HPLC测定板蓝根颗粒中表告依春的含量

云南省红河州食品药品检验所，云南 蒙自 661100

板蓝根颗粒是采用板蓝根等中药材加工制成，具有清热解毒、凉血利咽功效，在肺胃热盛引起的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿痛等症状疾病治疗中具有较好的作用效果。其中，表告依春作为板蓝根颗粒抗病毒功效的主要成分之一，也是板蓝根颗粒质量检测控制的重要指标，通过对板蓝根颗粒中表告依春含量测定分析，能够有效鉴别和判断板蓝根颗粒的质量[1]。因此，采用高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中表告依春含量具有十分积极的作用和意义[2]。本研究采用高效液相色谱法对板蓝根颗粒中表告依春含量检测进行测定研究。报告如下。

1 仪器及材料

1.1 仪器 Agilent1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；DV215CD型号的电子天平(十万分之一,OHAUS)；BS110S型号的电子天平(万分之一，北京赛多利斯天平有限公司)；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 试剂板蓝根颗粒(批号：090624、090625、090626，蚌埠丰原涂山制药厂，每袋10 g，有蔗糖型)，表告依春(批号：100018-200107，中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)，水(蒸馏水)[3]等。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(15∶85)；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：245 nm；进样量：10 μL，以进行板蓝根颗粒中表告依春含量的检测分析。

2.2 供试品溶液的制备 精确称取样品2.0 g，加入75%乙醇25 mL，称定重量，超声提取30 min(频率为40 kHz，功率为250 W)，放置冷却，再称定重量，用75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜进行过滤，滤液作为供试品溶液[4]。

2.3 对照品溶液的制备 精确称量10.32 mg的表告依春对照品，放置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜进行过滤，得浓度为0.1032 mg/mL的对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按照处方比例将板蓝根去除后，根据相关制备工艺要求进行阴性样品制备，再按“2.2”方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 分别吸取上述2.2～2.4制备的三种溶液，按2.1的色谱条件进行检测分析，经分析后显示，供试品溶液的色谱图与对照品溶液的色谱图在相对应位置存在相同保留时间的色谱峰；此外可以看出，供试品溶液的色谱图与阴性对照溶液的色谱图对比，无相同保留时间的色谱峰值变化特征，表明阴性干扰不存在。如图1所示。

2.6 线性关系考察 精确量取2.3的对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、20.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液，并按“2.1”色谱分析条件进行检测分析，对不同进样量的色谱峰值变化进行记录，以表告依春对照品峰面积(Y)的变化与进样量(X)的关系进行线性回归分析。得回归方程为Y=105655.6X-0.73(r=0.9999)，表明表告依春在0.1032～2.064 μg范围内与峰面积具良好的线性关系。

2.7 精密度试验 取同一批次样品(批号: 090624)，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果表告依春峰面积的RSD为0.33%，表明仪器精密度良好。

2.8 溶液稳定性试验 取同一批次样品(批号: 090625)， 按“2.2”的方法制备供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 h时按“2.1”的色谱条件进样测定，记录峰面积。结果表告依春峰面积的RSD为0.85%，表明供试品溶液在24 h内较稳定。

2.9 重复性试验取 同一批次样品(批号: 090626)， 按“2.2”的方法制备供试品溶液，平行制备6份，按“2.1”的色谱条件进样测定。表告依春的平均含量为0.821 mg/g，RSD为1.0%，结果表明重复性良好。

2.10 回收率试验 精密称取6份供试品(批号: 090626，表告依春含量为0.821 mg/g)，每份约2.0 g，置具塞的锥形瓶中，分别加入表告依春对照品约10.0 mg，按“2.2”方法制备供试品溶液，按“2.1”的色谱条件进样测定。计算回收率。结果表告依春的平均回收率为99.20%，RSD(n=6)为0.94% 。

2.11 样品含量测定 取三个批次的板蓝根颗粒，按“2.2”方法制备供试品溶液，按“2.1”的色谱条件进样测定，计算含量。结果见表1。

表1

3 讨论

通过上述实验方法，对市场上多个生产厂家所生产板蓝根颗粒中表告依春含量检测分析显示，部分厂家生产的板蓝根颗粒中表告依春含量均比较低，甚至存在未检出表告依春含量的情况。由此可见，加强对市场上供应板蓝根颗粒中表告依春含量检测，有利于促进其产品质量控制，确保其作用功效发挥。

高效液相色谱法检测分析的流动相比例确定中，通过对多种比例对比分析显示，其比例设计为15∶85时，以甲醇-水为流动相的实验分析过程中能够实现表告依春峰达的较好分离，且峰形变化较好。

对高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中表告依春含量的可行性进行验证，有利于促进其在实践中的推广应用，对实现板蓝根颗粒生产质量的全面监控有积极作用，值得进一步研究。