射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液对小儿咳嗽变异性哮喘的免疫功能影响及临床疗效观察

陈宏，宋瑜欣，于晓华，苏玉明，秦琪，延宇欣，贺紫薇，柳琳琳

慢性咳嗽是儿童呼吸门诊最常见的症状之一，发病原因多样，其中咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA) 是常见的原因之一。CVA主要的临床症状表现为常在夜间或清晨出现持续反复发作的咳嗽[1]。CVA疾病周期长，多由于空气，气候以及上呼吸道感染所诱发，常规治疗效果不佳[2]。本研究主要观察射干麻黄汤加减联合免疫调节剂脾多肽注射液对于小儿CVA的疗效以及对病儿免疫功能的影响，旨在探索治疗该疾病的更优治疗方法。

1 资料与方法

1.1一般资料将黑龙江中医药大学附属第一医院2015年2月到2016年12月收治的64例小儿CVA，按随机数字表法分成两组。其中观察组32例(男18例，女14例)，年龄范围为1.5～8.0周岁，年龄(4.76±0.57)周岁；对照组32例(男20例，女12例)，年龄范围为1.3～8.0周岁，年龄(4.98±0.66)周岁。两组资料均衡。每一位病儿在征得监护人同意下抽取外周血3 mL用以检测外周血T淋巴细胞，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求，所有病儿的监护人在取血液标本前均已签署知情同意书。

1.2诊断标准及治疗方法诊断标准：依据全国儿科哮喘协作组制订的儿童哮喘诊断治疗常规(试行方案)[3]中CVA的诊断如下：(1)常在夜间(或清晨)发作的咳嗽，持续反复超过1个月，运动后会加重， 临床无感染现象， 痰少，或经过长期抗生素治疗无效；(2)支气管扩张剂可缓解；(3)有个人过敏史或家族过敏史；(4)气道呈高反应性、变应原试验阳性等作辅助诊断。

治疗方法：对照组采用射干麻黄汤加减治疗。基本方为射干8 g，炙麻黄5 g，细辛3 g，大枣6 g，法半夏6 g，款冬花8 g，五味子5 g，紫菀8 g，生姜4 g，干地龙8 g，蝉衣5 g。临证加减：鼻痒、喷嚏连声者加辛荑花6 g，苍耳子6 g；久咳气虚无力者去细辛、生姜，加太子参10 g，白术10 g，黄芪10 g，牡蛎10 g；皮肤瘙痒、湿疹病史者加土茯苓10 g，刺蒺藜8 g；食欲不振者加神曲6 g，麦芽15 g。每天1剂，以水600 mL煎至150～200 mL，分2次服。观察组采用以上方子联合脾多肽注射液治疗，即在以上基本方加减的基础上，每日1次静脉滴注脾多肽注射液1支(溶于100 mL的0.9%氯化钠注射液，吉林丰生制药有限公司，产品规格为每支2 mL，生产批号20161215、20170606、20171105)，7 d为一个疗程。

1.3实验材料及测定方法实验材料：流式抗体CD3，CD4，CD8、CD25及Foxp3均为BD Bioscience公司产品；Cytofix/Cytoperm破膜固定试剂盒为BD Bioscience公司产品。

分离外周血单个核细胞(PBMC)方法：用EDTA抗凝血管采集抗凝血1支(3 mL)，离心3 500 r/min，10 min。生理盐水2∶1稀释血细胞，混匀。然后将稀释后的血液缓慢注入5 mL的淋巴细胞分离液上。离心750g，30 min，20 ℃。然后使用毛细吸管吸取中间白膜层(单个核细胞层)置于新的15 mL离心管中，再用干净的生理盐水清洗两次即可得到PBMC细胞。

流式细胞染色及其分析：将5×105的细胞转至EP管中，离心，去上清。取所需的流式抗体3～5 μL，于EP管中振荡混匀，加入细胞中，冰上或4 ℃冰箱避光反应25～30 min。结束后用PBS洗涤两次。然后使用500 μL PBS重悬细胞，转移至流式管中，上机分析。胞内染色时加入破膜固定剂，清洗时用破膜固定清洗液∶PBS=1∶9稀释，其他步骤相同。

1.4统计学方法应用数理统计软件SPSS 24.0进行统计分析。计数资料部分，组间比较采用χ2检验，计量资料部分，组间比较为成组t检验，组内前后比较为配对t检验。所有的统计检验均采用双侧检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组血清IgM、IgG和IgA水平的比较治疗前观察组和对照组的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG和IgA)差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，观察组的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG)较治疗前升高(P<0.05)，且高于对照组(P<0.05)(表1)。

表1 小儿CVA 64例治疗前后血清免疫球蛋白因子的两组比较

2.2两组外周血T淋巴细胞CD3+，CD4+及CD8+亚群比较治疗前观察组和对照组的外周血T淋巴细胞亚群(CD8+T细胞亚群)的比例差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，由于免疫系统的活性改善，免疫功能增强，观察组的CD3+T及CD4+T细胞亚群较治疗前比例均有明显升高(P<0.05)，且高于对照组(P<0.05)。观察组的CD8+T细胞亚群较治疗前降低(P<0.05)，且低于对照组(P<0.05)。患者的免疫抑制状态较前解除，故观察组的Treg细胞亚群(CD4+CD25+Foxp3+)较治疗前降低且低于对照组(P<0.05)(表2)。

表2 小儿CVA 64例治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的两组比较

2.3两组治疗效果比较观察组临床治愈率为46.9%，总体有效率为90.6%；对照组临床治愈率为31.2%，总体有效率为78.1%，两组临床治愈率、总有效率比较均差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表3 小儿CVA 64例治疗效果的两组比较/例(%)

3 讨论

小儿慢性咳嗽历来是临床上较为棘手的问题，因其发病原因多样。其中小儿CVA是最常见原因之一。尤其是近年来，全国各地空气质量下降，污染加剧，雾霾频发，该病的发病率有逐年上升的趋势[4]。本病主要特点以夜间或清晨阵发性咳嗽为主，无发热体征，病理改变以持续气道炎症与气道高反应性为特点，极大的影响了病儿正常的休息及健康成长[5]。对于本病，西医治疗有一定的缓解作用，但缺点是停药后易反复发作[6]。故探索一种治标且治本的方法来治疗本病尤为重要。

采用射干麻黄汤加减治疗哮喘由来已久，在既往的各种研究中已经证实，采用此方治疗小儿CVA是有效的。脾多肽提取自健康小牛的脾脏，然后运用复杂工艺将其制成分子量较小的多肽、游离氨基酸等组成的无菌水溶液[7-8]。脾多肽注射液能够激活和增强机体非特异性免疫，并促使T淋巴细胞分化成熟，增强机体的免疫功能[9-10]。在本研究中，主要目的是观察中西医结合的方法对于小儿CVA的治疗效果，并观察病儿的免疫功能的改变。我们发现，采用射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液治疗可以提高病儿外周血T淋巴细胞中CD3+及CD4+T淋巴细亚群胞的比例[11]，降低CD8+T及Treg亚群的比例，从而激活病儿免疫系统，增强免疫力[12-13]。其临床治愈率及总体有效率均高于对照组。本研究为我们在小儿CVA的临床治疗中提供了一种更优选择，即采用射干麻黄汤联合脾多肽注射液治疗。但是本研究的不足之处在于样本量较小，随访时间较短，所以目前尚需要更大样本量及多中心的研究来证实这一结论。