和对照组患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达情况

表3 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系

N-cadherin作为一种介导细胞间黏附、迁移作用的Ca2+依赖性跨膜蛋白，其往往以参与细胞黏附、细胞凋亡、增殖和迁移、识别和信号转导机制为主要功能，并且与肿瘤细胞运动增强和转移之间存在密切关系[8]。已有研究证实，N-cadherin的异常表达则会增强肿瘤细胞的迁移侵袭能力，从而促进细胞间的相互作用，进而在肿瘤的进展及转移中发挥了重要的作用[9]。临床研究表明，肿瘤的浸润和转移往往需要蛋白水解酶的参与，而其中尤以基质金属蛋白酶家族最具代表性[10]。MT1-MMP是膜型基质金属蛋白酶家族中的重要成员，其能够通过将多种细胞外基质成分降解、促进新生血管生成等机制来影响肿瘤细胞的浸润、迁移、凋亡等过程，也被认为是膜型基质金属蛋白酶中与肿瘤浸润转移关系最为密切的酶类之一[11]。解聚素-金属蛋白酶家族是一类锚定于细胞膜表面的蛋白家族，在蛋白水解、生物活性因子释放、细胞黏附、融合、迁移及信号传递等过程中均发挥着十分重要的作用[12]。ADAM17则是解聚素-金属蛋白酶家族中的主要成员之一，广泛表达于多种类型的细胞之中[13]。大量临床研究发现，ADAM17在人类多种肿瘤中呈现高表达，充分反映了肿瘤的恶性程度，并促进了肿瘤的转移及侵袭过程[14]。

本研究通过对甲状腺癌患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达情况的观察后发现，其甲状腺癌组织 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率明显高于病灶旁正常甲状腺组织，这与杨香山等的研究报道相一致[15]，表明N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率在甲状腺癌组织中均处于较高水平，从而为甲状腺癌的临床诊断和鉴别提供重要的参考依据。本研究通过对 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达与甲状腺癌TNM分期关系的研究后发现，Ⅲ～Ⅳ期患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，这与陶文雅等的临床研究相符合[16]，说明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率在Ⅲ～Ⅳ期患者中的水平相对较高，有助于对甲状腺癌患者进行准确的TNM分期。本研究通过对 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达与甲状腺癌浸润深度关系的分析后发现，浸及浆膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率明显高于未及浆膜患者，这与李晨浩等的研究报道相一致[17]， 可见 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率在浸及浆膜患者中始终呈现高水平，从而为判断甲状腺癌患者的浸润深度发挥积极的临床指导价值。本研究通过对N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达与甲状腺癌分化程度关系的观察后发现，低分化患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率明显高于中、高分化患者，这与唐甜的临床研究相符合[18]，表明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率在低分化患者中处于高水平，能够对甲状腺癌患者的分化程度做出更为精准的判断。本研究通过对 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表达与甲状腺癌肝脏转移关系的研究后发现，发生肝脏转移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率明显高于未发生肝脏转移患者，这与呼铁民等的研究报道相一致[19]，说明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率在发生肝脏转移患者中表现出较高水平，从而为判断甲状腺癌患者是否发生肝脏转移而提供参考。本研究通过对N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表达与甲状腺癌淋巴结转移关系的分析后发现，发生淋巴结转移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的阳性表达率明显高于未发生淋巴结转移患者，这与师勇的临床研究相符合[20]，可见 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的阳性表达率在发生淋巴结转移患者中的水平相对较高，也有助于准确判断甲状腺癌患者是否发生淋巴结转移。

综 上 所 述 ，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲状腺癌的发生和发展中发挥重要作用，同时对于判断病情和预后亦具有十分重要的参考价值。