瑶药过墙风的化学成分研究

罗 迪，黄云峰，谢集照，黄清泉，邱 莉

（1.广西医科大学药学院，广西 南宁 530021；2.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；3.广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 530021）

过墙风为马鞭草科大青属植物臭茉莉（Clerodendrum philippinum Schauer var. simplex Moldenke）的全株，别名臭芙蓉、臭屎茉莉等，主要分布在广西、贵州等地区，广西瑶族群众长期使用过墙风的根、枝叶入药，具有祛风除湿、活血止痛、清热解毒等功效［1］。相关文献表明过墙风枝叶中主要含有黄酮类、萜类及甾醇类成分，具有抗氧化、护肝、抑菌等生物活性［2-6］。为了进一步阐明过墙风的化学成分，本课题组对过墙风的乙醇提取物进行了分离纯化，从中分离鉴定了8个化合物，所有化合物均为首次从过墙风中分离得到，现将结果报道如下。

1 仪器与材料

Bruker Avance Ⅲ-600 型核磁共振仪（Bruker 公司）；分析型HPLC 为岛津LC-20A，色谱柱为WondaSil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，日本GL Science公司），检测器为PDA；制备型HPLC 为岛津LC-6AD，色谱柱为YMC-Pack ODS-A（250 mm×20 mm，10 μm，日本YMC公司），检测器为SPD-20A；Sephadex LH-20（美国Pharmacia 公司）；MCI（75～150 μm，日本Mitsubishi 公司）；ODS（40～63 μm，德国Merck公司）；柱色谱用硅胶（200～300目，青岛海洋化工有限公司）；其他试剂均为分析纯。

过墙风新鲜枝叶于2016 年采自广西壮族自治区贺州市八步区莲塘镇，经广西中医药研究院黄云峰副研究员鉴定为马鞭草科大青属臭茉莉Clerodendrum philippinum Schauer var.simplex Moldenke 的枝叶，药材标本（GQF-01）存放于广西医科大学药学院天然药物化学实验室。

2 提取与分离

将干燥的过墙风茎叶13.8 kg 用10 倍量的80%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩得乙醇提取物2.0 kg。乙醇提取物经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇梯度洗脱），按TLC检测，合并洗脱液得到7个组分Fr.1～7。Fr.2（49.6 g）经硅胶柱色谱（环己烷-乙酸乙酯100∶0→0∶100）分离得到10 个组分Fr.2A～2J。Fr.2C 经硅胶柱色谱（环己烷-氯仿-乙酸乙酯40∶0.5∶0.8→0∶0∶1）、Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）分离得到化合物6（21.4 mg）。Fr. 2E（9.3 g）经Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）分离得到2 个组分Fr.2E1～2E2。Fr. 2E2（4.2 g）经硅胶柱色谱（环己烷-氯仿-乙酸乙酯50∶5∶8→5∶5∶8）分离得到3 个组分Fr.2E2A～2E2C。Fr.2E2C用甲醇重结晶后得到化合物2（34.3 mg）。Fr. 2F（1.5 g）经Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）分离得到3 个组分Fr. 2F1～2F3。Fr. 2F3 用甲醇重结晶后得到化合物1（57.5 mg）。Fr.2G（9.5 g）经Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）分离得到4 个组分Fr. 2G1～2G4。Fr. 2G2（2.4 g）经ODS 柱色谱（甲醇-水10∶90→100∶0）分离得到5 个组分Fr. 2G2A～2G2E。Fr. 2G2B（478.3 mg）经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇）、半制备HPLC（甲醇-水40∶60）分离得到化合物8（16.1 mg，tR= 22 min）。Fr. 2G2C（384.7 mg）经半制备HPLC（甲醇-水65∶35）分离得到化合物3（30.8 mg，tR=15 min）。Fr.2G2D（606.5 mg）经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇）、半制备HPLC（乙腈-水55∶45）分离得到化合物4（18.6 mg，tR=50 min）、化合物5（85.6 mg，tR=62 min）。Fr.2H（11.3 g）经MCI 柱色谱（甲醇-水10∶90→100∶0）、Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）、ODS柱色谱（甲醇-水5∶95→100∶0）及反复硅胶柱色谱（环己烷-乙酸乙酯10∶1）分离得到化合物7（97.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色针状结晶（氯仿-甲醇）。1HNMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 12.93（1H，s，5-OH），10.85（1H，brs，7-OH），8.04（2H，d，J = 8.9 Hz，H-2'，6'），7.11（2H，d，J=8.9 Hz，H-3'，5'），6.68（1H，s，H-3），6.51（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），3.86（3H，s，4'-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ： 163.3（C-2），103.5（C-3），181.8（C-4），161.4（C-5），98.9（C-6），164.2（C-7），94.0（C-8），157.3（C-9），103.7（C-10），122.8（C-1'），128.3（C-2'，6'），114.6（C-3'，5'），162.3（C-4'），55.5（4'-OCH3）。以上数据与文献报道基本一致［7］，故鉴定化合物1为刺槐素。

化合物2：黄色针状结晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：13.09（1H，s，5-OH），10.78（1H，brs，7-OH），8.08（2H，d，J=8.9 Hz，H-2'，6'），7.15（2H，d，J=8.9 Hz，H-3'，5'），6.91（1H，s，H-3），6.66（1H，s，H-8），3.91（3H，s，6-OCH3），3.81（3H，s，4'-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：163.3（C-2），103.0（C-3），182.1（C-4），152.7（C-5），131.4（C-6），157.3（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），104.1（C-10），122.8（C-1'），128.3（C-2'，6'），114.6（C-3'，5'），162.2（C-4'），59.9（6-OCH3），55.5（4'-OCH3）。以上数据与文献［8］报道基本一致，故鉴定化合物2为柳穿鱼黄素。

化合物3：黄色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 13.07（1H，s，5-OH），10.51（1H，brs，7-OH），10.35（1H，brs，4'-OH），7.92（2H，d，J = 8.8 Hz，H-2'，6'），6.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5'），6.78（1H，s，H-3），6.59（1H，s，H-8），3.75（3H，s，6-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6）δ： 163.8（C-2），102.4（C-3），182.1（C-4），152.7（C-5），131.3（C-6），157.3（C-7），94.2（C-8），152.4（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1'），128.4（C-2'，6'），115.9（C-3'，5'），161.1（C-4'），59.9（6-OCH3）。以上数据与文献报道基本一致［9］，故鉴定化合物3为粗毛豚草素。

化合物4：淡黄色晶体（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 13.33（1H，s，14-OH），5.01（1H，s，11-OH），4.97（1H，m，H-16），3.64（1H，m，H-17a），3.57（1H，m，H-17b），3.36（1H，m，H-1a），3.10（1H，dd，J=15.3，9.7 Hz，H-15a），2.92（1H，dd，J=15.4，7.1 Hz，H-15b），2.66（1H，dd，J=17.0，14.7 Hz，H-6a），2.39（1H，dd，J=17.2，2.5 Hz，H-6b），1.67（1H，dd，J=14.6，2.5 Hz，H-2a），1.67（1H，dd，J=14.6，2.5 Hz，H-5），1.47（1H，m，H-2b），1.42（1H，m，H-3a），1.30（3H，s，20-CH3），1.23（1H，m，H-3b），1.19（1H，m，H-1b），0.91（3H，s，19-CH3），0.90（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：35.8（C-1），18.6（C-2），40.7（C-3），32.9（C-4），49.7（C-5），34.9（C-6），204.2（C-7），109.3（C-8），140.9（C-9），40.3（C-10），131.7（C-11），154.5（C-12），110.8（C-13），157.8（C-14），28.1（C-15），85.7（C-16），62.8（C-17），33.1（C-18），21.4（C-19），17.3（C-20）。以上数据与文献报道基本一致［10］，故鉴定化合物4为Villosin B。

化合物5：黄色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：13.92（1H，s，14-OH），6.82（1H，s，H-15），4.73（2H，s，H-17），3.34（1H，m，H-3a），2.66（2H，m，H-6），1.84（1H，dd，J=12.4，5.0 Hz，H-5），1.75（1H，m，H-2a），1.60（1H，m，H-2b），1.50（1H，m，H-1a），1.45（1H，m，H-3b），1.41（3H，s，19-CH3），1.29（1H，dt，J=13.7，3.9 Hz，H-1b），0.98（3H，s，20-CH3），0.96（3H，s，18-CH3）；13CNMR（150 MHz，CDCl3）δ： 40.9（C-1），19.2（C-2），37.0（C-3），41.0（C-4），50.0（C-5），35.9（C-6），206.6（C-7），111.2（C-8），135.0（C-9），33.7（C-10），131.8（C-11），155.7（C-12），116.2（C-13），154.0（C-14），103.8（C-15），150.9（C-16），57.7（C-17），33.3（C-18），18.7（C-19），21.8（C-20）。以上数据与文献报道基本一致［11］，故鉴定化合物5为12，17-epoxy-11，14，16-trihydroxy-17（15→16）-abeo-abieta-8，11，13，15-tetraen-7-one。

化合物6：白色片状晶体（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 5.34（1H，m，H-6），5.24（1H，dd，J=15.2，8.2 Hz，H-22），5.17（1H，dd，J=15.2，7.6 Hz，H-23），4.69（2H，m，H-27），3.52（1H，m，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 37.4（C-1），31.8（C-2），72.0（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.1（C-7），32.1（C-8），50.3（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.8（C-12），42.5（C-13），57.0（C-14），24.5（C-15），28.9（C-16），56.0（C-17），12.2（C-18），19.6（C-19），40.3（C-20），21.0（C-21），137.2（C-22），130.2（C-23），52.1（C-24），148.8（C-25），20.4（C-26），109.7（C-27），25.9（C-28），12.3（C-29）。以上数据与文献报道基本一致［12］，故鉴定化合物6为3β-stigmasta-4，22，25-trien-3-ol。

化合物7：淡黄色蜡状固体（环己烷-乙酸乙酯）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 5.72（1H，s，H-4），5.23（1H，dd，J=15.3，8.2 Hz，H-22），5.18（1H，dd，J=15.2，7.3 Hz，H-23），4.70（1H，s，H-26a），4.69（1H，s，H-26b），1.65（3H，s，27-CH3），1.18（3H，s，19-CH3），1.01（3H，d，J=6.6 Hz，21-CH3），0.83（3H，t，J=7.4 Hz，29-CH3），0.72（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 35.9（C-1），34.1（C-2），199.7（C-3），123.9（C-4），171.7（C-5），33.1（C-6），32.2（C-7），35.8（C-8），54.0（C-9），38.8（C-10），21.2（C-11），39.7（C-12），42.5（C-13），56.1（C-14），24.4（C-15），28.8（C-16），56.0（C-17），12.3（C-18），17.5（C-19），40.3（C-20），20.9（C-21），137.1（C-22），130.4（C-23），52.1（C-24），148.7（C-25），109.7（C-26），20.4（C-27），25.9（C-28），12.3（C-29）。以上数据与文献报道基本一致［13］，故鉴定化合物7为（22E，24R）-stigmasta-4，22，25-trien-3-one。

化合物8：黄色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：9.88（1H，s，3-CHO），8.14（1H，d，J=7.7 Hz，H-5），8.08（1H，s，H-2），7.46（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），7.26（1H，td，J=8.2，1.4 Hz，H-7），7.22（1H，td，J=7.5，1.1 Hz，H-6）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 139.7（C-2），120.1（C-3），187.4（3-CHO），123.6（C-4），122.4（C-5），125.0（C-6），113.1（C-7），125.7（C-8），138.9（C-9）。以上数据与文献报道基本一致［14-15］，故鉴定化合物8为3-吲哚甲醛。

4 讨 论

本实验运用各种色谱分离手段对广西瑶药过墙风的化学成分进行了研究，从其乙醇提取物中分离鉴定得到8个化合物，包括3个黄酮类化合物（1～3）、4个萜类化合物（4～7）和1 个吲哚类化合物（8）。化合物1、2具有抗肿瘤活性［16-17］，化合物3、4对癌细胞具有一定的细胞毒性［10，18］。本课题组对过墙风化学成分的研究结果可为进一步开展过墙风生物活性的研究提供参考。