布鲁氏菌活疫苗（M5）免疫试验——多浪羊抗体消长规律研究

靳红娟，叶 锋，刘丽娅，陈雅璐，张 悦，陈泽辉，李欣宇，谷文喜，钟 旗，姚 刚 ，王 延

（1. 新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2. 新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000）

多浪羊是新疆的一个优良肉脂兼用型地方绵羊品种，又称麦盖提羊，由新疆南疆地区维吾尔族人民长期选育而成，是新疆重点保护并大力推广的优良地方种肉羊品种[1]，具有性清温顺、体格大、生长发育快、产肉率高、毛质较好、繁殖力强、遗传性稳定等优点，目前主要以圈舍饲养或戈壁滩放牧的方式养殖[2]。

目前，由于牲畜流通加速，而疫病防疫、检疫、净化等措施跟不上，造成新疆各地区布鲁氏菌病疫情较为严重[3-4]。尽管现有动物布鲁氏菌病疫苗有一些不足之处，但疫苗免疫对布鲁氏菌病的防控还是发挥了重大作用。本试验通过探索多浪羊对布鲁氏菌活疫苗（M5）能否产生良好的免疫反应以及免疫后的抗体消长规律，为多浪羊布鲁氏菌病免疫以及免疫后自然感染和免疫的区分提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源 新疆南疆地区某行政村未免疫布鲁氏菌疫苗的多浪羊100只，全部采血；免疫后30、90、180 d，各随机采集30只羊全血，分离血清，4 ℃备用。

1.1.2 试剂 布鲁氏菌活疫苗（M5）：购自新疆天康生物技术股份有限公司；羊血清稀释液（0.5%石碳酸、10% NaCl）：自行配制；布鲁氏菌虎红凝集抗原、布鲁氏菌试管凝集抗原：购自中国兽医药品监察所；布鲁氏菌标准阳性血清、标准阴性血清：购自黑龙江省生物制品一厂。

1.1.3 器材 洁净玻璃板、微量移液器、灭菌移液器枪头、计时器、玻璃试管、试管架、温箱（37℃）。

1.2 方法

1.2.1 免疫 按照布鲁氏菌活疫苗（M5）使用说明书进行。

1.2.2 检测方法 采用RBT、SAT方法，严格按照国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646—2018）进行。

2 结果

2.1 免疫前血清学检测

对100只多浪羊免疫前血清进行布鲁氏菌检测，用RBT初筛出1份阳性血清，后用SAT确诊为阴性，表明100份多浪羊免疫前血清全为阴性。

2.2 免疫后抗体检测

2.2.1 RBT检测 对免疫后随机采集的血清样品，应用RBT进行抗体检测，发现免疫30 d后，80.00%的样品检测到免疫抗体，90 d后只有13.33%还能检测到免疫抗体，180 d后所有样品均为阴性（表1）。

表1 多浪羊免疫布鲁氏菌活疫苗（M5）后的RBT抗体检测结果

2.2.2 SAT检测 对免疫后随机采集的血清样品，应用SAT进行抗体检测，发现免疫30 d后，73.33%的样品检测到免疫抗体，且抗体滴度基本保持在1:200，90 d后只有13.33%还能检测到免疫抗体，且大多数多浪羊抗体滴度开始下降或消失，180 d后所有样品均为阴性（表2、表3）。

表2 多浪羊免疫布鲁氏菌活疫苗（M5）后的SAT抗体检测结果

表3 多浪羊免疫布鲁氏菌活疫苗（M5）后的SAT抗体滴度

3 分析与讨论

试验结果表明，布鲁氏菌活疫苗（M5）皮下注射免疫后，多浪羊免疫前后的血清抗体出现了明显变化。免疫30 d后，大多数多浪羊产生了免疫抗体，且抗体滴度基本保持在1:200，这说明布鲁氏菌活疫苗（M5）可以作为多浪羊布鲁氏菌病免疫的首选疫苗。但90 d后多浪羊免疫抗体水平已大幅下降，大多数多浪羊体内抗体滴度明显下降甚至消失，180 d后已无抗体存在，由此初步认为多浪羊的布鲁氏菌活疫苗（M5）免疫抗体持续期为180 d。

布鲁氏菌活疫苗（M5）免疫180 d后，可以对布鲁氏菌病可疑羊群使用RBT初筛、SAT确诊的方法，进行免疫羊群中感染羊的检测，这样可以解决感染与免疫无法有效区分的问题。

布鲁氏菌是细胞内寄生菌。宿主感染后会引起细胞免疫和体液免疫。细胞免疫是清除细胞内细菌最有效的防御反应[5]。布鲁氏菌病的免疫保护主要体现在细胞免疫水平，免疫抗体水平的检测只是对疫苗是否免疫成功的一个反应指标，因此抗体水平与畜群机体保护力不呈正相关。

本试验用布鲁氏菌活疫苗（M5）免疫多浪羊30 d后，经RBT检测，发现抗体转阳率为80.00%。据李建玲等[6]、何彦春等[7]报道，布鲁氏菌活疫苗（M5）免疫30 d后，经RBT检测抗体转阳率为100%，与本试验结果不一致。这可能与羊品种和地域不同有关，需要进一步验证。本试验没有进行攻毒保护性试验，血清抗体效价与实际免疫效果是否一致，有待于进一步研究。