高龄孕妇2 793例羊水产前诊断结果分析

郑 娇,程 璐,李春艳,徐 慧,唐苗苗,徐 盈,陈必良,张建芳

(空军军医大学第一附属医院妇产科,西安 710032;*通讯作者,E-mail:zhzhhao@163.com)

随着全面二胎政策的实施,高龄孕妇占妊娠人群的比例急剧增高。高龄孕妇是指预产期年龄≥35岁的孕妇,随着生育年龄的增大,染色体异常发生风险明显增高[1]。本文对2013-2018年来我院进行产前诊断的2 793例高龄孕妇羊水细胞检查结果进行回顾性研究,分析高龄以及高龄合并胎儿其他异常的孕妇情况及其染色体核型结果,探讨针对高龄孕妇产前筛查及诊断策略。

1 资料方法

1.1 临床资料

本研究选取2013-07～2018-09来我院进行产前诊断的高龄孕妇共2 793例,年龄34-55岁,产前诊断孕周为18-33周。经产前遗传咨询,孕妇及家属签署知情同意书后,进行羊水穿刺术及胎儿染色体核型分析。

1.2 样本采集

经B超引导定位,在无菌条件下,采用羊水专用穿刺针经腹部穿刺,抽取30 ml羊水。

1.3 染色体核型分析

将新鲜的羊水移入15 ml离心管1 500 r/min离心5 min,去上清留沉淀0.5 ml,分别接种于两个培养瓶中,加入羊水细胞培养基。由于羊水细胞生长方式为贴壁生长,5-7 d换液一次,一般培养8-10 d后收获细胞。用0.25%胰酶消化细胞,将细胞移入离心管中2 000 r/min离心,用含1%柠檬酸钠和0.075氯化钾(1 ∶1)的低渗液低渗15 min后,用3 ∶1的固定液(甲醇 ∶冰醋酸)预固定,1 500 r/min离心弃上清,再以3 ∶2的固定液(甲醇 ∶冰醋酸)固定两次后,常规制片,G显带,然后进行羊水细胞染色体核型分析。每份标本至少计数20个分裂相,分析5-10个核型。

2 结果

2.1 异常核型统计结果

2 793例高龄孕妇胎儿中,核型正常2 610例(93.4%),异常核型共183例(6.6%)。其中21三体综合征共计118例,占染色体异常总数的64.5%,其中包含单纯21三体113例、罗氏易位1例以及21三体嵌合体4例;18三体18例,占染色体异常总数9.8%;13三体2例,占异常总数1.1%;性染色体异常共计29例,占染色体异常总数15.8%,其中2例45,X,10例47,XXY,8例47,XXX,3例47,XYY,1例47,XXX/46,XX,1例47,XYY/46,XY/45,X,1例47,XXY/46,XY,1例46,XY/46,XX,1例46,XN,i(Xq)/45,X,1例46,X,inv(Y)?;结构异常14例,其中染色体易位7例,染色体片段缺失3例,12号染色体短臂等臂1例,衍生染色体3例;2例标记染色体即47,XN,+mar(见表1)。

表1染色体异常核型检查结果

Table1Statisticsoffetalabnormalkaryotypes

异常核型例数构成比(%)21三体11864.518三体189.813三体21.1性染色体异常2915.8结构异常147.7标记染色体21.1

2.2 高龄孕妇合并不同产前指征与染色体异常的关系

本研究通过总结2 793例高龄孕妇中,单纯高龄以及高龄孕妇合并胎儿B超异常、无创DNA检测结果异常、有不良孕产史等进行分类统计并分析各类中胎儿羊水核型染色体结果异常例数及在异常总数中所占比例(见表2)。单纯高龄中有99例异常核型,其中包含染色体易位8例(见表3);缺失46,XN,del(22)(q13.1)1例;衍生染色体3例(见表3);标记染色体47,XN,+mar 2例;性染色体异常共15例;21三体综合征66例;18三体综合征14例。高龄合并血清学异常中异常核型5例皆为21三体综合征。高龄合并羊水量异常中异常核型3例皆为21三体综合征。高龄合并心脏发育异常有4例异常核型,其中3例为21三体综合征;1例为47,XXX。高龄合并肠管发育异常包含1例21三体以及1例18三体。高龄合并骨骼发育异常仅1例核型结果异常,其结果为mos 47,XN,+idic(12)(q12)[40]/46,XN[10]即就是Pallister-Killian综合征。高龄合并神经系统异常有异常核型1例,为18三体综合征。高龄合并肾发育异常的核型结果皆正常。高龄合并无创异常有异常核型55例,其中21三体38例;13三体2例;18三体2例;8例47,XXY;4例47,XXX;1例47,XYY。高龄合并不良孕产史有2例异常核型,其中一例为46,XN,del(15)(q22)/46,XN;另外一例为46,XN,del(11)(q11)/46,XN。高龄合并其他异常含有1例21三体综合征,1例18三体综合征。

表2不同产前诊断指征异常核型检出情况表

Table2Abnormalkaryotypeindifferentprenataldiagnosis

产前诊断指征n异常核型(例)异常检出率(%)单纯高龄2237994.4高龄合并血清学异常36513.8高龄合并羊水量异常3339.1高龄合并心脏发育异常10144.0高龄合并肠管发育异常9222.2高龄合并骨骼发育异常1616.3高龄合并神经系统异常5911.7高龄合并肾发育异常1600高龄合并无创异常1005555.0高龄合并不良孕产史4924.1高龄合并其他异常13721.5

表3检出异常核型中结构异常核型表

Table3Structuralabnormalkaryotypesindetectedabnormalkaryotypes

结构异常 核型例数易位 46,XN,t(3;8)(p14;q22)146,XN,t(10;18)(q22.3;q23)146,XN,t(4;7)(q35;p15)146,XN,t(4;16)(q23;q23)145,XN,t(14;21)(p11;q11)146,XN,t(3;5)(q25.1;q23)/46,XN146,XN,t(1;16)(p33;q22.1)/46,XN1缺失 46,XN,del(22)(q13.1)146,XN,del(15)(q22)/46,XN146,XN,del(11)(q11)/46,XN1衍生染色体46,XN,9qh+,-18,+der(18)t(18;18)(p11.3;q11.2)146,XN,-15,+der(15)t(1;15)(q44;q26)147,XN,+der(22)(q11q23)1

3 讨论

高龄妊娠或高龄合并其他高危检查指征如血清学异常、超声异常、无创异常、不良孕产史或是夫妻双方染色体异常等是进行产前诊断的重要临床指征。目前,随着社会结构的变化,晚婚晚育以及二胎政策的实施,高龄孕妇的数量急剧增加,高龄孕妇出现不良孕产史、妊高症、低体重儿的发生率明显增高[2]。因高龄导致的出生缺陷率也随之升高,我们也将迎来新的挑战。

孕妇产前诊断的指征越多,出现染色体异常的机会也随之增加[3-5]。本研究总结染色体异常核型结果表明三体综合征所占异常核型总数的比例最高,尤其是21三体综合征[6]。这主要是因为随着年龄的增长,女性卵巢功能衰退,卵子老化引起质量下降,减数分裂期染色体分裂不均或不分裂,染色体畸变风险大幅增加。其中包括高龄妇女卵母细胞体内调控基因改变,使着丝粒相关蛋白合成缺陷;或是卵细胞减数分裂重组交换错误,最终导致染色体异常发生风险明显增高[7,8]。

衍生染色体是一种由两条以上染色体的重排或者是由于一条染色体发生多种畸变而产生的结构重排的染色体。多是由于胎儿父母存在染色体易位在减数分裂过程中不平衡分裂导致的,本研究中有3例染色体异常为衍生染色体,其中46,XN,9qh+,-18,+der(18)t(18;18)(p11.3;q11.2)该胎儿染色体微阵列分析结果为arr[GRCh37]18q11.2q23(23,295,110-74,955,167)x3,arr[GRCh37]18q23(74,967,857-78,013,728)x3,arr[GRCh37]18p11.32(136,227-1,426,361)x1即18号染色体长臂大部分三体,Decipher、ISCA、Clinvar等数据库及参考文献显示该区域的重复与先心病、神经系统发育异常、智力低下、肌张力高等多种临床表现相关[9,10]。核型为46,XN,-15,+der(15)t(1;15)(q44;q26)胎儿染色体微阵列分析结果为arr[GRCh37]1q44(244,635,855-249,224,684)x3,arr[GRCh37]15q26.1q26.3(91,559,244-102,429,040)x1,显示15号染色体15q26.1q26.3区域有约10.87 Mb的缺失,该缺失区域包含IGF1R、CHD2、RGMA等22个OMIM基因,参考文献表明CHD2基因单倍剂量不足与智力低下、癫痫相关,Pubmed、ISCA、Clinvar、Decipher等数据库及参考文献显示该区域缺失的患者有癫痫、语言障碍、行为异常、先心病、颅面部异常等临床表现[11,12]。核型结果为47,XN,+der(22)(q11q23)胎儿经过全基因组SNP微阵列分析结果为arr22q11.1q11.21(16,079,545-20,743,536)×3,显示22号染色体q11.1q11.21区带发生4.67 Mb重复,该区域内基因有POTEH、OR11H1、CCT8L2、TPTE、XKR3、HSFYP1、GAB4、CECR7、IL17RA等,与腭裂及心脏发育不全等临床表现相关。

异常核型mos 47,XN,+idic(12)(q12)[40]/46,XN[10]即就是12号染色体短臂等臂嵌合体,该12短臂四体的异常核型是Pallister-Killian综合征的典型表现,其患者可能有颅面部异常(如大前额、眼距宽、鼻梁短而扁平、鼻孔前倾、短颈)、发育迟缓、智力障碍、听力低下、癫痫、肌张力低、皮肤色素沉着、上下肢不匀称且较短、先天性心脏病等临床表现。在产前,PKS胎儿可能存在的超声异常情况如下:膈疝、胎儿水肿、胎儿超重、脑室增大、先天性心脏缺陷、胃部显示不清以及骨骼发育异常等。

综上所述,高龄是染色体异常发生的重要产前诊断检查指征之一,所以对高龄孕妇进行有效的遗传咨询指导,充分告知风险是十分必要的。随着产前诊断技术的发展,充分地将NIPT、羊水细胞核型分析及分子生物学手段运用于高龄孕产妇的产前诊断中去,从而防止出生缺陷,提高人口素质。