LC－MS／MS法测定鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留

张 昕，屈俊成，王 丹，左英芳，张慧利

（焦作市畜产品质量安全监测中心，河南 焦作 454003）

1 实验材料

1.1 仪器设备

液相色谱-串联质谱仪（美国Waters公司Waters Acquity UPLC-Xevo TQ-S）；离心机；电子天平（感量0.01g）；分析天平（感量0.00001g）；涡旋混合器；固相萃取装置；HLB固相萃取柱（60mg，3mL）。

1.2 试剂

（盐酸）环丙沙星、甲磺酸达氟沙星、恩诺沙星、（盐酸）沙拉沙星、甲磺酸培氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星对照品；氢氧化钠；磷酸；三乙胺；磷酸二氢钾；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；超纯水。

1.3 标准溶液

1.3.1 标准储备溶液（1 mg/ml）

分别称取盐酸环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、甲磺酸培氟沙星对照品各约25 mg（按单体计）于25ml容量瓶中，用0.03 mol/L氢氧化钠溶液溶解定容至刻度。有效期3个月。

1.3.2 标准中间工作溶液（200 ng/ml）

量取1 mg/ml的标准储备溶液适量，用0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）稀释至200 ng/ml。

1.3.3 基质标准工作溶液（2 ng/ml）的制作

量取200 ng/ml的标准中间工作溶液0.1 ml，加0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）0.9 ml；量取上述溶液0.1 ml，加空白样品提取净化液0.9 ml。

2 检验方法

2.1 样品前处理过程

取2 g试料置于50 ml离心管中，加入磷酸盐缓冲液9.0ml，涡旋混合，中速振荡10 min，14000r/min离心10 min，倾取上清液于另一离心管中，残渣用磷酸盐缓冲液9.0 ml重复提取一次。合并两次上清液，混匀。在合并的提取液中加正己烷15 ml，涡旋混合5 min，14000 r/min离心10 min，取下层清液5 ml备用。若下层不澄清则再脱脂1次。

HLB固相萃取柱依次用甲醇、磷酸盐缓冲液各2 ml预洗。取上清液5.0 ml过柱，水2 ml淋洗，挤干。0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（75+25）2.0 ml洗脱，挤干。过0.22μm微孔滤膜过滤后供测定。

2.2 添加回收样的制作

称取空白样品2.00g（±0.02g）于50ml离心管中，准确吸取200 ng/ml标准工作溶液80 μl添加到空白样中，制成添加量为8 μg/kg的样品。然后按2.1方法进行前处理。

2.3 仪器参数与测定

2.3.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLCTMBEH C18柱（2.1×100mm，1.7μm）；柱温：35℃；进样量：2μl；流速：0.3mL/min；流动相：A相乙腈，B相0.1%甲酸溶液梯度洗脱。

2.3.2 质谱条件

离子源：电喷雾ESI；扫描方式：正离子扫描；采集模式：多反应监测MRM；毛细管电压：0.5kV；锥孔电压：50V；源温：150℃；脱溶剂气温度：500℃；锥孔气流速：150L/h；雾化气流速：1000 L/h；准确质量数在每次实验前进行调谐确认。

2.3.3 定量方法

用空白样品提取净化液稀释混合标准工作液，配制成基质对照品，采用单点校正，按外标法以峰面积比计算。

3 结果与讨论

3.1 样品前处理过程的优化

鸡蛋样品中脂防和蛋白质含量高，对药物残留测定结果影响较大、选择并优化样品前处理方法对结果准确性尤为重要。本方法中鸡蛋样品加入磷酸盐缓冲液振荡提取、最后经高速离心将蛋白质和其他颗粒物沉淀，能有效的减少样品中蛋白质等杂志的干扰，利用正已烷对脂肪进行二次抽提，减少了脂防对样品检测过程的影响，利用样品前处理过程的液体稀释倍数关系折合样品前处理的损失，对整个实验的回收率有明显的提升效果。

3.2 加标回收率及精密度

空白样品经测定，不含氟喹诺酮类，在其中添加不同浓度的混合标准溶液（添加浓度5～50μg/kg）的回收率为60%～110%，批内相对标准偏差≤15%，表明该方法回收率和精密度满足兽药残留检测需要。

3.3 检验过程注意事项

合并提取液后，需混合均匀，再取出部分净化，若提取液浑浊，需再次离心；不同厂家固相萃取柱含碳量不同，应选择含碳量≥17%的固相萃取柱；采用3mL固相萃取柱净化，有效减少堵塞现象；定量时，需用同种基质的样品做基质对照溶液来校正，以消除基质效应。

3.4 结论

本方法建立了鸡蛋样品中7种氟喹诺类药物残留的液质联用检测方法，方法灵敏度高，准确率高，适用于鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测分析。