Girdin、VEGF在儿童肾母细胞瘤中的表达及意义

王利娟，张红梅，黄闪，高海丽，李慧霞

(郑州大学附属儿童医院、河南省儿童医院、郑州儿童医院血液肿瘤科，河南 郑州 450000)

儿童肾母细胞瘤是临床上多见的儿童实体细胞性肿瘤，流行病学研究显示，儿童肾母细胞瘤的发病率可达234～535/10万人左右[1]。临床上儿童肾母细胞瘤的发生，能够增加患儿的致残率或者病死率[2]，给家庭带来较为严重的经济及心理负担。生物学因素或者肿瘤相关因子的改变，能够通过影响儿童肾母细胞瘤病灶组织内细胞的生物学特征，增加早期肿瘤发生或者中晚期恶性肿瘤病情进展的风险。Girdin作为新发现的肌动蛋白，其表达浓度的改变能够通过影响到癌细胞的变形能力，进而参与到肿瘤细胞的浸润或者扩散等过程中[3]；血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达，能够促进新生血管的形成和肿瘤部位血管内皮细胞的移行等过程，增加肿瘤病灶组织的血流灌注量，促进肿瘤细胞的增殖及转移[4，5]。已有的相关研究揭示了VEGF在儿童肾母细胞瘤发生过程中的作用，认为VEGF的高表达是促进儿童肾母细胞瘤临床分期进展、病死率增加等的重要因素[6]，但对于Girdin的分析研究不足。为了进一步探讨Girdin、VEGF在影响儿童肾母细胞瘤发生过程中的作用，从而为临床上疾病的诊疗提供理论基础，本次研究选取2012年2月至2017年10月在我院治疗的肾母细胞瘤患儿52例，探讨了Girdin、VEGF与患者临床病理特征的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年2月至2017年10月在我院治疗的肾母细胞瘤患儿52例，其中男性30例，女性22例；年龄1～11岁，中位年龄3岁。纳入标准：⑴均经病理组织学确诊；⑵术前未行放化疗等治疗；⑶患儿监护人知情同意。排除标准：⑴临床病理资料欠缺；⑵合并有其他恶性肿瘤者。同时选取癌旁组织（距癌≥3cm）作为对照（镜下无癌细胞浸润）。

1.2 检测方法 石蜡切片脱蜡至水，过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2，室温10min（避光），10mMpH 6.0枸橼酸钠缓冲液），PBS冲洗5min，滴加正常山羊或兔血清封闭处理，37℃，15min。用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37℃2h，滴加生物素化的二抗，37℃，40min，PBS 冲洗 5min，DAB显色，苏木素复染，加拿大树胶（或中性树胶）封片。

1.3 结果判断 Girdin、VEGF表达以胞质染色棕黄色为阳性细胞。根据阳性细胞比例及染色程度进行判断，其中阳性细胞比例＜5%为0分，5%～10%为 1分，11%～50%为 2分，51%～75%为 3分，＞75%为4分；染色程度：不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分。阳性细胞比例与染色程度得分之积为最终结果，≥4分为阳性表达。

1.4 统计学处理 统计分析采用SPSS 19.0软件，计数资料比较使用χ2检验，相关性采用Spearman相关。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 肾母细胞瘤和癌旁组织Girdin、VEGF表达比较 肾母细胞瘤Girdin和VEGF蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织（P＜0.05），见表1和图1。

2.2 Girdin、VEGF表达与肾母细胞瘤临床病理特征的关系 Girdin蛋白阳性表达与肾母细胞瘤肿瘤直径、临床分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）；VEGF蛋白阳性表达与肾母细胞瘤临床分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）。 见表 2。

表1 肾母细胞瘤和癌旁组织Girdin、VEGF表达比较

2.3 相关分析 经Spearman相关分析，结果显示Girdin和VEGF蛋白表达无相关性（P＞0.05），见表3。

3 讨论

儿童肾母细胞瘤的发生主要与肾源性残留或者MT基因的突变等因素有关，特别是具有相关家族史的人群中，儿童肾母细胞瘤的发病率更高，临床预后更差[7，8]。现阶段临床上主要通过手术等方式治疗儿童肾母细胞瘤，但包括各种综合性方式治疗后患儿的病情缓解率水平或者临床预后等的改善并不理想[9，10]。本次研究通过对于儿童肾母细胞瘤发病过程中的病理标本组织中肿瘤相关因子的分析，能够为儿童肾母细胞瘤的靶向治疗提供参考，并为疾病的病因学研究提供依据。

Girdin对于肌动蛋白活性的影响，能够提高癌细胞的变形能力，增加癌细胞通过淋巴结、血行、直接浸润等方式进行扩散的风险，同时近年来相关基础方面的研究还显示，Girdin的表达可以通过对细胞周期依赖性蛋白激酶的调控作用，影响肿瘤细胞的周期，提高G1/S的比例，提高癌细胞快速跨越G0期的速度[11]；VEGF不仅能够协同刺激血管内皮细胞的迁移，促进局部病灶组织新生血管的形成，提高肿瘤病灶组织的血流灌注，同时VEGF的表达对于局部淋巴结窦的形成作用，能够诱导癌细胞局部富集效应，提高癌细胞通过淋巴结等进行转移的风险。现阶段临床上多数研究探讨了VEGF在消化系统、生殖系统、神经系统等恶性肿瘤发生过程中的作用，认为VEGF的高表达是促进患者临床病理特征恶化、放化疗敏感性下降等的重要因素，而对于儿童肾母细胞瘤中的VEGF的分析也相应证实了这一点，但缺乏对于Girdin与VEGF的相关关系的研究。

本次研究通过免疫组化研究方法分析了Girdin、VEGF蛋白的表达情况，结果发现Girdin、VEGF在儿童肾母细胞瘤患者病灶组织中的阳性表达率均显著上升，高于癌旁组织中相关蛋白的表达水平，提示了Girdin、VEGF均参与到了儿童肾母细胞瘤的发生过程中[12，13]：⑴Girdin对于肾母细胞瘤发生的影响主要与其对于肿瘤细胞浸润能力、突破基底膜的能力等的影响有关，同时也与Girdin对于肿瘤细胞的增殖过程的调控作用有关；⑵VEGF的高表达能够通过影响到新生血管内皮细胞的迁移及化生，促进新生血管的形成、增加血流灌注，为肿瘤细胞的DNA的扩增、转移等提供基础。王晗等[14]研究者在探讨了58例样本量的儿童肾母细胞瘤患者病灶组织中VEGF的表达阳性率后发现，VEGF的表达阳性率可较癌旁组织上升25%以上，同时在癌细胞分化较差、临床分期Ⅲ期或者Ⅳ期等患者中，VEGF的表达具有进一步的上升趋势。免疫组化染色可见，Girdin、VEGF二者均主要表达于癌细胞的细胞质或者细胞间质中，同时癌细胞的异型性越为显著，Girdin、VEGF的染色程度越深。Girdin、VEGF均与儿童肾母细胞瘤患者的临床分期或者淋巴结转移密切相关，同时Girdin还能够影响肿瘤病灶组织的直径，提示了二者与患者临床病情的关系，Girdin、VEGF对于临床分期或者淋巴结转移的影响主要在于其对于癌细胞的浸润或者淋巴结内皮细胞粘附能力的改变有关，而对于肿瘤直径的影响的机制不清，可能与Girdin对肿瘤细胞持续性增殖能力的影响有关。但部分研究者并不认为VEGF的表达与肾母细胞瘤患者的淋巴结转移有关[15]，考虑可能与病例入组标准、病程长短、检测试剂的敏感程度的不同等有关。

表2 Girdin、VEGF表达与肾母细胞瘤临床病理特征的关系

表3 相关分析

综上所述，儿童肾母细胞瘤中Girdin和VEGF表达增高，与患者的临床分期或者淋巴结转移等临床病理特征密切相关，可以作为进一步深入探讨的指标。