血清钙卫蛋白表达在类风湿性关节炎中的意义

陶 李，杜 明，王昱斌，李光迪

(兰州大学第二医院检验中心,甘肃兰州 730000)

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性、自身免疫性疾病，目前病因不明。临床多表现为手、足小关节的对称性、侵袭性炎症。免疫细胞的激活，炎症介质的浸润，在RA的发生发展中扮演至关重要的角色[1-2]。钙卫蛋白是由S100A8和S100A9两种钙结合蛋白组成的异源二聚体。作为一种炎症性蛋白质，其血清水平会在组织出现损伤或炎症时升高[3-4]。有研究指出钙卫蛋白在RA患者滑膜及滑液中高表达，其可能参与RA的致病过程[5-6]。本研究通过分析RA患者血清钙卫蛋白水平，探讨其与RA患者临床疾病活动度及实验室相关参数[C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子-IgM (RF-IgM)]之间的联系，从而为RA患者临床病情评估提供新的思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年10月至2018年5月在兰州大学第二医院风湿免疫科住院的诊断明确的70例RA患者(RA组)，诊断标准符合2010版美国风湿病学院/欧洲抗风湿病联盟制定的RA诊断标准[7]。其中女61例，男9例，平均年龄(57.98±9.68)岁。同时根据DAS28评分标准，将RA组患者分为3组，分别为高疾病活动组(DAS28>5.1分),中疾病活动组(3.2分0.05)。两组受试者无高血压、心脏病、糖尿病等慢性系统性疾病，并排除合并其他自身免疫系统性疾病，且心、肝、肾等重要脏器功能均正常。本次研究获得兰州大学第二医院伦理委员会批准，所有患者签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1临床及实验室资料的收集 通过兰州大学第二医院患者数据库对70例RA患者的临床及实验室相关资料进行整理收集。包括：(1)患者一般情况;年龄、性别、疾病持续时间；(2)患者临床信息：疼痛持续时间、晨僵持续时间、28肿胀和疼痛关节计数(28-SJC和28-TJC)、患者全身模拟评分(100-mm VAS)；(3)患者实验室相关指标： CRP、ESR、RF-IgM、抗CCP抗体。计算DAS28评分[8]。

1.2.2钙卫蛋白定量检测 收取RA患者的血清样本，-80 ℃保存直到使用时取出，避免反复冻融。采用人钙卫蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(武汉华美)检测血清钙卫蛋白水平。首先每孔加标准品或待测样本100 μL，覆盖板贴，37 ℃孵育2 h。每孔加生物素抗体工作液100 μL，覆盖新板贴，37 ℃孵育1 h。洗涤，每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100 μL，覆盖新板贴，37 ℃孵育1 h。洗涤，每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光显色15 min。每孔加终止液50 μL，5 min内用酶标仪(北京朗普)在450 nm波长依次测量各孔的光密度(OD值)。

2 结 果

2.1RA患者及健康对照组血清钙卫蛋白水平测定 RA患者平均血清钙卫蛋白水平[(108.91±113.15)ng/mL]明显高于健康对照组[(8.33±1.98)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05)],见图1。低疾病活动组RA患者血清钙卫蛋白水平[(19.89±14.29)ng/mL]与健康对照组之间比较差异无统计学意义(P=0.071)。中疾病活动组和高疾病活动组血清钙卫蛋白水平分别为[(77.35±99.79)ng/mL]和[(216.39±85.83)ng/mL]，均显著高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。高疾病活动组较中疾病活动组也有明显升高，差异有统计学意义(P<0.05),见图2。

图1 RA组与健康对照组血清卫蛋白表达

图2 不同疾病活动度RA组患者钙卫蛋白的表达

2.2RA患者血清钙卫蛋白表达与临床相关指标的相关性分析 RA患者血清钙卫蛋白水平与28肿胀关节计数(r=0.652,P<0.05)，28疼痛关节计数(r=0.633,P<0.05)，DAS28评分(r=0.581,P<0.05)，RF-IgM(r=0.438,P<0.05)相关，而与CRP、ESR、抗-CCP抗体水平，疾病持续时间和年龄无相关性。见表1。

表1 RA患者血清钙卫蛋白水平与其临床和实验室指标相关性

2.3以DAS28为因变量进行多元线性回归分析 钙卫蛋白、血沉与其呈正相关，而CRP、年龄、性别、病程与其不相关。即在矫正CRP、ESR、年龄、性别、疾病持续时间后，钙卫蛋白与DAS28评分相关性(P<0.05)依然存在。并且结果还提示钙卫蛋白对于DAS28评分的相关性要优于CRP与ESR。

3 讨 论

RA是一种多病因引起的慢性、炎症性自身免疫性疾病，它可以导致关节的破坏和功能的丧失[9]。对于RA患者来说，疾病活动性的监测在疾病的治疗中尤为重要。使用传统的实验室指标如CRP和ESR反映RA疾病的活动性，因为它们只是间接反映了局部炎症的程度[10]，特异度和灵敏度都不够理想。因此，迫切需要寻找用于诊断和评估RA疾病活动的特异性血清学标志物。

钙卫蛋白-属于S100钙结合蛋白家族。其由中性粒细胞、树突状细胞、激活的巨噬细胞、血管内皮细胞、血小板及成纤维细胞中表达分泌[11]。钙卫蛋白约占中性粒细胞胞质蛋白的45%，单核细胞胞质蛋白的1%[12]。在细胞内，钙卫蛋白通过以钙依赖性方式促进微管蛋白聚合并稳定微管蛋白，从而促进吞噬细胞迁移。在细胞外主要是从活化的或坏死的中性粒细胞和单核/巨噬细胞中释放，作为炎症蛋白质参与多种自身免疫性疾病的致病过程[13]。并且钙卫蛋白能直接反映RA患者滑膜和滑液的炎症活动[14]。HURNAKOVA等[15]发现在反映RA患者炎症方面，钙卫蛋白比CRP更加敏感。CHOI等[16]研究认为监测RA患者血清中钙卫蛋白的表达可以用来评估RA患者药物的疗效。另有研究者发现钙卫蛋白与超声滑膜炎评分相关，而且可以用于预测RA患者影像学的相关进展[17]。HAMMER等[18]的报道中显示RA患者血清钙卫蛋白与其抗-CCP抗体水平和RF-IgM水平相关。而最新研究表明RA患者血清钙卫蛋白水平与其RF-IgM水平相关，但是与抗-CCP抗体水平没有相关性[14]，不同研究结果的出现可能与他们选择的患者接受了不同的药物治疗有关。具体结论还需要进一步研究。

本研究结果显示，RA患者血清钙卫蛋白的表达水平明显高于健康人群，显示出血清钙卫蛋白可能参与RA的发生发展。为了验证RA患者血清钙卫蛋白水平是否与其临床疾病活动程度和实验室特异性指标相关联，将70例RA患者根据DAS28评分分为3组。结果显示，高疾病活动组患者具有更高的钙卫蛋白水平。在相关性分析中，RA患者血清钙卫蛋白水平与其28肿胀关节计数、28疼痛关节计数、DAS28评分、RF-IgM水平呈正相关。在以DAS28评分为因变量的多元线性回归分析中，发现在矫正年龄、性别、疾病持续时间、CRP、CER后，钙卫蛋白水平与DAS28评分依然具有良好的相关性。同时结果还提示，钙卫蛋白与DAS28评分的相关性优于传统实验室指标CRP与ESR。这说明RA患者血清钙卫蛋白水平与其临床疾病活动性和实验室特异性标志物之间存在密切关系。

由于本研究只进行了横向的观察性研究，同时样本含量相对较小，还需要更大样本的深入研究来进一步验证相关结论。同时，还可对钙卫蛋白作为RA患者诊断、预后评估、药物疗效预测及治疗靶点的可能性进行探索。

综上所述，血清钙卫蛋白水平与RA实验特异性指标和临床疾病活动度之间存在密切关系，对评估和监测RA患者病情有重要的指导和参考意义。